与狂犬病病毒P 蛋白互作宿主蛋白的筛选与鉴定

狂犬病病毒(RV)P蛋白是一个多功能蛋白,为了筛选与P蛋白互作的宿主蛋白,本研究克隆了RV SAD-L16株的P基因并测序分析,构建原核表达载体pET42b-P,通过双酶切鉴定后经原核系统表达P蛋白并经western blot鉴定。采用DNAStar软件分析P蛋白的二级结构。采用噬菌体展示技术从人脑组织T7噬菌体cDNA文库中筛选与P蛋白互作的宿主蛋白并经PCR、测序鉴定和BLAST比对;进一步采用ELISA验证与P蛋白互作的宿主蛋白。经测序结果显示,扩增的SAD-L16株P基因全长894 bp,编码297个氨基酸,二级结构分析结果表明其编码的P蛋白亲水性很强,柔韧性和抗原性均较好;从人脑组织T7噬菌体cDNA文库中筛选并经测序鉴定共淘选出18种与P蛋白存在互作的宿主蛋白,通过基因序列与噬菌体载体序列对比分析确定表达框正确的候选互作宿主蛋白有5种;ELISA结果显示,这5种蛋白均有可能与P蛋白互作,其中以泛素特异性肽酶54和核糖体蛋白L15的作用更强。本实验为进一步研究P蛋白生物学功能及RV致病机理提供参考依据。