基于MAPK/NF-κB信号通路探讨独活挥发油对KOA兔关节软骨的保护作用

目的 观察独活挥发油(VOOA)对兔膝骨关节炎(KOA)的疗效并探讨其作用机制。方法 将30只6月龄日本大耳白兔随机分为空白组(Control组)、假手术组(Sham组)、模型组(KOA组)、独活挥发油给药组(KOA+VOOA组)和阳性对照药硫酸氨基葡萄糖组(KOA+CMC组),每组6只。除Control和Sham组,其余各组采用右膝关节前交叉韧带切断术(ACLT)建立兔KOA模型。造模成功后,KOA+VOOA组(0.2 ml/kg)和KOA+CMC组(15 mg/kg)通过灌胃给药,连续32 d,其余组给予等量生理盐水。给药结束后,处死,取材。肉眼观察各组软骨及滑膜组织;苏木精-伊红和番红固绿染色观察软骨组织形态学变化,并进行Mankin评分;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和关节液中白细胞介素(IL)-1、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和转化生长因子β(TGF-β)的变化;蛋白免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测软骨组织中p-MAPK和p-NF-κB蛋白及mRNA的表达变化。结果 与Control及Sham组相比,KOA组Mankin评分显著降低(P<0.01),软骨丢失严重,血清及关节液中IL-1、IL-1β、TNF-α显著升高(均P<0.01),TGF-β则无显著变化,p-MAPK和p-NF-κB蛋白及mRNA显著上调(P<0.01)。VOOA和CMC给药显著逆转了上述情况,各评价参数与KOA组相比差异均有统计学意义。结论 VOOA可有效保护KOA兔的软骨组织,其机制可能与阻断MAPK/NF-κB信号通路有关。

独活挥发油关节腔注射对实验性兔膝骨性关节炎的影响

目的探讨独活挥发油(VOOA)对骨性关节炎(OA)软骨病变的药理学学作用及其机制,为研制较为理想治疗骨性关节炎药物提供药理学实验参考。方法通过前交叉韧带切断(ACLT法)法建立实验性兔膝骨性关节炎(OA)模型,观察假手术组、溶剂对照组、OA模型组、挥发油实验组[(剂量1组、剂量2组、剂量3组),加入VOOA分别为0.01,0.03,0.06 ml/(kg·3 d)。]各组关节面的大体病理改变,酶联免疫分析试验法(ELISA)检测关节液白介素-1(IL-1)水平及关节积液生长转化因子水平(TGF-β)。结果与假手术组比较,模型组造成了实验性的骨性关节炎,出现软骨缺损甚至关节面溃疡,关节液IL-1水平升高,TGF-β降低,独活挥发油剂量1组缓解了软骨面损伤,减轻了炎性程度,TGF-β水平明显升高,剂量2组较剂量1组缓解骨关节炎损伤更为明显,但剂量3组却与模型组比较无显著差异。结论独活挥发油关节腔内注射可减轻兔膝骨性关节炎,抑制软骨细胞的破坏,对软骨组织具有明显的保护作用。但大剂量独活挥发油作为异物关节腔注射,刺激并加重了关节腔的炎症,小剂量的挥发油对实验性兔膝关节炎具有保护性作用。

独活挥发油灌胃对兔膝骨关节炎的保护作用及其机制

目的探讨独活挥发油(VOOA)灌胃对兔膝骨关节炎(OA)的保护作用及其机制。方法 6月龄日本大耳白兔24只,采用右膝关节前交叉韧带切断术(ACLT)建立兔膝OA模型,随机分为4组:模型组(OA组)、假手术组(Sham组)、盐水组(ACLT+NS组)和VOOA组(ACLT+VOOA组),每组6只。ACLT+VOOA组术后予以VOOA 0.2 ml/(kg.d)灌胃,ACLT+NS组给予等量的生理盐水。8周后处死动物,采用肉眼观察各组软骨及滑膜组织,病理切片行HE染色并进行软骨Mankin评分;检测血清及关节液内白细胞介素1(IL-1)、生长转化因子β(TGF-β)的含量;免疫组织化学法测定软骨中IL-1、TGF-β的含量。结果 ACLT+VOOA组可见软骨破坏减轻,滑膜纤维增生减少,Mankin评分低于ACLT+NS组及OA组,差异有统计学意义(P<0.05);血清、膝关节滑液IL-1含量低于ACLT+NS组及OA组,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β表达量高于ACLT+NS组、OA组及Sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VOOA灌胃能够部分阻止兔OA关节软骨的退变,其机制可能为减少滑液中炎性介质IL-1的分泌、促进TGF-β的分泌,从而减轻滑膜炎症、缓解对软骨细胞的破坏。

独活挥发油对N-脂肪酰基乙醇胺水解酶的抑制作用及抗炎作用研究

目的:研究独活挥发油对内源性大麻素水解酶N-脂肪酰基乙醇胺水解酶(N-acylethanolamine-hydrolyzing acidamidase,NAAA)水解活性的影响以及对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应模型的抗炎作用。方法:采用水蒸气蒸馏法提取独活挥发油,GC-MS检测化学成分;采用LC-MS检测NAAA水解活性;采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型;采用LC-MS检测细胞内棕榈酸乙醇胺(N-palmitoylethanolamine,PEA)水平;采用实时定量PCR检测肿瘤坏子因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α含量;采用Griess法检测一氧化氮(NO)含量。结果:独活挥发油可抑制NAAA水解活性,升高LPS诱导的RAW264.7细胞内PEA水平;独活挥发油可下调LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子TNF-α,iNOS,IL-6 mRNA表达;独活挥发油可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO释放。结论:独活挥发油能够抑制NAAA水解活性,升高细胞内PEA水平,降低炎症因子表达,具有一定的抗炎作用。

独活挥发油纳米乳的制备及其体外透皮试验

本实验以独活挥发油为供试药物,通过绘制伪三元相图筛选处方,并对其进行质量评价。用染色法鉴别纳米乳的类型,用透射电子显微镜考察形态,用Zetasizer Nano ZS分析仪以及光子关联能谱法测定粒径和多分散系数,后通过恒温加速试验检验其稳定性,最后研究其在小鼠皮肤上的体外经皮释药效果。