狭叶松果菊的组织培养和植株再生

以狭叶松果菊无菌苗叶片为外植体,通过正交试验筛选出最佳的愈伤组织诱导培养基:MS+6-BA0.5-mg/L+NAA1.0-mg/L;最佳的丛芽诱导培养基为:MS+6-BA1.0-mg/L+NAA0.5-mg/L.再生芽经附加IBA0.5-mg/L的1/2MS培养基生根后移栽成活获得再生植株.

狭叶松果菊的形态、性状与显微鉴别研究

目的 为狭叶松果菊鉴别与开发利用提供依据。方法 形态、性状与显微鉴定。结果 完成了原植物形态、药材性状与显微特征的描述。结论 部分结果可为制订狭叶松果菊的质量标准提供依据。

狭叶松果菊的毛状根诱导及培养

目的利用两种发根农杆菌A4,R1000诱导狭叶松果菊产生毛状根,建立狭叶松果菊的毛状根培养体系。方法利用共培养法研究不同外植体、菌株、预培养时间和浸染时间等对狭叶松果菊毛状根诱导率的影响和不同液体培养基对毛状根生长的影响筛选出最佳培养基。结果利用发根农杆菌R1000,预培养48 h的叶柄为转化材料,浸染10 min的诱导率最高,毛状根悬浮培养的最佳培养基为1/2MS+IBA0.5液体培养基。结论狭叶松果菊毛状根离体培养体系的建立,为狭叶松果菊的次生代谢产物的大规模生产奠定了基础。

狭叶松果菊快速繁殖

以狭叶松果菊Echinacea angustifolia种胚作外植体,以MS为基本培养基,经芽诱导及愈伤组织分化途径获得丛生芽和绿苗,无根苗培养后再经生根诱导和炼苗移栽等快速繁殖方法试验。结果:种胚先予以7 d的低温暗培养处理有利于胚根和胚芽的生长,萌发后较易形成绿苗;单芽用MS+BA1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养生长和增殖效果最好;经丛生芽诱导方式,增殖系数可达3.05。

狭叶松果菊3-脱氢奎尼酸合成酶基因cDNA的克隆及其组织表达特征

目的克隆狭叶松果菊Echinacea angustifolia 3-脱氢奎尼酸合成酶基因并考察其在各个组织中的表达情况。方法采用快速扩增cDNA末端技术,以狭叶松果菊组培苗cDNA为模板,克隆出狭叶松果菊3-脱氢奎尼酸合成酶基因全长序列并通过半定量RT-PCR分析其在不同器官中的表达模式。结果克隆到的基因(命名为EanaroB)全长为1 424 bp,编码一个442个氨基酸残基组成的多肽。其氨基酸序列与植物来源的3-脱氢奎尼酸合成酶同源性都在80%左右。将得到的序列提交Genbank,序列号为EU293857。半定量RT-PCR结果表明,狭叶松果菊EanaroB基因在狭叶松果菊的根、茎、叶、花中均有表达,但花和叶中的表达量较高,在根和茎中较少。结论采用RACE和PCR的方法从狭叶松果菊中克隆出了咖啡酸类化合物生物合成途径上的一个基因EanaroB,为进一步研究咖啡酸类衍生物生物合成代谢途径提供一定依据,为今后利用基因工程技术提高咖啡酸类衍生物,包括苯乙醇苷类物质松果菊苷的代谢工程打下一定基础。

HPLC同时检测狭叶松果菊中松果菊苷和绿原酸的含量

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)的方法对狭叶松果菊组培苗不同部位、愈伤组织以及不同株系毛状根中的松果菊苷和绿原酸进行了含量测定,建立同时测定狭叶松果菊组织培养物中松果菊苷和绿原酸含量的高效液相色谱方法;实验采用Kromasil ODS C18柱,流动相为乙腈∶甲醇∶0.1%磷酸溶液(10∶15∶75);检测波长为330nm。结果表明松果菊苷和绿原酸在0～25μg/mL范围线性关系良好;平均回收率方面松果菊苷为97.6%(RSD=0.83%),绿原酸为98.5%(RSD=0.91%)。该法简便、准确,可作为狭叶松果菊组织培养物中松果菊苷和绿原酸的定量分析方法。