狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用

目的:探讨狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮(WSTF)对氧化应激损伤LO_2细胞的保护作用。方法:通过细胞毒性实验确定给药范围,建立过氧化氢(H2O_2)致LO_2细胞损伤模型,用含不同浓度WSTF的培养液与急性损伤肝细胞共孵育不同时间,采用MTT比色法测定细胞活力,检测谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙二醛(MDA)的水平,评价WSTF对肝细胞损伤的保护作用。检测细胞线粒体膜电位和细胞内活性氧簇(ROS)水平,分析WSTF抑制H2O_2诱导LO_2细胞凋亡情况。结果:0.3 mmol·L^(-1)H2O_2处理LO_2细胞4 h构建H2O_2损伤LO_2细胞模型,确定0.031 2~0.125 mg·ml^(-1)WSTF为保护LO_2细胞损伤的给药浓度范围。WSTF可抑制H2O_2对肝细胞的损伤,并明显降低H2O_2致急性损伤肝细胞的ALT、AST释放量和MDA水平,逆转H2O_2诱导LO_2肝细胞线粒体膜电位去极化和细胞内ROS升高。结论:WSTF体外给药对肝细胞损伤有保护作用。

狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对人肝癌裸鼠移植瘤抑制作用及机制研究

目的:观察狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对人肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其机制。方法:建立荷瘤裸鼠动物模型,给药后观察并测量裸鼠瘤体,计算体积大小,并绘制生长曲线。分离瘤体后,计算抑制率,病理组织学检查,TUNEL染色检测移植瘤细胞凋亡。透射电镜观察瘤组织细胞的自噬小体和细胞超微结构,Western blot法检测Beclin1、Atg5、CyclinD1、Caspase-3、Bax、Bcl-2、nm23-Hl和MMP-9蛋白表达。结果:与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮50、100、200 mg/kg具有显著抑制移植瘤生长的作用(P<0.01)。与5-氟尿嘧啶20 mg/kg相比,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮100 mg/kg+5-氟尿嘧啶20 mg/kg联合应用能显著地降低肿瘤/体重比(P<0.01)。病理组织检查发现,与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮50、100、200 mg/kg能促使癌细胞核分裂相对减少,肿瘤细胞发生凋亡,可见比较明显的重度坏死。TUNEL染色实验发现,与模型对照组比较,5-氟尿嘧啶20 mg/kg、华蟾素624 mg/kg、联合组、狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮100、200 mg/kg能诱导细胞凋亡,移植瘤细胞凋亡率均有显著提高(P<0.01)。电镜观察移植瘤细胞超微结构发现,与模型对照组比较,联合用药组、狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮各剂量组可抑制细胞自噬体的形成。与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮100、200 mg/kg能促使细胞核固缩,碎裂、溶解,出现凋亡小体。Western blot法分析表明,与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮三个剂量组、联合组及两个阳性药组能显著上调Bax和Caspase-3蛋白和下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平,诱导移植瘤HepG2细胞发生凋亡(P<0.01),能抑制Beclin1、Atg5、CyclinD1、MMP-9等蛋白的表达,能促进nm23-Hl蛋白的表达(P<0.01),抑制HepG2细胞转移,进而抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。结论:狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮可以抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。

狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮中6种碳苷黄酮的含量测定和抗肿瘤活性研究

该文建立了HPLC同时测定狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮中6种碳苷黄酮含量的方法,并对狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮进行抗肿瘤活性评价。采用Kromasil 100-5 C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为甲醇-乙腈-0.5%甲酸梯度洗脱;体积流量0.8 mL·min^(-1),检测波长334 nm;柱温为室温(25℃)。以HepG2细胞为供试细胞株,采用MTT法评价水溶性总黄酮的抗肿瘤活性。新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷和芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷线性范围分别为0.25~2.53,0.12~1.20,0.37~3.69,0.16~1.63,0.19~1.92,0.14~1.42μg;平均回收率(n=6)分别为99.6%,100.2%,99.6%,97.9%,98.8%,98.6%,RSD分别为0.87%,2.0%,1.8%,1.5%,1.2%,1.2%。以IC_(50)值作为评价指标,测得狭基线纹香共菜水溶性总黄酮在给药24,48,72 h后抑制HepG2细胞增殖的IC_(50)值分别为1.89,1.71,1.51g·L^(-1)。本法快速、简便、准确,重复性好,可用于狭基线纹香共菜水溶性总黄酮的质量控制。狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对HepG2细胞增殖有一定的抑制作用。