猕猴桃根多糖抗疲劳、抗氧化与单糖组分鉴定

将小鼠随机分成对照组(生理盐水)、实验组(高、中、低剂量组给糖量分别为150、75、37.5mg/(kg.d)),每组10只,以20mL/(kg.d)剂量给小鼠连续灌胃15d,然后测定其负重游泳时间、常压耐缺氧时间,并测定其血清中乳酸、血清尿素氮、肝糖原和肝组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果显示:猕猴桃根多糖能延长小鼠常压耐缺氧时间(P<0.01);增加小鼠负重游泳时间(低剂量时P<0.05;中、高剂量时P<0.01);高剂量组降低运动后小鼠血清乳酸(P<0.01)和血清尿素氮(P<0.01)的浓度;中、高剂量组能提高小鼠体内肝糖原的储备量(中剂量组P<0.05;高剂量组P<0.01);高剂量组提高肝组织中SOD活性(P<0.05),中、高剂量组降低肝组织中MDA含量(中剂量组P<0.05;高剂量组P<0.01)。该结果表明猕猴桃根多糖对小鼠具有抗疲劳和抗氧化作用。将猕猴桃根多糖水解和乙酰化后,用气质联用仪分离和鉴定多糖单糖组分,显示猕猴桃根多糖是由核糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖。

阴离子树脂交换法纯化猕猴桃根多糖的工艺研究

[目的]确定猕猴桃根多糖的纯化工艺及其参数,制备高纯度RACP。[方法]以吸附率和解析率为指标,选定适合猕猴桃根多糖纯化的树脂;采用单因素试验法优化纯化工艺参数。[结果]选定D900型阴离子交换树脂纯化猕猴桃根多糖,其纯化工艺条件为:D900型阴离子交换树脂柱(高4cm,直径2cm),上样浓度(RACP)为8mg/mL,pH值=8,上样体积为2 BV,上柱速度0.4mL/min,柱温为33℃;用5BV 0.6mol/L的NaCl溶液洗脱,洗脱速度为0.8mL/min,收集洗脱液,洗脱液超滤脱盐。采用该工艺条件纯化猕猴桃根多糖,其纯度可达到85%以上。[结论]建立的RACP纯化工艺简单、可行。

猕猴桃根多糖对S_(180)荷瘤小鼠PCNA表达的影响

目的:了解猕猴桃根多糖体内抑瘤作用,揭示猕猴桃根多糖抑瘤作用机制。方法:采用配伍组实验设计研究方法,对采用不同剂量用药组和对照组的小鼠抑瘤率及PCNA表达进行统计分析。结果:猕猴桃根多糖高剂量组PCNA表达率63.86%,猕猴桃根多糖中剂量组PCNA表达率50.22%,猕猴桃根多糖低剂量组PCNA表达率58.33%,香菇多糖对照组PCNA表达率55.11%,模型对照组PCNA表达率75.88%。结论:猕猴桃根多糖抗肿瘤注射剂对荷瘤小鼠的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)阳性表达有剂量依赖性抑制作用。

猕猴桃根多糖调控Wnt信号通路抑制结肠癌增殖促进其凋亡

目的探讨猕猴桃根多糖(ACPS)调控Wnt信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。方法 0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/ml的ACPS处理人结肠癌HT29细胞,细胞计数试剂盒(CCK)8检测ACPS对HT29细胞活力的影响;ACPS或Wnt信号通路抑制剂XAV-939处理HT29细胞,细胞被分为阴性对照组、ACPS组(4.00 mg/ml的ACPS处理细胞)、XAV-939组(10μmol/L的XAV-939处理细胞)和ACPS+XAV-939组(4.00 mg/ml的ACPS和10μmol/L的XAV-939处理细胞),处理细胞48 h后CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测凋亡率;Western印迹检测Wnt信号通路关键分子β-catenin及下游靶基因cyclinD1和survivin的蛋白表达。结果 0.25 mg/ml和0.50 mg/ml的ACPS对HT29细胞活力影响与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而1.00～4.00 mg/ml的ACPS在24～72 h均能降低HT29细胞活力,与阴性对照组比较差异具有统计学意义,且具有浓度依赖性,各浓度均呈现时间依赖性(P<0.05);ACPS或XAV-939均能抑制HT29细胞活力,诱导细胞凋亡,下调β-catenin、cyclinD1和survivin的蛋白表达,与阴性对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05),两者合用效果更显著。结论 ACPS可通过抑制Wnt信号通路降低结肠癌细胞活力,诱导细胞凋亡。

猕猴桃根多糖对角叉菜胶致小鼠尾部血栓形成的影响

目的探讨猕猴桃根多糖对角叉菜胶致小鼠尾部血栓形成的影响。方法将60只小鼠分为对照组、模型组、阿司匹林组、猕猴桃根多糖低剂量组[40 mg/(kg·d)]、中剂量组[80 mg/(kg·d)]、高剂量组[160 mg/(kg·d)],每组10只,除对照组和模型组外,各组小鼠分别给予相应药物灌胃10 d。除对照组外,其余各组小鼠最后1次灌胃1 h后均给予腹腔注射角叉菜胶构建小鼠尾部血栓模型。24 h后计算各组小鼠相对黑尾长度(RATL)及RATL抑制率,检测凝血功能,并取小鼠尾部组织观察尾部血栓形成情况。结果模型组小鼠血栓发生率为100%,而对照组和多糖高剂量组小鼠未发生黑尾。猕猴桃根多糖中剂量组小鼠的RATL短于模型组(P<0.05),各剂量多糖组小鼠的RATL抑制率均高于阿司匹林组。多糖中高剂量组小鼠的凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间均长于模型组、阿司匹林组(均P<0.05)。病理结果显示,模型组、阿司匹林组、猕猴桃根多糖低、中剂量组小鼠尾静脉均有不同程度的血栓形成,而猕猴桃根多糖高剂量组未见血栓形成。结论猕猴桃根多糖对角叉菜胶诱导的小鼠血栓形成具有一定的抑制作用,这可能与其抑制凝血途径有关。

猕猴桃根多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及p-p38表达的影响

目的探讨猕猴桃根多糖(Actinidia chinensis Planch polysaccharid,ACPS)对人胃腺癌细胞(SGC-7901)增殖和凋亡的影响,及对SGC-7901细胞磷酸化p38(p-p38)蛋白表达的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度ACPS对SGC-7901细胞的24、48、72 h的抑制作用;流式细胞技术检测各浓度ACPS作用48 h后SGC-7901细胞凋亡的发生率;Western blot法检测各浓度ACPS作用SGC-7901细胞后前体半胱氨酰天冬氨酸酶-9(pro-caspase-9)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和p-p38蛋白量的表达,以及p38特异性抑制剂预处理细胞后pro-caspase-9、PARP和p-p38蛋白量的表达。结果与对照组比较,1、2.5、5、10 mg/mL ACPS作用胃癌SGC-7901细胞后吸光度下降(P<0.05);同时药物剂量越高,作用时间越长,吸光度越低(P<0.01);24、48、72 h IC50分别为7.43、3.88、1.32 mg/mL;ACPS能下调SGC-7901细胞中pro-caspase-9蛋白的表达(P<0.01),增加PARP剪切蛋白的表达(P<0.01);进一步研究发现,ACPS处理SGC-7901细胞24 h后,p38的磷酸化水平升高(P<0.05),p38特异性抑制剂处理细胞2 h后能抑制p38磷酸化表达,并能抑制ACPS诱导的细胞凋亡。结论 ACPS具有抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导其凋亡的作用;激活p38途径,进而激活caspase-9和PARP,最终导致细胞死亡,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的分子机制之一。

猕猴桃根多糖脂质体包封率测定方法研究

目的:建立猕猴桃根多糖脂质体包封率的测定方法。方法:采用阴离子交换树脂法分离脂质体和游离APPS,采用紫外-可见分光光度法测定游离APPS含量,计算脂质体包封率。结果:以纤维素DE-52阴离子交换树脂为填料,采用1.0mol·L-1NaCl溶液洗脱,游离APPS的回收率99.21%,空白脂质体的回收率0.07%;线性范围11.66～58.29 mg·L-1(r=0.999 4),日内和日间精密度均符合要求(RSD均小于2%),方法平均回收率99.28%,RSD 0.66%;APSP脂质体的平均包封率70.16%。结论:此法简便、可行,可用于猕猴桃根多糖脂质体包封率的测定。

猕猴桃根多糖脂质体的处方工艺研究

目的:确定猕猴桃根多糖(APPS)脂质体的制备方法,考察处方组成和制备工艺的影响因素。方法:采用3种不同方法制备APPS脂质体,以包封率、载药量和稳定系数为指标,优选最佳制备方法以及考察各制备因素的影响。结果:逆相蒸发法制备的APPS脂质体包封率为(48.80±0.46)%、载药量为(4.79±0.04)%、稳定系数为(0.2558±0.1200)。以1/10离子强度的p H值7.4 PBS缓冲液为水合介质制备的APPS脂质体包封率为74.77%,稳定系数为0.1448;药脂比1∶20时制得的脂质体优于其他两种比例,其包封率为60.50%,稳定系数为0.087;以PEG2000为脂质膜成膜材料制备的脂质体的包封率为(59.80±1.83)%,稳定系数为(0.1188±0.0300);PEG与卵磷脂比例在0.25∶1时其包封率更佳,包封率为62.48%;转速60r/min制得的脂质体包封率为57.10%,稳定系数为0.1383;25℃下制备的脂质体其包封率为58.88%,稳定系数为0.0561;搅拌2min时得到的脂质体包封率为73.20%,均优于其他水平。结论:经综合考虑,采用逆相蒸发法,选用1/10离子强度的p H值7.4 PBS为水合介质,药脂比1∶20,PEG2000为脂质膜成膜材料,PEG与卵磷脂的比例为0.25∶1,转速60r/min,温度25℃,搅拌2min制备APPS脂质体工艺较优。

猕猴桃根多糖抗肿瘤注射剂小鼠体内抑瘤机制

目的:探寻猕猴桃根多糖抗肿瘤注射剂抑瘤作用机制。方法:采用配伍组实验设计研究方法,对采用不同剂量的用药组和对照组小鼠抑瘤率及增殖细胞核抗原(PCNA)表达进行统计分析,同时应用电镜对各组肿瘤细胞微结构进行观察。结果:猕猴桃根多糖抗肿瘤注射剂对H22肝癌细胞株呈现良好的抑制效果,中剂量组抑瘤率为68.5%,相应PCNA表达率51.20%,效果最佳。电镜显示猕猴桃根多糖抗肿瘤注射剂各实验组肿瘤细胞均出现凋亡现象,肿瘤细胞线粒体肿胀,并出现细胞胞浆内存在空泡等细胞中毒现象。结论:猕猴桃根多糖抗肿瘤注射剂对肝癌具有一定抑制作用,其机制可能是通过抑制PCNA来减缓肿瘤细胞增殖,同时对肿瘤细胞线粒体产生毒性作用。