3个外种猪Nramp1基因多态性研究

采用PCR-RFLP方法,对3个外种猪群Nramp1基因第6内含子序列多态性进行了检测。结果表明,在3个外种猪群中均仅检测到AB和BB2种基因型,其中AB基因型为优势基因型,BB基因型为数极少,未检测到AA基因型。卡方检验结果表明,3个外种猪群该位点均处于遗传不平衡状态(P<0.01)。群体中该位点杂合度较高、纯合度较低,具有中度遗传多态性,可在后续的育种方案中实施分化选择和培育,为抗病育种提供遗传素材。

猪肝脏总RNA快速提取方法

采用CTAB法和改良的Trizol法提取贵州从江香猪(Sus scrofa domestica)新鲜肝脏的总RNA,通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测RNA质量。结果表明,改良的Trizol法提取的总RNA的纯度高,完整性好,优于CTAB法。且改良的Trizol法提取的猪肝脏总RNA可用于RT-PCR等后续分子生物学操作。

长白猪和太湖猪不同生长阶段脂肪中肉质和胴体性状相关基因的表达谱分析

动物个体的皮下脂肪厚度(subcutaneous fat thickness,SFT)和肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量取决于活体内脂肪酸合成与氧化竞争的动态平衡点.利用包含140个与猪脂肪沉积、代谢和肌肉生长密切相关基因的Oligo功能分类基因芯片检测了脂肪型的太湖猪和瘦肉型的长白猪在1,2,3,4和5月龄间背部皮下脂肪中这些基因的动态表达变化,发现长白猪有25个基因在月龄间的表达差异达显著水平(P<0.05),且包含23个基因的"参与脂肪或类固醇代谢的酶和调节蛋白"基因分组在品种间具有极显著意义(P<0.01).提示两猪种脂肪沉积能力的巨大表型差异可能与这些基因的差异表达规律密切相关.STEM聚类分析显示长白猪和太湖猪各有两个表达模式分别具有极显著(P<0.01)和显著性意义(P<0.05),但太湖猪基因表达谱比较分散,占主导优势的表达模式没有长白猪明显.提示太湖猪脂肪细胞内参与相关代谢活动的基因间的调控关系较长白猪复杂.基于动态贝叶斯模型构建的基因调控网络从一定程度上反映了两猪种在脂肪沉积代谢相关生理生化活动方面存在的明显差异,可从中挖掘相关性状潜在的关键特征基因.此外,对5个差异表达基因的荧光定量RT-PCR验证显示两种实验方法结果的相关系数平均高达0.874±0.071.以上结果筛选出了对于猪脂肪相关性状可能具有重要影响并值得深入研究的一些基因,初步揭示了生长发育过程中脂肪细胞基因表达调控的分子互作机制.

猪CACNA1S基因部分序列的克隆、测序及SNP检测

CACNA1S是钙离子通道主效亚基α1亚单位的编码基因,该基因突变会导致人(Homo sapiens)低钾性周期性麻痹和恶性高温综合征.目前CACNA1S基因的研究主要集中在人和模式动物上,而在家畜中的研究少见报道.本研究以金华猪(115头)、皮特兰猪(30头)、金华猪与皮特兰猪杂交产生的金皮F2代杂种猪(126头)、大约克猪(23头)为研究对象,根据人CACNA1S基因序列设计引物,对猪基因组DNA进行PCR扩增、克隆测序,并与人相应序列作同源性比较,然后采用PCR-SSCP技术检测序列中可能存在的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,并对有合适内切酶存在的突变点应用PCR-RFLP技术进行验证.结果表明:(ⅰ)用6对引物对猪基因组DNA进行扩增,共克隆得到猪CACNA1S基因约5211bp的DNA序列,其中外显子区域,猪与人同源性为82.6%,序列已递交GeneBank收录(登录号DQ767693);(ⅱ)在克隆得到的DNA序列中,共检测到57个单核苷酸突变点,其中外显子区域存在24个;(ⅲ)突变位点的PCR-RFLP验证与PCR-SSCP检测结果一致,经与GenBank公布的猪CACNA1S基因EST小片段(Bx914582,Bx666997)比较,相应长度核酸序列内本实验检测到的11个SNP位点中,有8个位点的碱基突变与2个EST片段间存在的碱基差异相同.

猪13号染色体q41区的3个功能基因STS多态性与产肠毒素大肠杆菌F4ab／ac易感性相关

由产肠毒素大肠杆菌(Escherichia coli)F4(ETEC F4)引起的断奶前仔猪腹泻病是一种常见细菌感染病,对养猪业造成了巨大经济损失.编码ETECF4ab/ac受体的位点已被定位于猪(Sus scrofa)13号染色体(SSC13)q41区域,S0075为最紧密连锁的标记之一.本研究从S0075侧翼染色体区域选择了SLC12A8,MYLK和KPNA13个基因,建立猪特异性序列标签位点(STS).利用白色杜洛克×二花脸资源家系群体中的ETECF4ab/ac侵染抗性和易感个体,通过比较测序法,建立了这3个基因的STS,并鉴别到7个单核苷酸多态位点.进一步检测了白色杜洛克×二花脸资源家系群体祖代、亲本代和755头F2个体在SLC12A8g.159A>G,MYLKg.1673A>G和KPNA1g.306A>G多态位点的基因型.传递不平衡检测(TDT)分析表明:这些多态位点和相应的单倍型与ETEC F4ab/ac(特别是F4ac)刷状缘黏附表型存在显著相关,表明这些多态位点和单倍型与ETEC F4ab/ac受体的编码基因因果突变存在连锁不平衡.本研究进一步证实了SSC13q41存在ETEC F4ab/ac侵染易感性的遗传位点,为ETEC F4ab/ac受体基因的精细定位提供了新型多态标记.