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猪Ⅱ型圆环病毒ORF1、ORF2基因串联重组腺病毒的构建及其免疫效果 被引量:2
1
作者 祝卫国 王旭荣 +4 位作者 宋长绪 杨增岐 王建华 张春红 黄忠 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第3期75-79,84,共6页
【目的】构建含PCV2ORF1和ORF2基因的串联重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价。【方法】扩增PCV2的ORF1和ORF2基因,串联克隆入pMD18-T载体后亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后与骨架载体pAdeasy-1在... 【目的】构建含PCV2ORF1和ORF2基因的串联重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价。【方法】扩增PCV2的ORF1和ORF2基因,串联克隆入pMD18-T载体后亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后与骨架载体pAdeasy-1在细菌BJ5183内完成重组,获得重组腺病毒质粒。将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶线性化后转染293细胞,包装成重组腺病毒,然后从致细胞病变、荧光检测及PCR检测等方面对该重组腺病毒进行了鉴定。以该重组腺病毒免疫小鼠,对免疫鼠血清中PCV2的特异性抗体进行检测。【结果】得到了PCV2的ORF1和ORF2基因,pMD18-ORF1-ORF2和pAdCMV-ORF1-ORF2载体构建成功,获得了含有PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒。该重组腺病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中可检测到PCV2的特异性抗体。【结论】成功构建了含PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒,此腺病毒可诱导机体产生针对PCV2的特异性抗体。 展开更多
关键词 型圆病毒 ORF1 ORF2基因 重组腺病毒 免疫效果
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猪圆环病毒Ⅱ型感染3D4/2细胞的转录组学分析
2
作者 陈虹伶 赵怡 +5 位作者 陈家骥 韦秋旭 李禧梦 冯国越 胡焜翔 胡庭俊 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期42-51,共10页
【目的】通过转录组测序筛选猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus typeⅡ,PCV2)感染猪肺泡巨噬细胞系(3D4/2)差异表达基因,为了解PCV2感染宿主免疫细胞机制和抗PCV2感染药物研发奠定基础。【方法】用感染复数(multiplicity of infection,... 【目的】通过转录组测序筛选猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus typeⅡ,PCV2)感染猪肺泡巨噬细胞系(3D4/2)差异表达基因,为了解PCV2感染宿主免疫细胞机制和抗PCV2感染药物研发奠定基础。【方法】用感染复数(multiplicity of infection, MOI)为1的PCV2 NJ2002株处理3D4/2细胞,利用Illumina NovaSeq 6000测序平台进行转录组测序。使用DeSeq 2.0软件进行差异表达基因分析,并对差异表达基因进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能分析及转录因子靶向分析,选取免疫及凋亡相关基因进行实时荧光定量PCR验证,用Western blotting技术检测细胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)及磷酸化胞内磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平。【结果】转录组测序结果显示,与对照组相比,PCV2感染组共获得713个差异表达基因,其中313个上调,400个下调。GO功能和KEGG通路富集分析显示,差异表达基因与免疫应答等相关,主要富集在细胞外基质受体互作通路、新陈代谢通路、HIF-1信号通路、病毒致癌作用、PI3K-Akt等信号通路。实时荧光定量PCR结果与转录组测序的基因表达水平保持一致。Western blotting检测结果显示,PCV2感染3D4/2细胞24 h后PI3K和Akt蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05)。转录因子靶向分析表明,差异表达基因与核转录因子Y亚基β(NFYB)和ETS转录因子(ELK4)联系紧密。【结论】PCV2可能通过PI3K-Akt信号通路影响下游炎症信号通路和凋亡信号通路增强自身复制能力。NFYB和ELK4转录因子在PCV2感染过程中可能发挥重要作用,可考虑作为抗PCV2药物靶点。研究结果为深入了解PCV2感染宿主免疫细胞机制和相关药物开发提供了理论基础。 展开更多
关键词 病毒 3D4/2细胞 转录组测序 差异表达基因 转录因子
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猪Ⅱ型圆环病毒-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建(初报) 被引量:2
3
作者 王印 郭万柱 +3 位作者 王新 徐志文 朱玲 王小玉 《四川农业大学学报》 CSCD 2006年第2期125-129,共5页
根据GenBank发表的PCV2序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2 ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF... 根据GenBank发表的PCV2序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2 ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞,通过空斑纯化得到了表达猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒SA215(C)。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的ORF2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同,表明EGFP和PCV2 ORF2基因的插入不影响PRV SA215的增殖。该重组病毒可作为猪Ⅱ型圆环病毒和伪狂犬病毒候选疫苗毒株。 展开更多
关键词 型圆病毒 ORF2基因 伪狂犬病毒 重组病毒
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猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因的克隆及其序列分析 被引量:1
4
作者 蒋智勇 宋长绪 +2 位作者 王贵平 高向阳 赵亚华 《动物医学进展》 CSCD 2005年第3期63-66,共4页
根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从疑似断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2并对其测序,结果... 根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从疑似断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2并对其测序,结果表明所克隆的ORF2基因与德国分离株AF201897核苷酸序列同源性为99.5%.与其它PCV-2的ORF2核苷酸序列同源性在92.1%~99.9%之间,推导的氨基酸序列同源性在90.2%~99.5%之间. 展开更多
关键词 ORF2 型圆病毒 同源性 PCV 病料 多系统消耗综合征 病毒 基因 克隆 核苷酸序列
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猪Ⅱ型圆环病毒河南株分离鉴定及其ORF2基因序列分析
5
作者 王江辉 陈陆 +7 位作者 吴青 刘红英 杨霞 彭志峰 孙彦婷 邝爱丽 王宏魁 王川庆 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第5期24-26,共3页
关键词 型圆病毒 ORF2基因 基因序列分析 河南地区 分离鉴定 断奶多系统衰竭综合征 皮炎肾病综合征 PCV2
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猪Ⅱ型圆环病毒ORF2与猪GM-CSF基因重组腺病毒共表达及免疫效果分析
6
作者 陈降华 刘忠华 李文平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期124-128,共5页
旨在构建含融合基因pGMCSF-ORF2的重组腺病毒,并对其表达水平和免疫效果进行分析。运用PCR方法扩增PCV2ORF2和pGM-CSF基因,拼接后克隆入pMD18-T载体,然后再亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后电转化... 旨在构建含融合基因pGMCSF-ORF2的重组腺病毒,并对其表达水平和免疫效果进行分析。运用PCR方法扩增PCV2ORF2和pGM-CSF基因,拼接后克隆入pMD18-T载体,然后再亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后电转化含腺病毒基因组(AdEasy-1)的大肠杆菌细胞BJ5183-Ad-1,成功获得了重组腺病毒DNA。将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD293细胞,经过病毒基因组的PCR和转录水平的RT-PCR及Westernblot等方面对融合蛋白的表达进行了鉴定。以该病毒免疫Babl/c小白鼠,对免疫小鼠血清中PCV2抗体进行检测。结果显示,获得了pGMCSF-ORF2重组基因,重组腺病毒载体构建成功,获得了表达pGMCSF-ORF2融合蛋白的重组腺病毒。该病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中检测到了PCV2的特异性抗体。获得的重组腺病毒能有效表达pGMCSF-ORF2融合蛋白,且可诱导小鼠产生针对PCV2的特异性抗体。 展开更多
关键词 型圆病毒ORF2 pGM—CSF 重组腺病毒共表达免疫效果
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猪Ⅱ型圆环病毒病的中医认知及防治
7
作者 《兽药市场指南》 2024年第12期41-42,共2页
猪圆环病毒(PCV2)以其诱发的断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)、皮炎肾病综合征(PDNS)、繁殖障碍、先天性震颜及呼吸综合征等病症严重危害着猪群健康,从而引起了业界的高度重视。中兽医起源于中医,是一门以六经八纲群证分析疾病的学科。
关键词 繁殖障碍 群健康 中兽医 型圆病毒 皮炎肾病综合征 呼吸综合征 PMWS 断奶仔多系统消耗综合征
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猪Ⅱ型圆环病毒四川分离株鉴定及其ORF2基因序列分析
8
作者 王新 郭万柱 +6 位作者 朱玲 徐志文 颜其贵 王印 王小玉 罗燕 周婷 《畜牧市场》 2009年第11期21-22,共2页
猪圆环病毒(Porcinecircovirus,PCV),属于圆环病毒科(Circoviridae),圆环病毒属(Circovirus),血清型为PCV—1和PCV-2。PCV—1首先由Tis2cher于1974年从PK-15猪肾传代细胞系中分离获得,PCV-2首先由Clark报道了是断奶仔猪多... 猪圆环病毒(Porcinecircovirus,PCV),属于圆环病毒科(Circoviridae),圆环病毒属(Circovirus),血清型为PCV—1和PCV-2。PCV—1首先由Tis2cher于1974年从PK-15猪肾传代细胞系中分离获得,PCV-2首先由Clark报道了是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原, 展开更多
关键词 病毒 四川分离株 基因序列分析 ORF2 断奶仔多系统衰竭综合征 pcv-2 鉴定 传代细胞系
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猪Ⅱ型圆环病毒全基因组的克隆及感染性鉴定 被引量:17
9
作者 郗鑫 陈焕春 +2 位作者 陈华平 曹胜波 琚春梅 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期172-176,共5页
设计合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )全基因组的特异性引物 ,从 3份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征 (PMWS)的死亡仔猪病料中 ,PCR扩增和克隆了 3株PCV 2全基因组序列。将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较 ,并绘制系统... 设计合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )全基因组的特异性引物 ,从 3份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征 (PMWS)的死亡仔猪病料中 ,PCR扩增和克隆了 3株PCV 2全基因组序列。将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较 ,并绘制系统发育进化树。结果显示 ,所测毒株间的核苷酸同源性为 95 7%~ 99 4 % ,与其它毒株的同源性较高 ,达 95 1%以上 ;ORF1的核苷酸同源性高达 97 8%以上 ,氨基酸同源性大于 98% ;ORF2的核苷酸同源性较低 ,为 90 %~ 98%不等 ,推导的氨基酸序列同源性介于 87%~ 99 1%。进化树分析表明各分离毒株在进化上存在地域上的相关性。将克隆到的PCV 2基因组环化后 ,脂质体介导转染PK 15细胞 ,盲传 3代。间接免疫荧光检测表明 ,克隆到的基因组具有感染性。 展开更多
关键词 型圆病毒 基因组 克隆 感染性 鉴定 pcv-2 断奶后仔多系统衰弱综合征 PMWS
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猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组克隆与序列分析 被引量:14
10
作者 曹胜波 陈焕春 +3 位作者 肖少波 赵俊龙 吕建强 钱平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期137-141,共5页
参照国外发表的猪Ⅱ型圆环病毒 (porcinecircovirustype 2 ,PCV - 2 )全基因组序列 ,设计一对PCV - 2特异性引物 ,用该室分离的PCV - 2豫A株感染PK - 15细胞 ,从中提取PCV - 2复制型基因组DNA ,并以之为模板进行PCR扩增。回收PCR产物 ,... 参照国外发表的猪Ⅱ型圆环病毒 (porcinecircovirustype 2 ,PCV - 2 )全基因组序列 ,设计一对PCV - 2特异性引物 ,用该室分离的PCV - 2豫A株感染PK - 15细胞 ,从中提取PCV - 2复制型基因组DNA ,并以之为模板进行PCR扩增。回收PCR产物 ,构建重组测序质粒T -PCV - 2。测序结果表明 ,猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组为 176 7bp ,与GenBank收录的PCV - 2国外分离株核苷酸的同源性可高达 97%。序列分析表明 ,复制型豫A株的基因组包含 10个读码框架 ,其中ORF1、ORF2是其两个最主要的读码框架 ,分别编码 314、2 34个氨基酸。豫A株和PCV - 1间的ORF1、ORF2的氨基酸序列同源性分别为 85 %、6 6 % ,与其它PCV - 2毒株间的ORF1氨基酸同源性均在 98%以上 ,而ORF2的氨基酸同源性为 92 %~ 97%。 展开更多
关键词 型圆病毒豫A株 全基因组克隆 序列分析 pcv-2
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猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究 被引量:13
11
作者 宋云峰 肖少波 +2 位作者 金梅林 张松林 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1049-1054,共6页
PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游,使二者融合表达,命名为pCORF2BVP22和pCBVP22ORF2。... PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游,使二者融合表达,命名为pCORF2BVP22和pCBVP22ORF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠,分别注射pCD-NA3.1(+)、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP22ORF2,共免疫2次,间隔2周,分别于首免后2周和二免后4周采血,ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达,将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体,构建了pNORF2和pNBVP22,转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示,通过两次免疫后,各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体,同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果,其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。 展开更多
关键词 2型圆病毒ORF2 BVP22 蛋白转导 核酸疫苗
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猪II型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达 被引量:16
12
作者 韩凌霞 陈艳 +3 位作者 崔尚金 王云峰 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期10-13,共4页
猪II型圆环病毒(PCV_2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中... 猪II型圆环病毒(PCV_2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中,进行了序列测定。将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白。根据文献报道,致病性的PCV_2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体pGEX_6p_1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段。通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS_PAGE结果,重组质粒pPRO_Cap和pPRO_Rep以及pGEX_ΔCap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%。将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV_2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,pGEX_ΔCap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV_2感染用候选抗原。 展开更多
关键词 pcv-2 诊断抗原 II型圆病毒 全基因组序列分析 ORFl基因 ORF2基因 基因克隆 基因表达
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猪2型圆环病毒ORF1基因的克隆及表达 被引量:9
13
作者 蒋智勇 宋长绪 +2 位作者 高向阳 王贵平 赵亚华 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期3-7,共5页
根据GenBank中猪圆环病毒 2型 (PCV 2 )的ORF1基因序列 ,设计合成了 1对引物 ,对PCV 2广东株 (GD)ORF1基因进行PCR扩增 ,将扩增的ORF1基因克隆入 pMD 18 T载体 ,获得的重组质粒命名为 pMD ORF1。将ORF1的KpnⅠ和XbaⅠ双酶切产物插入原... 根据GenBank中猪圆环病毒 2型 (PCV 2 )的ORF1基因序列 ,设计合成了 1对引物 ,对PCV 2广东株 (GD)ORF1基因进行PCR扩增 ,将扩增的ORF1基因克隆入 pMD 18 T载体 ,获得的重组质粒命名为 pMD ORF1。将ORF1的KpnⅠ和XbaⅠ双酶切产物插入原核表达载体pBAD/ gⅢC得到重组子 ,命名为 pBAD/ gⅢ ORF1。序列分析表明 ,克隆的ORF1与德国分离株AF2 0 1897核苷酸序列的同源性高达 99.5 % ;与其他PCV 2株的核苷酸序列同源性为 92 .1%~99.9% ,推导的氨基酸序列同源性为 90 .2 %~ 99.5 %。同时 ,测序结果表明 ,克隆的ORF1准确插入了 pBAD/ gⅢC的多克隆位点 ,未改变读码框。用L 阿拉伯糖诱导表达 ,收集菌液进行SDS PAGE和Western blotting分析 ,结果表明PCV 2ORF1在pBAD/ gⅢC中获得了高效融合表达 ,其表达蛋白的分子质量约为 4 1ku。 展开更多
关键词 2型圆病毒 ORF1基因 克隆 表达 蛋白 分子质量
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猪2型圆环病毒核酸疫苗的构建、鉴定和表达 被引量:9
14
作者 秦晓冰 金宁一 +4 位作者 付明山 马鸣潇 尹革芬 金扩世 李昌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期465-467,共3页
以pVAX1为真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙古株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了pVAX1-ORF2、pVAX1-IL18-ORF2、pVAX1-ORF2-ORF1和pVAX1-IL18-ORF2-ORF1等4个重组质粒作为核酸疫苗。将这4个重组核酸质粒分... 以pVAX1为真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙古株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了pVAX1-ORF2、pVAX1-IL18-ORF2、pVAX1-ORF2-ORF1和pVAX1-IL18-ORF2-ORF1等4个重组质粒作为核酸疫苗。将这4个重组核酸质粒分别酶切鉴定后,转染BHK-21和PK-15细胞进行RT-PCR、间接免疫荧光和Western blotting检测。结果表明,重组核酸质粒构建正确,并能进行表达。 展开更多
关键词 2型圆病毒 核酸疫苗 RT-PCR 间接免疫荧光
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猪II型圆环病毒四川分离株鉴定及其ORF2基因序列分析 被引量:6
15
作者 王新 郭万柱 +6 位作者 朱玲 徐志文 颜其贵 王印 王小玉 罗燕 周婷 《中国病毒学》 CSCD 2005年第4期438-440,共3页
The PCV-2 positive tissues by PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) were inoculated to the PK-15 cells not contaminated by PCV. The viral particles were observed in the infected PK-15 cells by eletro... The PCV-2 positive tissues by PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) were inoculated to the PK-15 cells not contaminated by PCV. The viral particles were observed in the infected PK-15 cells by eletronmicroscope .It was concluded that the isolate was PCV-2 and was named SCH-A strain.The capsid protein gene(cp) in ORF2 was amplified from PK-15 cell line infected with SCH-A strain by PCR, and was cloned and sequenced.The nucleotide sequences of ORF2 gene of the SCH-A strain was compared with other porcine circovirus isolates.The results showed that the homologies of nucleotides were between 90.5% and 96.7% in comparision with the PCV-2 reference strains,but the homologies of nucleotides were only about 67% with the PCV-1 reference strains. SCH-A strain displayed the highest nucleotide homology((96.7)%) with the reference strain Hunan .Phylogenetic tree analysis showed ORF2 gene of the SCH-A isolate belongs to PCV-2 . 展开更多
关键词 型圆病毒(pcv-2) 分离 ORF2基因 序列分析
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表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定 被引量:7
16
作者 琚春梅 陈焕春 +2 位作者 郗鑫 刘正飞 曹胜波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1716-1722,共7页
目的以伪狂犬病病毒为载体,构建表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组病毒,并研究其生物学特性。方法将猪2型圆环病毒ORF2基因插入到伪狂犬病病毒gG缺失通用转移载体中,构建猪2型圆环病毒-伪狂犬病病毒重组中间转移质粒,然后将该质粒与伪狂... 目的以伪狂犬病病毒为载体,构建表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组病毒,并研究其生物学特性。方法将猪2型圆环病毒ORF2基因插入到伪狂犬病病毒gG缺失通用转移载体中,构建猪2型圆环病毒-伪狂犬病病毒重组中间转移质粒,然后将该质粒与伪狂犬病病毒TK-/gG-/LacZ+基因组共转染IBRS-2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行重组病毒的筛选及生物学特性测定。结果利用检测PCV2ORF2基因和LacZ基因的PCR方法筛选到重组病毒TK-/gG-/ORF2+,同时用Southernblotting证实外源基因PCV2ORF2已成功插入到TK-/gG-/LacZ+亲本株的基因组中。间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblotting结果显示重组病毒中PCV2ORF2基因获得了成功表达。对重组病毒的生物学特性研究表明,重组病毒与其亲本株在不同细胞上的增殖滴度相当,且重组病毒对小鼠无致病性,免疫小鼠后可诱导机体产生抗ORF2蛋白的特异性抗体。结论重组伪狂犬病毒构建成功,且表达的ORF2蛋白具有免疫原性。 展开更多
关键词 2型圆病毒 ORF2基因 伪狂犬病毒 TK^-/gG^-/ORF2^+ 鉴定
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杭州地区猪Ⅱ型圆环病毒抗体的血清学调查 被引量:22
17
作者 陈庆新 商绍彬 +4 位作者 叶菊秀 母安雄 王毅峰 陆国林 周继勇 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第7期26-28,共3页
从浙江省杭州地区 2 8个猪场采集猪血清 1 6 77份 ,用间接荧光免疫试验进行了猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )抗体检测。共检出抗体阳性血清 96 0份 ,总阳性率为 5 7.2 5 % ,其中经产母猪的阳性率为 6 2 .32 % ,后备母猪的阳性率为 5 5 .5 5 % ... 从浙江省杭州地区 2 8个猪场采集猪血清 1 6 77份 ,用间接荧光免疫试验进行了猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )抗体检测。共检出抗体阳性血清 96 0份 ,总阳性率为 5 7.2 5 % ,其中经产母猪的阳性率为 6 2 .32 % ,后备母猪的阳性率为 5 5 .5 5 % ,断奶后仔猪的阳性率为 5 5 .4 8% ,断奶前仔猪的阳性率为 5 2 .98%。血清学调查结果显示 ,PCV 展开更多
关键词 杭州地区 型圆病毒 抗体检测 血清学调查 间接荧光免疫试验 断奶仔 多系统衰竭综合征
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陕西7个地区猪2型圆环病毒(PCV2)感染的血清学调查 被引量:8
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作者 祝卫国 党如意 +2 位作者 杨增岐 王建华 王旭荣 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第7期37-38,共2页
关键词 血清学调查 2型圆病毒 陕西省 感染 间接ELISA方法 PCV2 发生情况 PMWS
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猪2型圆环病毒核酸疫苗的研制及其对小白鼠的免疫效果 被引量:5
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作者 尹业师 黄伟坚 +4 位作者 刘海鹏 冯建远 谢丽华 温荣辉 李军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期155-159,共5页
为研制猪2型圆环病毒(PCV2)新型核酸疫苗,以pcDNA3为载体,与PCV2的ORF2及其高变区V1、V2、V3、V1-V2连接,分别成功构建了真核表达质粒pcDNA3-ORF2、pcDNA3-V1、pcDNA3-V2、pcDNA3-V3和pcDNA3-V1-V2。对阳性真核表达质粒大量生产并纯化后... 为研制猪2型圆环病毒(PCV2)新型核酸疫苗,以pcDNA3为载体,与PCV2的ORF2及其高变区V1、V2、V3、V1-V2连接,分别成功构建了真核表达质粒pcDNA3-ORF2、pcDNA3-V1、pcDNA3-V2、pcDNA3-V3和pcDNA3-V1-V2。对阳性真核表达质粒大量生产并纯化后,以每只小白鼠0.2 mg免疫5周龄左右的雌性小白鼠,然后用ELISA检测免疫小白鼠血清中抗体的产生情况。结果显示,这5种真核表达质粒均能刺激小白鼠产生特异性抗体,但相比之下,真核表达质粒pcDNA3-V1-V2诱导小白鼠产生的抗体水平更高,维持的时间更久。表明质粒pcDNA3-V1-V2的免疫效果较好,有望成为防制猪2型圆环病毒的候选疫苗。 展开更多
关键词 2型圆病毒 核酸疫苗 免疫效果
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猪Ⅱ型圆环病毒Cap基因重组腺病毒表达载体的构建 被引量:6
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作者 马友记 柳纪省 +3 位作者 赵兴绪 李志勇 殷相平 李宝玉 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第6期713-717,共5页
通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)衣壳蛋白Cap基因的重组腺病毒表达载体。首先将Cap基因亚克隆连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV上,再将重组质粒pAdTrack-CMV/Cap用Pme Ⅰ线性化后电转化携带有腺病毒骨架... 通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)衣壳蛋白Cap基因的重组腺病毒表达载体。首先将Cap基因亚克隆连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV上,再将重组质粒pAdTrack-CMV/Cap用Pme Ⅰ线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAdEasy-Cap。为进一步研究PCV2腺病毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 型圆病毒 Cap基因 重组腺病毒 同源重组
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