复合RT-PCR检测猪乙脑病毒和猪流感病毒方法的建立

根据GenBank上已发表的猪乙脑病毒(JEV)的E基因序列和猪流感病毒(SIV)的NP基因序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了JEV和SIV的单项RT-PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了JEV和SIV的复合RT-PCR诊断方法,利用一次RT-PCR反应,即可同时扩增JEV的349 bp和SIV 155 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(HCV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)核酸扩增结果为阴性,对JEV和SIV的最低检出量分别为100和10 pg的cDNA.该方法适合对JEV和SIV的联合检测和鉴别诊断.

一起猪乙脑的RT-PCR诊断与防制

2006年9月,新郑市某猪场发生了一种以初产猪流产、死产为特征的疾病。提取流产胎儿的脑RNA,采用猪乙脑病毒E基因的一对特异引物,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,检测猪乙脑病毒为阳性,结合病史和临床症状,诊断为猪乙脑病毒病。对该猪场采取综合防制措施,取得了较好的效果。

猪乙型脑炎病毒SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

为建立猪乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,根据E基因序列,设计1对特异性引物,建立检测JEV的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法灵敏度达到103拷贝/μL,对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)均无交叉反应,具有良好的特异性和重复性;采用JEV攻毒小鼠,荧光定量PCR比普通PCR更能灵敏地检出组织带毒量。该方法可用于组织样品中乙脑病毒的定量检测以及临床乙脑病毒感染的早期检测和定量分析猪乙脑病毒感染程度。

免疫增强剂提升猪用灭活疫苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂对猪细小-乙脑二联灭活疫苗的免疫效力提升作用,将免疫增强剂以伴侣形式与疫苗共同混合免疫5~6月龄阴性后备母猪和种公猪,检测其抗体水平。结果显示,免疫增强剂与疫苗混合免疫后1周抗体全部转阳,免疫后1~6月平均抗体效价均显著高于不含免疫增强剂的常规疫苗组,表明该免疫增强剂能够显著提升猪细小-乙脑二联灭活疫苗对后备母猪和种公猪的免疫效力。