猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与猪伪狂犬活疫苗混合后对其体外效价的影响

为了解猪支原体肺炎活疫苗与猪伪狂犬活疫苗混合对其效价的影响,本研究从市面上采购了15家公司的19批猪伪狂犬活疫苗,分别用广东永顺生物制药股份有限公司的猪用活疫苗稀释液和不同厂家的猪伪狂犬活疫苗专用稀释液同时稀释永顺公司的RM48支原体和相应厂家的猪伪狂犬活疫苗,探究这两种疫苗混合后在25℃放置2小时对RM48支原体效价和伪狂犬效价的影响。结果表明:(1)永顺公司RM48支原体疫苗与不同厂家的伪狂犬疫苗混合后,RM48支原体效价有差异,与其中5个厂家的伪狂犬疫苗混合后,无论是用永顺公司的稀释液还是用伪狂犬疫苗相应厂家的稀释液稀释,对RM48支原体的效价均无明显影响;与其中4个厂家的伪狂犬疫苗混合后,用永顺公司的稀释液稀释效价优于伪狂犬疫苗相应厂家的稀释液;与其中5个厂家的伪狂犬疫苗混合后,用伪狂犬疫苗相应厂家的稀释液稀释效价优于永顺公司的稀释液;与公司7的伪狂犬疫苗混合只能用永顺公司的稀释液稀释,若用公司7的伪狂犬疫苗对应的稀释液稀释对永顺公司RM48支原体影响非常大,支原体的活菌数将降低1000倍。(2)永顺公司RM48支原体疫苗与14批不同厂家的伪狂犬疫苗混合后,无论是用永顺公司的稀释液还是用伪狂犬疫苗相应厂家的稀释液稀释,对伪狂犬疫苗的效价均无明显影响。因此,RM48支原体疫苗与不同厂家猪伪狂犬活疫苗混合后,体外效价结果显示主要对RM48支原体的效价有影响,故需谨慎选择猪伪狂犬活疫苗及稀释液。

3种佐剂对猪口蹄疫-伪狂犬二联基因缺失灭活疫苗的免疫效果评价

为了评价ISA 201、ISA 206和SW 3种佐剂对猪口蹄疫-伪狂犬二联基因缺失灭活疫苗的免疫增强效果,试验采用PCR方法鉴别口蹄疫O/rV-1株+A/rV-2株和伪狂犬RPVS1601-1株是否存在3B基因和gE基因缺失;将口蹄疫O/rV-1株+A/rV-2株和伪狂犬RPVS1601-1株抗原灭活并制成水相,分别与3种佐剂混合制成相应的灭活疫苗,使各抗原最终含量为口蹄疫O/rV-1株和A/rV-2株146S 10μg/头份,伪狂犬RPVS1601-1株1×10^(9)TCLD50/头份。将70只昆明小鼠随机分成ISA 201佐剂组(20只)、ISA 206佐剂组(20只)、SW佐剂组(20只)和PBS对照组(10只),肌肉注射制备的疫苗,首次免疫后2周进行二次免疫,首次免疫后第0,1,2,3,4,5,6周时进行断尾采血,收集血清,用ELISA方法检测白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、γ干扰素(IFN-γ)含量和口蹄疫(O/rV-1型、A/rV-2型)抗体及伪狂犬抗体水平;并在首免2,4,6周时每组随机各取3只小鼠进行眼眶采血,用流式细胞仪检测CD4+和CD8+细胞百分比。结果表明:第3周时,ISA 201佐剂组的小鼠血清IL-2含量最高,显著高于ISA 206佐剂组和SW佐剂组(P<0.05);ISA 201佐剂组IFN-γ含量最高,三个佐剂组之间差异显著(P<0.05)。另外,所有佐剂组的IL-4含量在第2周开始显著高于PBS对照组(P<0.05)。第1~6周,ISA 201佐剂组抗体含量显著高于ISA 206佐剂组和SW佐剂组(P<0.05)。三个佐剂组CD4+/CD8+比值均显著高于PBS对照组(P<0.05),且ISA 201佐剂组的比值显著高于ISA 206佐剂组和SW佐剂组(P<0.05)。说明三种佐剂均能不同程度地提升猪口蹄疫-伪狂犬二联基因缺失灭活疫苗的免疫效果,其中ISA 201佐剂的提升效果最好。

3种免疫增强剂对猪伪狂犬灭活疫苗的免疫效果评价

【目的】评价盐酸左旋咪唑(LH)、刀豆素(ConA)和胞壁酰二肽(MDP)3种免疫增强剂对猪伪狂犬病毒(PRV)灭活疫苗的免疫增强作用。【方法】将免疫增强剂混入灭活的PRV水相,和油相乳化后制成相应含有免疫增强剂的灭活疫苗,使各免疫增强剂终剂量为:LH 7.5 mg·mL^(–1)、ConA 25.0 mg·mL^(–1)、MDP 150.0 mg·mL^(–1)。首次免疫后14 d进行二次免疫,首次免疫后14 d、二次免疫后7和14 d采取小鼠血清,检测相关的细胞因子和特异性抗体水平,并在二次免疫后14 d攻毒,计算最终的攻毒保护率。【结果】相对于白油组,ConA组和MDP组在二次免疫后14 d对小鼠白介素2(IL-2)含量提升效果极显著;LH组在首次免疫后14 d、MDP组在二次免疫后14 d对白介素4(IL-4)含量提升效果显著;3种免疫增强剂分别在二次免疫后14和7 d对干扰素(IFN-γ)和特异性抗体含量提升效果极显著,并提高了攻毒保护率,LH组和ConA组存活率为20%,MDP组存活率为60%。【结论】3种免疫增强剂使用试验剂量均能不同程度地提升猪伪狂犬灭活疫苗的免疫效果,具有较好的应用前景。本研究结果为后续复合免疫增强剂筛选打下了基础。

不同佐剂制备的猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗免疫效果的比较研究

佐剂的剂型对疫苗稳定性、安全性及免疫效力均有一定的影响。为筛选优质佐剂以提高猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗(JS2012ΔgE株)的免疫效果,分别使用水包油包水佐剂(ISA206)、水包油佐剂(ISA28VG)、油包水佐剂(ISA70VG)及水佐剂(Gel02)制备疫苗,并检测各组疫苗理化特性、安全性及免疫效力。结果显示:4种佐剂制备的猪伪狂犬灭活疫苗的理化特性、安全性均达到质量标准;免疫效力比较中,ISA70VG组相比其他免疫组具有较高的抗体水平且持续时间较长,其次为ISA206组;攻毒后,ISA70VG组和ISA206组无任何临床症状及病变。综合安全性及免疫效力,ISA206佐剂及ISA70VG更适合作为制备猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗(JS2012ΔgE株)的佐剂。