2021-2023年河南部分地区猪场猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病抗体检测与分析

为了解河南省猪场主要病毒性疾病抗体水平,于2021-2023年共采集8014份血清样品,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对所采集的样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒gE(PRV-gE)、猪伪狂犬病病毒gB(PRV-gB)的抗体水平进行检测。结果显示,CSFV抗体的总阳性率为85.70%(6868/8014),PRRSV抗体的总阳性率为81.83%(6558/8014),PRV-gE抗体的总阳性率为11.08%(888/8014),PRV-gB抗体的总阳性率为83.10%(6660/8014)。研究表明,CSFV总体疫苗免疫抗体水平良好,能够有效地控制该病在猪场的发生与流行,但猪群仍存在PRRSV和PRV的感染风险,需要完善免疫方案、加强防控。研究结果可为猪场制定合理的免疫程序提供参考,促进养猪行业的健康发展。

天水市规模猪场猪伪狂犬病流行病学调查

为了解天水地区猪伪狂犬病在规模猪场的流行情况,并为该病的有效预防、控制和净化提供数据支撑。2022年2月—10月笔者所在项目组随机选取天水市7个县区的28个规模化猪场,对猪伪狂犬病免疫情况和发病情况等进行问卷调查,同时采集820份血清进行实验室检测。调查结果显示,天水市规模猪场(27/28)基本上都进行了猪伪狂犬病疫苗免疫,部分猪场猪伪狂犬病零星散发,窝产仔数为10~13头,断奶仔猪存活率约90%。实验室检测结果显示:28个规模猪场中11个猪场存在猪伪狂犬病毒野毒感染,猪伪狂犬病毒场感染率为39.29%,PRV-gB抗体合格率为68.57%。可见,天水市部分规模猪场仍存在猪伪狂犬病野毒感染,且存在免疫抗体合格率偏低的现象。

猪伪狂犬病疫苗效力评价方法比较研究

猪伪狂犬病是一种严重危害养猪业的急性病毒性传染病,疫苗免疫是其防控的有效手段。目前正式通过注册生产上市的产品有14个,涉及10个毒株,其效力评价方法及标准不统一。就猪伪狂犬病疫苗的效力评价方法进行比较研究,以期为进一步规范疫苗效力评价方法、建立通用质量标准提供思路。

规模化猪场猪伪狂犬病防控措施和净化要点

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(PRV)引起的以猪发热、脑脊髓炎等为主要特征的急性传染病,各种日龄的猪群都可发病,可造成种猪繁殖障碍、哺乳仔猪死淘率高、商品育肥猪耐过后生长缓慢。猪感染伪狂犬病后潜伏期长,一旦感染,终身带毒并可间断排毒,血清抗体不能完全中和病毒,可保护不发病但不能完全阻止感染;病毒感染机体时以细胞免疫为主,但当前没有简便易行的细胞免疫评估方法;疫苗免疫产生的免疫力短暂,3~4个月后免疫力迅速下降并缺乏保护,给规模化猪场疫病控制和净化工作带来极大的困难。需要根据本场的生物安全条件、管理水平和动物健康状况选择不同的防控和净化措施。

猪伪狂犬病的流行特点与防控措施

猪伪狂犬病是猪极易患的一种急性传染性疾病,一旦在养殖过程中出现,会对猪身体健康造成一定威胁,若防控不及时,还可能出现较高死亡率,制约养殖业的发展。

眉县某猪场猪圆环病毒病与猪伪狂犬病免疫抗体检测与分析

为协助当地动物防疫站和动物卫生监督所对眉县某猪场猪圆环病毒病(PCVD)和猪伪狂犬病(PR)免疫效果评价与监督检查,采集了该场624份血清样品(其中:哺乳仔猪168份,保育猪169份,后备猪144份,种公猪13份,母猪130份),采用间接ELISA抗体检测。结果显示,猪圆环病毒2型疫苗免疫抗体阳性率在81.66%~95.24%之间,平均为86.70%;猪伪狂犬病基因缺失苗免疫抗体阳性率在94.64%~100.00%之间,平均为98.24%。说明该猪场猪圆环病毒病和猪伪狂犬病免疫抗体阳性合格率均达到了国家有关动物疫病免疫计划规定的要求,免疫整体效果较为理想,但仍应定期抽检疫苗质量,持续优化免疫程序。

猪伪狂犬病净化策略与应用

1猪伪狂犬病概述。伪狂犬病(Pseudorabies,PR;Aujeszky’s disease,AD)是由狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种多种动物共患传染病,呈世界性分布。对养猪业的危害最为严重。猪伪狂犬病(PR)引起以下四大临床特征:1)繁殖障碍。

猪伪狂犬病病毒感染及复制影响因素的研究

猪伪狂犬病(Porcinepseudorabies,PR)是由PR病毒(PRV)引起猪的病毒性传染病,对世界养猪业造成了重大经济损失。猪作为PRV唯一的自然宿主,可引起母猪产死胎、木乃伊胎和屡配不孕;公猪睾丸萎缩、精液质量下降,丧失种用功能;新生仔猪高热、出现神经症状且两周龄以内的仔猪病死率可达100%[1]。2011年之前,由于Bartha-K61株疫苗在我国的广泛使用,PR在我国得到了较好的控制。但自从2011年PRV出现变异之后,现有的PR商品化疫苗只能对动物机体提供部分的免疫保护作用并且尚无特效药物治疗[2]。基于此,本文对影响PRV感染与复制的各类因素的最新研究进展作综述,以期为开发高效抗PRV的新型药物或疫苗提供参考依据。

猪伪狂犬病诊断方法与疫苗研究进展

猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)可引起妊娠母猪繁殖障碍和新生仔猪神经症状,可感染人类并引起脑炎,使感染者出现严重的神经症状,直接危害人类健康,因此对该病的研究具有重大意义。近年该病在世界范围内广泛分布,对世界养猪业造成了巨大的经济损失,受到国内外学者的高度关注,对该病的研究也日益深入,在诊断方法及防控机制等方面取得了重要进展。论文就近年来猪伪狂犬病诊断方法及疫苗的发展进行综述,以期为在猪伪狂犬病诊断方法和疫苗选择上提供参考。

猪伪狂犬病研究进展

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的猪的一种急性、高度接触性传染病,临床症状以哺乳仔猪神经症状、成年猪繁殖障碍为主要特征。随着猪养殖行业发展,该病已成为常见疫病,给养猪业带来了巨大的经济损失。文章阐述总结猪伪狂犬病最新研究进展,重点阐述猪伪狂犬病诊断和防控方法,以给科研领域和生产中提供参考。

2021-2023年上海市猪伪狂犬病净化监测分析

为了解后非洲猪瘟时代上海市种猪场猪伪狂犬病防控净化情况,2021-2023年对上海市14个种猪场共1933份猪扁桃体组织和精液进行伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)检测,共3108份血清进行伪狂犬病病毒gE抗体和gB抗体检测,并对检测结果进行了时间、空间分析。结果显示,2021-2023年监测的14个种猪场PRV病原学检测均为阴性,血清样品PRV gE抗体总阳性率为0.32%,个体阳性率分别为0.51%、0.20%和0.27%,场群阳性率分别为7.14%、14.29%和7.14%。统计不同地区种猪场PRV野毒感染情况,结果显示奉贤区PRV gE抗体阳性率最高,崇明区、浦东新区、嘉定区和江苏大丰区gE抗体均为阴性;从季度分布来看,4个季度的PRV gE抗体阳性率都低于1%,但第一和第二季度样品gE抗体阳性率明显高于第三、四季度的;gB抗体检测结果显示2021-2023年监测的14个种猪场gB抗体总体合格率达93.31%,个体合格率分别为96.33%、93.72%和90.26%。此外,不同区及不同季度的种猪场PRV gB抗体的合格率均超过90%,说明疫苗免疫效果良好。结果表明上海市自2014年开展猪伪狂犬疫病净化工作至今,猪伪狂犬病防控净化已取得阶段性成效。

猪源Rab基因shRNA文库与稳定细胞株的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响

【目的】探究Rab家族蛋白在猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)感染宿主细胞中的作用。【方法】以猪肾上皮细胞(PK15)为试验模型,构建Rab基因shRNA文库,并用嘌呤霉素筛选获得稳定的能够抑制猪源Rab基因表达的细胞株。用实时荧光定量PCR检测细胞敲减效率,通过流式细胞术检测敲减Rab基因对PRV增殖的影响;用Western blotting检测PRV-gB蛋白表达量,使用实时荧光定量PCR检测敲减Rab基因后PRV-gB、PRV-TK基因以及相关细胞炎性因子表达量。【结果】试验成功构建包含13种Rab基因敲减细胞系的shRNA文库。流式细胞术检测结果显示敲减Rab基因能显著抑制PRV-GFP增殖(P<0.05);病毒滴度与Western blotting检测结果表明,敲减Rab基因极显著抑制子代病毒的产生以及PRV-gB蛋白的表达(P<0.01)。实时荧光定量PCR检测结果显示,敲减Rab基因会显著或极显著抑制PRV-gB、PRV-TK基因表达(P<0.05;P<0.01);敲减Rab14和Rab27基因后细胞中IFN-β、ISG15、IL-1β、IL-18基因表达量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。【结论】敲减Rab基因能够抑制PRV增殖。研究结果为进一步研究Rab基因在PRV生活周期中发挥的作用奠定基础。

猪伪狂犬病毒荧光重组酶介导核酸扩增快速检测方法的建立与应用

【目的】基于荧光重组酶介导核酸扩增(Recombinase-aided amplification,RAA)技术,建立一种猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)快速检测方法。【方法】根据PRV gE基因序列,设计特异性引物及探针,优化扩增体系,建立PRV荧光重组酶介导核酸扩增检测方法,检验其特异性、敏感性和重复性,应用该方法对临床样品进行检测。【结果】该方法在43℃恒温反应23 min即可完成PRV核酸扩增,最低检出限为111 copies·μL^(-1);与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemicdiarrheavirus,PEDV)、猪轮状病毒(Porcinerotavirus,PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)、猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)均无交叉反应。重复性试验显示,组内和组间变异系数均小于5%;40份临床样品检测结果显示PRV阳性率为15%(6/40),检测结果与常规聚合酶链式反应(PCR)一致。【结论】成功建立了简便快速、高效准确的PRV实时荧光RAA检测方法,为PRV的快速检测和流行病学调查提供了新的检测手段。

干扰素调节因子敲减细胞系的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响

旨在揭示干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRFs)对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)增殖的影响,本研究通过shRNA技术构建敲减IRF 1-9的PK15细胞系,并检测其敲减效率。采用流式细胞术以及滴度测定检测敲减IRF 1-9后PRV的增殖情况;利用RT-qPCR技术检测PRV感染细胞后PRV-gB、IFN-β、ISG-15和IL-6的mRNA表达水平;Western blot技术检测PRV感染细胞后gB蛋白的表达水平。敲减效率测定结果显示,PK15细胞中的IRF 1-9 mRNA表达水平均有显著降低;流式细胞术及滴度测定结果表明,敲减IRF 1-9基因后有助于PRV的增殖;RT-qPCR及Western blot结果证明,敲减IRF 1-9基因后,PRV-gB mRNA及蛋白表达水平均有显著提高;细胞炎性因子的mRNA表达水平检测结果发现,敲减IRF 1-9抑制PRV诱导的IFN-β、ISG-15以及IL-6 mRNA表达。综上所述,IRF 1-9是PRV在PK-15细胞内复制的宿主限制因子。

2022—2023年新疆部分地区猪伪狂犬病毒抗体检测及分析

试验旨在了解2022—2023年新疆部分地区猪群中伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染情况和免疫抗体水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对新疆6个地区13个规模化养猪场的510份血清样品分别进行了PRV-gE和PRV-gB两种蛋白的抗体检测。结果显示,2022—2023年,新疆部分地区的猪群平均PRV-gE蛋白抗体阳性率为21.76%(111/510),不同地区与不同规模化养殖场间的平均PRV-gE蛋白抗体阳性率存在较大的差异。新疆地区规模化猪场平均PRV免疫抗体阳性率为59.41%(303/510),低于国家规定标准(70%),仅有38.46%(5/13)的猪场免疫抗体阳性率达到了国家规定标准,不同地区与不同规模化养殖场间的PRV免疫抗体阳性率存在较大的差异。研究表明,2022—2023年新疆部分地区PRV野毒感染率仍处于较高水平,免疫合格率较低,存在较大的风险,需加强对PRV的免疫防控工作。

猪伪狂犬病疫苗研究概况

猪伪狂犬病(Porcine pseudorabies,PR)是由猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种猪的急性传染病,疫苗免疫是有效预防该病的主要措施。2011年以来由于PRV变异毒株的出现,原有商品化疫苗对PRV变异毒株的免疫保护效果下降,致使PR在我国再度流行,研发可有效预防PRV变异毒株的猪伪狂犬病疫苗成为新的研究热点。论文从PRV疫苗的种类分析比较不同时期、不同方法构建的PRV疫苗优缺点,并阐述不同种类的PRV疫苗的特性及免疫保护效果等研究现状,以期为相关领域研究人员提供参考。

辣蓼黄酮缓解猪伪狂犬病病毒诱导的小鼠炎症及相关信号通路研究

为研究辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(ethyl acetate of flavonoids from Polygonum hydropiper L,FEA)对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染小鼠诱导的炎症反应及炎症相关信号通路的调节作用,以50~200 mg/kg体重的FEA处理PRV感染的小鼠炎症模型后,检测各组小鼠免疫器官指数变化,脾脏匀浆液中氧化应激相关因子、炎症相关因子的水平或表达量,以及NF-κB等炎症相关信号通路的活化情况。结果显示,50和200 mg/kg体重的FEA能降低PRV感染的小鼠脾脏指数(P<0.05);50~200 mg/kg体重FEA能不同程度的降低PRV感染的小鼠脾脏细胞中ROS、NO水平,IL-1β、IL-6、MCP-1和TNF-α等细胞因子的含量及mRNA表达,以及XOD、MPO、iNOS的酶活性(P<0.05),升高IL-10的水平和GSH的酶活性(P<0.05)。此外,FEA降低了PRV感染的小鼠脾脏细胞中p-p65/p65、p-JNK/JNK和p-p38/p38等炎症相关信号通路蛋白的磷酸化比值(P<0.05)。结果表明,FEA能减缓PRV诱导的小鼠氧化应激状态和炎症反应,发挥体内抗炎作用,其可能是通过抑制NF-κB和MAPK等炎症相关信号通路的活化发挥作用。

致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。该分离株经细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第24代毒价达108.5 TCID50/mL。免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PRV阳性血清中和。电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观,无囊膜的病毒粒子直径约110 nm～150 nm,有囊膜的成熟病毒粒子直径约150 nm～180 nm。PCR鉴定该毒株含有gE基因,其序列与GenBank登录的7株PRV同源性为97.7%～100%。用不同剂量病毒培养物接种家兔于24 h～72 h内全部死亡。研究表明,PRV-JF分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定了基础。

猪伪狂犬病病毒感染小鼠诱导氧化应激的研究

旨在研究猪伪狂犬病病毒(PRV)感染小鼠后体内的氧化应激。40只昆明系小鼠设置空白对照组、PRV感染组(10^(0)TCID_(50)、10^(1)TCID_(50)、10^(2)TCID_(50)),采用肌肉注射联合滴鼻的方式感染小鼠,0.1mL/只。观察记录小鼠的临床表现,接种7d后采集小鼠脑、脾脏、肺脏和胸腺。测定免疫器官指数,PCR法检测PRV,HE染色观察小鼠脑、脾脏和肺脏组织结构病理学变化;RT-PCR法检测脾脏、肺脏氧化应激指标相关指标mRNA表达水平。结果显示,感染组小鼠脑、脾、肺均检测到PRV抗原;10^(2)TCID_(50)PRV组小鼠死亡率10%,其他组均未出现死亡;PRV感染小鼠后显著降低小鼠脾脏指数,极显著降低胸腺指数,显著或极显著上调脾和肺组织中iNOS、Nrf2及脾组织中NQO1的mRNA表达水平,极显著降低脾和肺组织中Keap1、脾组织中HO-1的mRNA表达水平;HE染色显示PRV感染小鼠的脑组织出现“血管套”现象,脾脏红髓增宽,脾小体减少和消融,红髓变宽,白髓萎缩,肺脏出现间质性肺炎。结果表明,PRV感染可成功诱导小鼠体内氧化应激,PRV剂量为10^(1)TCID_(50),0.1mL/只,该结果为进一步研究伪狂犬病病毒的致病机制和筛选抗PRV感染的有效药物奠定了基础。