一株高分化效率的永生化猪脂肪前体细胞系建立

[目的]本研究旨在获得可以稳定传代并且始终保持高分化效率的猪脂肪前体细胞系。[方法]采集1日龄约克夏仔猪背部皮下脂肪组织,分离原代猪皮下脂肪前体细胞(porcine subcutaneous preadipocytes,PSPA),利用过表达SV40T的慢病毒感染从而获得永生化的PSPA,进一步通过有限稀释法获得了107株单克隆细胞系,从中筛选出一株具有高分化效率的单克隆细胞系,命名为Pig#4。通过比较相近代数时Pig#4与永生化PSPA、3T3-L1小鼠脂肪前体细胞系的分化效率,验证单克隆细胞在高代数时的分化效率。[结果]Pig#4 PSPA细胞在高传代数(P30)仍具有与永生化的PSPA细胞系相似的外形特征和增殖能力,仍能保持与3T3-L1细胞系近似的分化效率。并且,相较于原代PSPA细胞,Pig#4 PSPA细胞具有更高表达分化与聚脂成熟相关基因的趋势。[结论]获得了1株可以稳定传代并保持高分化效率的永生化猪脂肪前体细胞系。

miRNA-27b-3p对猪脂肪前体细胞分化的影响

为研究miRNA-27b-3p对猪脂肪前体细胞分化的影响,试验首先对miRNA-27b-3p的靶基因进行预测,然后将miRNA-27b-3p和阴性对照分别转染猪脂肪前体细胞,使用qRT-PCR和ELISA试剂盒检测靶基因在24、48 h转录水平和翻译水平的表达量;甘油三酯检测试剂盒检测脂肪前体细胞中甘油三酯的含量。预测结果显示,miRNA-27b-3p靶向调控影响脂肪沉积的关键基因LPL(脂蛋白酯酶基因);qRT-PCR结果显示,miRNA-27b-3p转染24 h后猪脂肪前体细胞中LPL基因的表达量极显著下调(P<0.01),而转染48 h无明显差异;ELISA结果显示,miRNA-27b-3p转染24 h后猪脂肪前体细胞中LPL蛋白表达量显著下调(P<0.05),转染48 h后猪脂肪前体细胞中LPL蛋白表达受到极显著抑制(P<0.01);甘油三酯检测结果显示,猪脂肪前体细胞中的甘油三酯含量显著降低(P<0.05)。结论:miRNA-27b-3p可以靶向调控LPL基因的表达,抑制猪脂肪前体细胞的分化。

胰岛素诱导基因1和2在猪前体脂肪细胞分化过程的表达

为探讨胰岛素诱导基因1和2(Insig1,Insig2)在猪前体脂肪细胞中的表达规律,分离得到猪前体脂肪细胞,并诱导分化,利用油红O染色提取法测定了细胞中的甘油三酯含量,同时采用实时定量RT-PCR方法检测了脂肪细胞分化标志基因、胰岛素诱导基因1和2的表达。结果表明:在猪前体脂肪细胞诱导分化过程中,Insig1的mRNA表达显著增加(P<0.05);Insig2的mRNA表达量在诱导后24 h显著增加(P<0.05),而后降低。