猪卵泡液在猪体外受精中的应用

自 1 96 5年观察了猪卵泡液 (p FF)对小鼠卵母细胞减数分裂的作用 [1 ]以来 ,对p FF在猪卵母细胞体外成熟、体外受精和卵裂及体外胚胎发育中的作用已进行了深入研究。对 p FF组分的研究和应用 ,能促进卵泡液等重要生殖资源的充分利用 ,并有利于为生殖细胞的体外发育寻求新的培养基添加剂。

猪卵泡液提取物制备人抑制素α单抗的研究

目的制备人抑制素α(INHα)亚基多肽单克隆抗体(McAb)。方法以猪卵泡液粗提物为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS-1小鼠骨髓瘤细胞融合。杂交瘤细胞用人工合成的人抑制素α亚基37～65片段包被,间接ELISA法筛选。结果获稳定分泌抗人抑制素α亚基37～65片段单抗细胞3株。结论免疫学和免疫组化的结果表明3株细胞有特异性和实用性。

猪卵泡液中的一种非甾体抗原因子可阻断由雌二醇诱导的猴体LH峰

临床使用人绝经期促性腺激素(hMG)以期刺激产生自然的卵巢周期,实践证明,不论治疗时间、用药剂量或是周期中所能达到的雌激素浓度,都难于出现自发的 LH 峰。同样,在用纯的 FSH 或hMG 刺激的猴,也证明若存在卵巢过度刺激可阻断雌激素对于 LH 峰的正反馈作用。作者提出当卵巢受到外源性刺激时可能分泌某种(或某些)因子,这些因子能阻断雌激素诱导的 LH 峰。已知猪卵泡液(pFF)

猪卵泡液(抑制素)抑制切除卵巢大鼠的FSH脉冲式分泌

已知一些雌性哺乳动物 LH 的分泌是呈脉冲式的,但是尚未证实 FSH 的分泌是否也呈脉冲式,因此作者用切除卵巢的大鼠观察 FSH 分泌形式,并从猪卵泡液(PFF)中获得抑制素(inhibin),用以研究其对 FSH 分泌的影响。材料与方法成年雌性大鼠,实验前4周切除卵巢,静脉插入硅胶管,24小时后开始采血,每10分钟取血250μl,连续3小时。放射免疫法测定血FSH 和 LH 浓度,取血后补入等量盐水。

猪卵子体外受精研究

本研究旨在探讨影响猪卵子体外成熟、猪精子体外获能和猪卵子体外受精的某些因素。主要研究:(1)猪卵体外成熟所需的时间;(2)促性腺激素和猪卵泡液对猪卵体外成熟的影响;(3)咖啡因、肝素和离子钙I-A_(23187)对猪精子体外获能的促进作用;(4)不同体外受精次数对猪卵体外受精结果的影响;(5)不同种类猪精液的体外受精能力。各试验组的结果比较主要根据体外受精后卵子的卵裂率,数据用卡方(x^2)进行统计学分析。 试验结果表明:(1)猪卵子体外成熟需要32—36小时,经32—36小时体外成熟的 卵子体外受精后卵裂率(2—4细胞期)达31.16％,明显高于其他对照组(P<0.01);(2)促性腺激素和猪卵泡液能够促进猪卵子体外成熟,当0.25国际单位/毫升PMSG和10％猪卵泡液,或者0.25国际单位/毫升FSH和10％猪卵泡液分别加入到猪卵子体外成熟中,经此培养后的猪卵子体外受精卵裂率分别达到23.95％和35.00％,明显高于对照组(P<0.05);(3)咖啡因、肝素、离子钙I-A_(23187)对猪精子体外获能有促进作用。在精子预培养液中加入0.05毫克/毫升肝索,在受精液中加入2毫克/毫升咖啡因,获得了体外受精后最高的卵裂率36.16％,明显高于其他组(P<0.01);(4)多次体外受精法有助于提高体外受精率,因为卵子的体外成熟是不同步的,但是超过2次又是有害的。

聚乙烯醇和卵泡液添加方式对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

本试验研究目的在于探讨在猪卵母细胞体外成熟(IVM)过程中,聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)和猪卵泡液(porcine follicular fluid,PFF)添加方式对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活早期胚胎发育的影响。卵母细胞、卵丘细胞复合体(COCs)在含有HCG和PMSG的改良TCM-199+10%FBS+10%猪卵泡液(PMH-PFF)或改良TCM-199+10%FBS+0.1%PVA(PMH-PVA)成熟液中培养22~23 h;再移至无HCG和PMSG的PM-PFF或PM-PVA的成熟液中成熟培养至44 h。试验:(1)处理组1:使用PMH-PFF培养22~23 h后,更换PM-PFF继续培养至44 h;(2)处理组2:使用PMH-PFF培养22~23 h后,更换PM-PVA继续培养至44 h;(3)处理组3:使用PMH-PVA培养22~23 h后,更换PM-PVA继续培养至44 h;(4)处理组4:使用PMH-PVA培养22~23 h后,更换PM-PFF继续培养至44 h。将在不同成熟体系中IVM 44 h后的卵母细胞进行固定染色,鉴定卵母细胞核和细胞质成熟情况;对在不同处理组的成熟液中成熟培养44 h的卵母细胞进行孤雌激活后放入PZM-3中培养,分别于第2天、第7天统计分裂率和囊胚发育率。结果表明:经44 h成熟培养后,处理组1卵母细胞核成熟率(42.00%)显著低于处理组2(64.67%)、处理组3(69.00%)、处理组4(64.33%)核成熟率(p<0.05)。处理1、处理2、处理4的卵母细胞皮质颗粒分布类型Ⅲ比例(62.00%/54.67%/46.67%)均高于处理组3(28.67%),且处理组1、处理组2卵母细胞皮质颗粒分布类型Ⅲ比例显著高于处理组3卵母细胞皮质颗粒分布类型Ⅲ比例(p<0.05)。处理组1、处理组2、处理组4孤雌分裂率(81.92%/76.00%/73.33%)均高于处理组3(69.00%)。处理组3孤雌激活囊胚率(9.67%)显著低于处理组1(23.33%)、处理组2(25.00%)、处理组4(23.00%)(p<0.05)。结果表明,在本研究条件下,处理组2的各项指标均优于其它组,IVM液中添加猪卵泡液培养22~23 h后更换添加有PVA的IVM液继续培养至44 h,更有利于促进IVM猪卵母细胞核成熟、胞质成熟以及早期孤雌胚胎发育。

体细胞核移植克隆民猪:培养液对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响

体外培养成熟的卵母细胞是进行克隆猪研究所需受体卵母细胞的主要来源,卵母细胞成熟质量与体细胞核移植胚胎发育能力关系密切.为提高卵母细胞体外成熟率和成熟质量,进而提高体细胞核移植猪的成功率,本实验以改进的TCM199培养液为基础液(T),分别添加10%的猪卵泡液(T+pFF)和10%的胎牛血清(T+FBS)后进行卵母细胞成熟培养,以成熟率和体细胞核移植胚胎发育率等重要指标为标准,研究了pFF和FBS对卵母细胞成熟及核移植胚胎发育能力的影响.T,T+pFF和T+FBS组在成熟培养后42h卵母细胞成熟率分别为(53.2±3.8)%,(69.7±3.8)%和(70.2±3.7)%,添加10%的pFF和FBS显著(P<0.05)提高了卵母细胞成熟率;3组不同成熟培养液获得的成熟卵母细胞在体细胞核移植后囊胚发育率差异不显著,但T+pFF组的囊胚细胞数(34.5±2.24)显著(P<0.05)高于T组的囊胚细胞数(26.6±1.25).来自T+pFF组的体细胞核移植胚胎经手术法移植入发情周期为第0天或第1天的18头受体母猪输卵管,其中有3头受体母猪妊娠发育到期,获得克隆民猪14头,其中有6头健康成活至今.实验结果表明,培养液中添加10%pFF可以有效提高卵母细胞成熟比例和成熟质量,在含有10%pFF培养液中获得的成熟卵母细胞具有支持核移植胚胎全程发育的能力.