猪口蹄疫O型病毒样颗粒疫苗田间试验报告

猪口蹄疫O型病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗是一种基于病毒颗粒表面抗原的疫苗,通过模拟病毒颗粒的结构和表面蛋白,刺激机体产生特异性免疫反应,从而达到预防猪口蹄疫的目的。本试验主要探讨猪口蹄疫O型VLPs疫苗接种后的免疫反应及抗体测定,为猪口蹄疫O型VLPs疫苗的优化和应用提供科学依据。试验表明,试验A组免疫2次,第60d猪口蹄疫O型抗体阳性率100%,口蹄疫3ABC抗体阳性率0%;试验B组免疫1次,第0d、15d、30 d、60d、90d、120d、150d、165d猪口蹄疫O型抗体阳性率分别为0%、77.1%、85.4%、82.6%、86.7%、80%、85.7%、80%,达到国家免疫合格率的目标要求,口蹄疫3ABC抗体阳性率0%。

猪口蹄疫O型灭活疫苗质量控制与安全性评估的技术研究

在生猪养殖业的发展过程中,猪疫病对产业的健康发展产生了严重威胁。疫苗作为生猪疫病防控的重要手段,其质量控制与安全性评估显得尤为重要。以猪口蹄疫O型灭活疫苗为研究对象,从质量控制和安全性评估2个方面进行了技术分析,验证了其质量。

猪瘟活疫苗-猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗联合免疫效果的评价

为建立一种既有效又简便的猪瘟活疫苗(CSF)和猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗(FMD O-A)联合免疫方法,达到“一针多防”的目的,通过动物免疫试验,评价了CSF和FMD O-A联合免疫的可行性。采用左、右各一针同步2点接种试验猪群(联合免疫),以2种疫苗分别单独免疫的猪群为对照,在免疫前0 d、免疫后14、40、60和90 d采集血清检测2种疫苗对应的抗体。经统计学分析发现,2种疫苗的联合免疫不影响其抗体的产生,并且能够保持抗体在猪群个体间的稳定分布。

猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗的临床免疫效果评价

为了评价猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗的临床免疫效果,使用该疫苗对36头健康仔猪进行免疫,并于首免后28 d进行二次免疫,采用液相阻断法检测免疫前后血清中的O型及A型中和抗体的滴度,同时采用ELISA法检测免疫前后猪只中IFN-γ、IL2、IL4、IL18这四种细胞因子的表达情况。结果显示,首免后O型、A型抗体滴度相对免疫前极显著提高(P<0.01),二免28 d后O型、A型抗体滴度相对二免前显著提高(P<0.05);首免后IFN-γ、IL2两种细胞因子的浓度相对免疫前显著提高(P<0.05),IL4、IL18两种细胞因子的浓度相对免疫前极显著提高(P<0.01),二免28 d后IFN-γ、IL2、IL4、IL18四种细胞因子的浓度相对二免前极显著提高(P<0.01)。本研究表明,在免疫猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗后,可以快速激发特异性的免疫应答,O型、A型的中和抗体及IFN-γ、IL2、IL4、IL8细胞因子都获得显著提高,并且二免后提高更为显著。

猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)免疫攻毒保护试验

口蹄疫是一种由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄动物,如牛、羊、猪、骆驼、鹿等共患的急性、热性、高度接触性和可以借助空气传播的传染病。口蹄疫疫苗是防治口蹄疫的发生、流行最主要的武器之一。猪O型口蹄疫灭活疫苗系用猪源强毒接种BHK-21或IBRS-2细胞单层,收获细胞毒液,经二乙烯亚胺(BEI)灭活,与油佐剂混合乳化制成。本研究选用3批猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)进行免疫攻毒保护试验,即疫苗免疫效力检验。实验结果表明,用O/MYA98/BY/2010株攻毒,3批疫苗每头份疫苗分别含有10.32、10.81、11.84 PD50,3批疫苗1头份免疫动物LPB-E抗体效价≥1︰64的均在80.0%以上。可以看出,猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)对我国目前流行的猪O型口蹄疫MYA98流行毒株具有良好的免疫保护效果。

猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗组合与猪口蹄疫O型灭活苗同时分点免疫效果评价

推广猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗组合与猪O型口蹄疫灭活苗同时分点免疫(三苗两点同步免疫)技术,免疫45 d后随机对规模养猪场及部分散养户68头猪进行了免疫效果评价。结果表明,三苗两点同步免疫临床上无严重的不良反应,且免疫后抗体有效保护率均达70%以上,该技术可在基层动物防疫中大力推广应用。

2021年新疆部分地区规模化猪场O型口蹄疫病毒抗体检测与分析

为了解2021年新疆不同地区规模化猪场O型口蹄疫的免疫水平,本试验采用液相阻断酶联免疫吸附试验(LPBELISA)方法对采自3个地区的7家规模化猪场的353份血清样品进行抗体检测与分析。结果显示,O型口蹄疫病毒抗体平均阳性率为76.77%(271/353),达到国家规定标准(70.00%);3个地区的O型口蹄疫病毒抗体阳性率均高于70.00%;7个猪场中,仅有B场的抗体阳性率为62.96%,低于国家规定标准,该场需要及时加强免疫,并科学合理地调整其免疫程序。本结果可为新疆地区猪场O型口蹄疫的防控提供依据。

2021年成都市猪O型口蹄疫免疫抗体的监测与分析

为了解2021年成都市猪O型口蹄疫免疫抗体水平,本实验室采用酶联免疫吸附(ELISA)法对成都市17个区(市)县共计3213份猪血清样品进行猪O型口蹄疫免疫抗体检测。结果显示:2021年成都市春季、夏季、秋季、冬季的免疫抗体合格率分别为98.8%(509/515)、96.1%(1326/1380)、96.2%(409/425)、95.6%(854/893),免疫抗体平均合格率为96.4%(3098/3213)。表明2021年成都市猪O型口蹄疫免疫效果总体较好,春季的免疫抗体合格率稍高于其他三季,冬季略有下降。

猪O型口蹄疫一免与二免抗体水平监测对比试验报告

为探讨猪O型口蹄疫不同免疫情况下的免疫保护效果,本试验通过采用液相阻断-酶联免疫吸咐实验,对12个大、中、小规模养殖企业(场)猪口蹄疫O型灭活疫苗一次与二次接种后的抗体水平及抗体合格率进行监测对比。结果表明,二免较一次免疫接种对猪群免疫保护效果更好。

不同厂家猪O型口蹄疫灭活疫苗免疫效果监测

为准确掌握投放安徽省的A、B、C、D 4个厂家的猪O型口蹄疫灭活疫苗在实际生产中的免疫效果,2008年秋季至2011年春季,共采集了844个猪场10 439份免疫接种后1个月左右血清样,采用液相阻断ELISA检测了O型口蹄疫抗体滴度。结果显示,4个厂家疫苗的免疫接种效果差异明显,B厂疫苗免疫效果最好,D厂疫苗次之;不同年份疫苗的免疫接种效果差异显著,2010年的疫苗免疫接种效果最好。

猪O型口蹄疫病毒重组结构蛋白的纯化及间接ELISA方法的建立

将猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)的VP0、VP1、VP3基因,通过SUMO融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为55、48和40ku的融合蛋白,Western blotting检测结果表明,表达的蛋白质具有良好的生物学活性。采用亲和层析法纯化表达产物,分别以纯化的SUMO-VP0、SUMO-VP1、SUMO-VP3蛋白为抗原建立了FMDV的间接ELISA检测方法。200份田间血清样品的检测结果表明建立的SUMO-VP0-ELISA、SUMO-VP1-ELISA、SUMO-VP3-ELISA检测方法均具有良好的特异性和敏感性。

猪圆环病毒2型Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白在杆状病毒中共表达及鉴定

为在真核细胞中共表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白,本研究将其各自编码基因克隆于杆状病毒双表达载体(pFastBacTMDual)中构建重组转移质粒(pFBD-Cap-VP1),转化至DH10BacTM感受态细胞中制备重组杆粒(rBacmid-Cap-VP1),并转染Sf21昆虫细胞,拯救出能够共表达PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白的重组杆状病毒(rBac-Cap-VP1)。SDS-PAGE和western blot检测结果表明,共表达的重组PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白产物的分子量分别为28 ku和30 ku,各占总蛋白含量的11.6%和3.4%,能够分别与PCV2和FMDV抗体发生特异性反应,表明共表达蛋白具有良好的反应原性。本研究为PCV2和FMDV基因工程二联亚单位疫苗的研制奠定了基础。

利用SUMO表达系统高效表达猪O型口蹄疫病毒VP0、VP1、VP3基因

根据GenBank中公布的猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)全基因合成了FMDV结构蛋白前体蛋白P1基因,同时设计了扩增FMDV结构蛋白VP0、VP1和VP3基因的引物。以P1基因为模板,分别经PCR扩增获得FMDV VP0、VP1和VP3基因。扩增产物克隆于Blunt载体中,酶切后将目的片段连接到原核表达载体SUMO中,构建重组表达质粒SUMO-VP0、SUMO-VP1和SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳可见融合蛋白均获得高效表达,融合蛋白表观分子质量分别约为55、48和40 ku。在IPTG浓度为1.0 mmol/L,温度为37℃,诱导5 h时融合蛋白表达量最大。Western blotting结果表明,融合蛋白均可被FMDV阳性血清识别,反应原性良好。

猪瘟、猪O型口蹄疫、高致病性猪蓝耳病疫苗联合免疫效果评价

采用猪瘟脾淋苗、猪O型口蹄疫多肽苗（或灭活苗）和高致病性猪蓝耳病灭活苗同时分点注射。对40—50日龄健康仔猪进行联合免疫，观察其免疫反应，并经正向间接血凝和ELISA试验评价其免疫效果。结果发现：三种疫苗联合免疫，临床上未发现严重的免疫反应，对猪瘟脾淋苗、猪O型口蹄疫多肽苗的免疫效果无明显的干扰或抑制作用，对高致病性猪蓝耳病和猪O型口蹄疫灭活苗免疫效果有显著的干扰或抑制作用。研究表明：三种疫苗联合免疫具有较高安全性，猪瘟脾淋苗、猪O型口蹄疫多肽苗可进行联合免疫，但高致病性猪蓝耳病灭活疫苗、猪O型口蹄疫灭活苗应单独使用。

猪O型口蹄疫3种抗体检测方法的比较

用液相阻断ELISA、正向间接血凝试验、VP1结构蛋白ELISA3种抗体检测方法同时检测来自全国10个省25个规模猪场、18个屠宰场及散养户的937份猪血清中的O型口蹄疫抗体。结果表明,这3种方法检测的抗体阳性率分别为75.9%、81.8%和62%。与液相阻断ELISA相比,正向间接血凝试验比VP1结构蛋白ELISA的符合率高,前者的敏感性为94.9%,特异性为59.3%,后者的敏感性为75.2%,特异性为79.6%。研究为猪O型口蹄疫免疫抗体监测工作的实施提供了较好的参考。

不同厂家猪O型口蹄疫疫苗免疫效果比较

使用A、B、C、D 4个厂家的猪O型口蹄疫疫苗分别对仔猪、育肥猪、种猪按免疫程序进行免疫,免疫后28d采血,采用韩国进口O型口蹄疫抗体检测试剂检测免疫抗体,了解了4个厂家疫苗免疫后猪的免疫副反应情况和免疫效果。

猪O型口蹄疫母源抗体消长规律的测定和免疫效果观察试验

本试验测定了6窝母猪免疫后产小猪0、1、7、14、21、28、35、42日龄O型口蹄疫母源抗体消长情况和首免、二免免疫抗体测定。结果表明:未吃初乳的0日龄仔猪均无母源抗体,1日龄仔猪母源抗体滴度达到高峰,以后逐渐降低;口蹄疫母源抗体对1～14日龄的仔猪有保护,部分仔猪在21日龄还有保护。28～35日龄首免后21日其免疫抗体合格率低于70%,28日后达到峰值86.7%,一个月后再免一次,则有效免疫抗体水平可维持较长时间,以后逐渐降低,至5个月后已不能保护,种猪此时须再次免疫接种猪口蹄疫疫苗。

两种O型口蹄疫灭活疫苗免疫猪抗体消长规律比较

为准确掌握猪0型口蹄疫灭活疫苗在免疫后抗体的消长动态,在两个规模猪场各选择4窝体质健康、体重接近的仔猪,随机分成4组,每组10头,分别接种两个不同厂家猪0型口蹄疫灭活疫苗,采用IHA方法检测免疫前后抗体效价。结果显示:两种疫苗免疫机体后,都能刺激机体产生免疫应答反应,但注射一次很难达到免疫效果,必须在首免后30天进行二免,才能保证免疫抗体合格率达到70名以上的标准;M苗需要加大剂量免疫,才能满足预防猪口蹄疫疫病的需要,而N苗用标准剂量免疫就可以对机体产生有效的保护作用,同时N苗免疫后刺激机体产生抗体的速度快,可用于紧急免疫接种;另外在制定免疫程序前,必须对新生仔猪的母源抗体进行监测,掌握本场内的母源抗体的消长规律,以便确定合适的首免日龄。

不同厂家猪O型口蹄疫灭活疫苗免疫效果研究

为准确掌握汉中市规模猪场使用量最大的两种O型口蹄疫灭活疫苗(M和N)在实际生产中的免疫效果,在两个规模猪场各选择4窝体质健康、体重接近的仔猪,随机分成4组,每组10头,分别接种两个不同厂家猪O型口蹄疫灭活疫苗。采用IHA方法检测免疫前后抗体效价。结果显示:N苗免疫效果稍好于M苗,但两种疫苗用标准剂量免疫,免疫效果都不佳,必须要在首免后30 d进行二免,才能保证免疫抗体合格率达到70%以上的标准。N苗免疫后抗体上升快,而M苗免疫后抗体上升慢,但持续时间长。N苗加大剂量免疫后,其免疫效果与标准剂量相比无明显差异。M苗加大剂量免疫后,其免疫效果明显优于标准剂量,能满足预防猪口蹄疫疫病的需要。结论:广大养殖户可以根据实际情况,科学合理选择使用口蹄疫疫苗。

利用霍乱毒素B亚单位展示猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白主要抗原表位

为探讨以霍乱毒素B亚单位为载体制备口蹄疫亚单位疫苗的可行性,利用E.coli表达CTB-GHloop嵌合基因,用SDS-PAGE分析目的基因的表达及表达产物的可溶性,利用神经节苷脂(GM1)为抗原鉴定重组蛋白五聚体的形成。将目的蛋白浓度调整为200μg/ml,以白油佐剂乳化制备疫苗,免疫健康仔猪,免疫后利用ELISA测定特异性抗体水平,评价免疫后体液免疫反应,利用淋巴细胞增殖实验评价细胞免疫水平。结果表明嵌合基因在E.coli中获得高效表达,重组蛋白可溶,并能够形成五聚体;Western-blot结果显示重组蛋白能够与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生反应;以每头仔猪200μg免疫,试验猪产生较高的抗体水平与细胞免疫反应。