竞争ELISA检测猪呼吸与繁殖综合征病毒抗体研究

应用抗PRRSN蛋的单克隆抗体建立了竞争ELISA检测技术,与美国IDEXX公司的间接ELISA检测试剂盒对比检测了30份SPF猪血清,29头SPF猪人工接种呼吸与繁殖综合征病毒后于5d、12d、29d采集的猪血清共87份,临床血清95份,以及其他相关病毒的阳性血清。实验证明,竞争ELISA的检测阴阳性限值为30%,检测特异性为100%,在人工攻PRRSV病毒第五天的猪血清中,可检测到抗PRRSVN蛋白抗体,12dpi,阳性检出率为93%,29dpi,阳性检出率为100%,与IDEXXPRRSVELISA试剂盒进行比对,结果表明,二种检测方法检测美洲株PRRSV抗体的符合率为90%以上,但检测欧洲株抗体符合率较低。建立的竞争ELISA检测技术对于PRRSV美洲株抗体的早期诊断有非常重要的意义。

猪呼吸与繁殖综合征的防治

猪呼吸与繁殖综合征,又被称为"猪蓝耳病"、"神秘猪病"等,据研究显示,该病是由鼠的乳酸脱氢酶增高病毒变异引发而成,严重影响猪只的成长发育。通过对猪呼吸与繁殖综合征临床症状介绍,探讨了其发病原因,以及该病的诊治防控措施,旨在最大程度上降低养猪场猪只猪呼吸与繁殖综合征患病几率,保护养殖户的生命财产安全。

猪呼吸与繁殖综合征病毒综述

早在20世纪80年代末美国就在猪群中发现了一种新疾病,其临床症状在妊娠母猪表现为后期出现严重的繁殖障碍;初生仔猪多孱弱并伴有严重的肺炎;育成猪生长缓慢,且死亡率增高。德国在1990年也发现了类似症状的疾病,并且这一疾病在往后的几年里迅速传至欧洲其他国家。尽管当时有几种关于该病病原的说法,但真正致病的病原并不清楚,因而在美国该病得名“神秘的猪病”或被称为“猪流行性流产和呼吸症”。

断奶仔猪呼吸与繁殖综合征和猪瘟混合感染的诊断

采集江苏常州地区某猪场40日龄病死断奶仔猪的肺、脾、淋巴结,经过处理提取组织中的总RNA后,随机引物反转录,以得到的总cDNA为模板特异性PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳。鉴定结果:扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测出猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)及猪瘟病毒(HCV)的特异性条带。结合该场的病史、流行病学调查及病理变化,表明该猪场断奶仔猪发生的疫病为猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(HCV)混合感染。

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特性分析(英文)

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)CH1a株GP5基因插入到伪狂犬病病毒(PseudorabiesVirus,PRV)BarthaK61株TK基因中,获得了一株TK-/gE-表型的重组伪狂犬病病毒,命名为rPRVGP5。经生长动力学、表达动力学和间接免疫荧光证实PRRSVGP5在重组病毒中获得了表达,表达蛋白的抗原性与亲本病毒相似,rPRVGP5在不同的细胞上毒价和细胞病变与BarthaK61比较无显著差异。4只PRV抗体阴性的绵羊,每只接种106.0PFU的rPRVGP5可以完全抵抗103LD50伪狂犬病强毒S株的攻击。10头PRV、PRRSV抗体阴性的仔猪滴鼻接种rPRVGP5107.0PFU/头并在接种后63d攻击PRRSVCH1a株105.0TCID50/头,攻毒后3d和5d出现了PRRSV荧光抗体和ELISA抗体,在攻毒后14d检测到了PRRSV中和抗体,BarthaK61活疫苗组和对照组至实验结束时仍未检测到PRRSV中和抗体。这说明rPRVGP5免疫产生了针对PRRSV的回忆性免疫应答。

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白特异性卵黄抗体的制备与鉴定

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)的基因片段克隆至载体pET-30a,转化重组质粒至Escherichia coli BL21(DE3)表达融合蛋白6×His-N,并以其为抗原免疫蛋鸡,制备特异性抗PRRSV-N卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY).结果显示:6×His-N在BL21中的表达量为60.2mg·L-1;将纯化浓缩的6×His-N与弗氏佐剂乳化,连续3次免疫海兰蛋鸡后,经ELISA检测,首免后第36天抗6×His-NIgY抗体为阳性(P/N=2.44);第83天的P/N值达到最高,为5.63,抗体经1:640稀释后,P/N值为2.29;经SDS-PAGE和Western blot分析,提取的卵黄抗体的纯度高且具有良好的免疫反应性.研究表明,抗PRRSV-N蛋白的IgY制备具有简便、成本低廉等特点,可用于PRRSV检测试剂盒的开发.

地高辛标记cDNA探针检测猪繁殖与呼吸综合征病毒

本研究以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株ORF7基因为模板,通过RT-PCR技术扩增出394 bp的cDNA。用PCR纯化试剂盒纯化PCR产物,并以此为模板制备出地高辛标记的cDNA探针。特异性试验表明,该探针仅与PRRSV核酸反应,与PPV、PRV、FMDV、HCV及PCV2的核酸反应为阴性。敏感性检测表明,采用CSPD化学发光检测时,硝酸纤维素膜上最低检出量为62.5 pg;尼龙膜上最低检出量为0.5 pg。应用该探针,在尼龙膜上对10份PRRSV阳性病料的组织RNA样品进行检测,结果均为阳性,与RT-PCR检测结果一致,证明该方法可用于PRRSV临床样品检测。

新疆石河子地区猪场呼吸与繁殖障碍综合征免疫抗体水平检测与分析

为了解新疆石河子地区猪呼吸与繁殖障碍综合征(PRRS)免疫抗体水平及其消长的规律,采集周边不同地区13个猪场共726份血清,采用间接ELISA方法检测PRRS免疫抗体水平并进行分析。结果显示,该地区PRRS免疫抗体阳性率平均为87.33%,免疫抗体阳性率超过80%的猪场占全部猪场的76.92%,同时,母猪、种公猪、育肥猪免疫抗体的整体水平均超过85%,而仔猪的免疫抗体水平较低,仅为71.11%。结果表明当地应用的PRRS疫苗的免疫原性较好,免疫效果确实;仔猪免疫抗体水平较低的具体原因尚不清楚。该结果可为进一步了解石河子周边地区猪场PRRS免疫抗体的现状,制定合理的治疗措施和免疫程序提供参考。

猪呼吸与繁殖障碍综合征与猪伪狂犬病混合感染的诊治

从发病情况、临床症状、实验室检验、防治措施等方面对汕头市辖区一猪场发生的以发热、呼吸困难、皮肤发红变紫为主要病征的猪高热病病例进行诊断,确诊为汕头市首例猪呼吸与繁殖障碍综合征及猪伪狂犬病混合感染,为生猪养殖敲响了防控猪呼吸与繁殖障碍综合征、猪伪狂犬病的警钟。

猪呼吸与繁殖障碍综合征的防治措施

猪呼吸与繁殖障碍综合征又称为猪流行性流产及呼吸综合征,是由猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒感染所导致的一种接触性传染流行疾病,患病猪会出现呼吸困难,采食量显著下降,生长发育迟缓以及繁殖功能障碍等症状,严重损害生猪的健康状况以及养殖的经济效益。猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒通过患病猪的精液、粪尿排泄物以及体液等均可以进行传播,传播的方式也多种多样,一旦出现猪呼吸与繁殖障碍综合征疾病则难以根治,本文对猪呼吸与繁殖障碍综合征疾病的防治措施进行介绍,旨在为生猪的健康养殖带来帮助。

紫锥菊复方对猪呼吸与繁殖障碍综合征疫苗免疫效果的影响

为了研究紫锥菊复方对猪呼吸与繁殖障碍综合征疫苗免疫效果的影响,试验将三元杂交仔猪随机分为4组,即对照组(不用药)与试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(紫锥菊复方1.5%组、1.0%组、0.5%组),并分别于20、35、50、60、70、80日龄采血,检测仔猪外周淋巴细胞转化率、猪呼吸与繁殖障碍综合征抗体水平等免疫指标。结果表明,一定剂量的紫锥菊复方能显著提高仔猪外周血淋巴细胞转化率(P<0.05),极显著提高猪呼吸与繁殖障碍综合征疫苗的抗体水平(P<0.01)。提示中药紫锥菊复方对仔猪的免疫功能具有一定的促进作用。

猪繁殖与呼吸障碍综合症疫苗对猪体细胞免疫效果的研究

为了探讨猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)CH-1R株活疫苗对蓝耳病经典毒株JXA1的保护效果,采用CH-1R株活疫苗免疫14日龄PRRSV阴性仔猪,1周后攻毒,对12、21、35、49、63日龄时的仔猪外周血中淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的比例和外周血中抗体进行检测。结果表明:免疫7 d后,CD4+/lym的比值升高,CD8+/lym的比值降低,CD4+/CD8+的比例升高;攻毒2周后,CH-1R株活疫苗免疫组仔猪CD4+/lym和CD8+/lym的比值均升高,并且CD4+/CD8+的比例也升高,说明CH-1R株活疫苗对经典毒株JXA1可能具有保护效果。

重组腺病毒载体表达的α干扰素对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的抑制作用

目的:研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)新的防治方法。方法:利用表达猪α干扰素的重组腺病毒(rAd-IFNα),通过病毒滴度、间接免疫荧光试验和实时定量RT-PCR检测,在Marc-145细胞上观察其对高致病性PRRSV SY0608株的复制抑制作用。结果:将rAd-IFNα接种细胞后24 h,再感染PRRSV,可以有效阻止PRRSV造成的细胞病变,PRRSV滴度和mRNA水平明显降低;该抑制作用随rAd-IFNα接种剂量的增加而增强,但随病毒培养时间延长而逐渐减弱。此外,将PRRSV感染细胞后24 h,再接种rAd-IFNα,仍可以有效降低PRRSV滴度和mRNA水平,并且rAd-IFNα对PRRSV传统毒株S1株同样具有明显的抑制作用。结论:rAd-IFNα可以有效抑制PRRSV在Marc-145细胞上复制,为PRRSV的防治提供了理论依据。

过硫酸氢钾复合物对三种常见猪病毒病原消毒效果的实验室评价

为分析过硫酸氢钾复合物对3种常见的猪重要病毒病病原体的消毒效果,试验采用定量灭活试验分别检测过硫酸氢钾复合物作为消毒剂对猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒2型的杀灭效果。结果显示,在室温条件下,过硫酸氢钾复合物消毒剂浓度大于和等于1.25g/L(1∶800稀释)时,分别与猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒2型作用5min对这些病毒的杀灭率均大于99.9%。试验的结果表明,过硫酸氢钾复合物对于3种猪病毒病病原体具有很好的杀灭效果,可作为生猪养殖场防控猪病毒病的有效消毒剂。

1例保育猪呼吸道疾病的诊断报告

江西泰和某猪场保育猪发生严重的呼吸道疾病,送检6头已死亡的保育猪。通过临床发病特征、病理剖检等初步诊断,推测导致死亡的可能病原为猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)等病毒感染,继发细菌感染。取样送至江西农业大学预防兽医学实验室进行RT-PCR/PCR检测结果表明,发病猪PRRSV、PCV-2和猪瘟病毒(CSFV)阳性,同时,从发病猪肺脏和心包积液中分离出了一株副猪嗜血杆菌(HPS)经16SrDNA检查确定分离菌为HPS。综上,保育猪发生呼吸道疾病的致病因素为PRRSV、PCV-2、CSFV混合感染,继发HPS感染。药敏试验结果显示分离HPS对诺氟沙星、阿米卡星高度敏感。根据此诊断结果,为该猪场提供了防治呼吸道病的措施。

猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性

【目的】建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)易感的猪CD151转基因PK-15细胞系,研究CD151分子在PRRSV感染猪源细胞中的作用。【方法】用RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151全长cDNA,测序正确后克隆入真核表达载体pcDNA3;用重组载体pcDNA-CD151转染PK-15细胞,经G418抗性筛选获得转基因细胞系PK15-CD151,用RT-PCR和免疫荧光试验检测CD151表达;用VR-2332株PRRSV分别感染PK-15细胞、PK15-CD151细胞、MARC-145细胞和3D4-CD163细胞,定期观察细胞病变,用RT-PCR和免疫荧光试验检测病毒RNA基因组和病毒抗原,用半数组织细胞感染剂量测定病毒滴度。【结果】从猪巨噬细胞中克隆得序列正确的猪CD151 cDNA;从重组载体转染的PK-15细胞培养中筛选得G418抗性细胞克隆,并能正确表达猪CD151分子;在PRRSV感染后,PK15-CD151细胞虽然不表现明显的细胞病变,但能检测到病毒RNA基因组和病毒抗原,并能产生较高滴度的感染性病毒;该细胞系已在体外传30代以上,第10、20、30代细胞的PRRSV滴度无明显变化。【结论】猪CD151基因转染能使非易感PK-15细胞获得对PRRSV的易感性,提示猪CD151参与PRRSV感染猪源细胞。

当前我国猪病流行动态与防治对策

一、当前猪病流行趋势 1．新的疫病不断增多，病原变异加快，毒力增强。圆环病毒中PCV2a基因组的1042核苷酸发生胸苷激酶的缺失即为PCV2b，PCV2b的毒力大于PCV2a。猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒表现Nsp2基因的部分缺失和ORF5基因糖基化位点的增加。口蹄疫病毒中传统新猪毒和泛亚毒疫苗对O型耿马属口蹄疫保护率不高。

断奶仔猪圆环病毒2型与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断

仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）主要是由猪圆环病毒2型（PCV2）感染6～8周龄仔猪所引起的一种以渐进性消瘦、黄疸、间质性肺炎及淋巴系统退化为主要症状的传染病[1-3].该病毒主要感染猪的免疫器官,造成免疫系统功能降低,该病发病症状与猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）等病毒感染相似,且也易混合感染,此外,PMWS也常引起细菌继发混合感染,给养猪业造成了巨大的经济损失[2-5].

TUNEL法检测PRRSV感染Marc-145细胞凋亡的研究

为了研究PRRSV诱导Marc-145细胞凋亡的动态变化规律,收集PRRSV-SC1株感染Marc-145细胞后0h、24h、48h、72h、96h、120h、144h和相同时间点未接种病毒的细胞样品,采用TUNEL法进行细胞凋亡的检测。结果表明,PRRSV能诱导Marc-145细胞发生凋亡;在PRRSV感染后24h开始出现凋亡,48h凋亡更加明显,72h达到高峰,随后细胞凋亡水平又有所下降,在感染后144h,细胞的凋亡水平低于正常组。