猪囊尾蚴磷蛋白在毕赤酵母中的表达及初步应用

将猪囊虫磷蛋白P2基因克隆到毕赤酵母表达系统分泌性表达载体pPIC9K中 ,构建了重组表达载体pPIC9K P2。经测序证明基因序列完全正确 ,从而大量制备重组质粒pPIC9K P2 ,并用SalⅠ、BglⅡ两种内切酶分别线性化 ,然后分别电转化毕赤酵母菌种GS115 ,采用G418抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株 ,利用MM和MD培养基鉴定重组菌株Mut表型 ,然后用甲醇进行诱导表达 ;并对表达产物通过SDS PAGE、Western blot和ELISA分析 ,结果表明 ,重组菌株成功地分泌表达了分子量大小为 12 6kD ,表达量占分泌总蛋白的 3 3 % ,且具有免疫反应活性的重组磷蛋白 。