酵母表达系统制备的猪圆环亚单位疫苗效果评估

猪圆环病毒目前仍然是危害养猪业的重要病原,接种疫苗是目前最有效的预防措施,采用昆虫-杆状病毒或大肠杆菌系统表达制备的猪圆环亚单位疫苗已经在临床上推广使用,免疫效果良好。酵母表达系统因具有成本低、易培养、无内毒素等优势,理论上更适合用于动物疫苗的开发。笔者利用国内自主知识产权的马克斯克鲁维酵母(KM)系统表达猪圆环cap蛋白,蛋白表达水平可达到2g/L;通过对生产工艺的不断优化,可获得高纯度的cap蛋白,且均能自我组装形成VLP。酵母源圆环亚单位疫苗免疫猪后,产生的抗体滴度高于进口的圆环亚单位疫苗,且安全性良好,免疫猪未出现任何不良反应。

以胸膜肺炎放线杆菌菌影作为佐剂的猪圆环病毒亚单位疫苗的研究

为评价胸膜肺炎放线杆菌菌影(APP-BGs)作为猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗佐剂的效果,本实验原核表达及纯化了重组Cap蛋白(r Cap),并分别以法国ISA61(r Cap+ISA61)和APP-ghost(r Cap+APP-ghost)作为佐剂两次免疫仔猪,并设PCV2灭活苗组和对照组,在加强免疫14 d后攻毒。结果显示,r Cap+APP-ghost组仔猪的抗体水平显著高于r Cap+ISA61组(p<0.05);攻毒后,r Cap+APP-ghost组仔猪未检测到病毒血症,而对照组仔猪在攻毒后14 d^28 d检测到病毒血症;攻毒后28 d,r Cap+APP-ghost组仔猪腹股沟淋巴结中的病毒载量显著低于r Cap+ISA61组和对照组仔猪的病毒载量(p<0.05);同时,r Cap+APP-ghost组仔猪相对体质量增长率显著高于对照组仔猪的相对体质量增长率(p<0.05)。以上结果表明,APP ghost可以作为有效的佐剂增强机体免疫反应,提高机体的抗病原感染能力。

2种佐剂在猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗中的效果比较

为给猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗选择一种理想的佐剂,以增强机体对抗原的适应性免疫应答,协同提高动物免疫力。实验用水包油Merckinade SDA 25佐剂和双向Montanide ISA 206佐剂,分别按各自说明制备猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗,再对两种佐剂的疫苗进行稳定性、黏度、安全及效力检验,比较评价出猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗的理想佐剂。结果表明,两种佐剂疫苗的稳定性、黏度、安全均合格,无明显差异;但Montanide ISA 206佐剂疫苗较Merckinade SDA 25佐剂疫苗诱导抗体效价更高。据此,笔者认为,Montanide ISA 206佐剂是猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗比较理想的佐剂。

甲醛灭活猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液的最佳条件研究

为探究甲醛对猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液最佳的灭活条件,本试验采用10%的甲醛溶液与猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液混匀,使甲醛终浓度分别达到0.05%、0.07%、0.10%、0.15%、0.20%,在4~8℃下经过不同时间的灭活,通过对灭活液不同时间点的无菌检验及灭活检验,综合判定灭活效果。结果显示:猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液在甲醛终浓度为0.07%时灭活72h,或甲醛终浓度为0.10%和0.15%时灭活60h,或甲醛终浓度为0.20%时灭活48h,均取得可靠的灭活效果。考虑到甲醛的毒副作用,笔者认为4~8℃下用0.07%甲醛终浓度灭活72h是比较理想的灭活条件。