以胸膜肺炎放线杆菌菌影作为佐剂的猪圆环病毒亚单位疫苗的研究

为评价胸膜肺炎放线杆菌菌影(APP-BGs)作为猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗佐剂的效果,本实验原核表达及纯化了重组Cap蛋白(r Cap),并分别以法国ISA61(r Cap+ISA61)和APP-ghost(r Cap+APP-ghost)作为佐剂两次免疫仔猪,并设PCV2灭活苗组和对照组,在加强免疫14 d后攻毒。结果显示,r Cap+APP-ghost组仔猪的抗体水平显著高于r Cap+ISA61组(p<0.05);攻毒后,r Cap+APP-ghost组仔猪未检测到病毒血症,而对照组仔猪在攻毒后14 d^28 d检测到病毒血症;攻毒后28 d,r Cap+APP-ghost组仔猪腹股沟淋巴结中的病毒载量显著低于r Cap+ISA61组和对照组仔猪的病毒载量(p<0.05);同时,r Cap+APP-ghost组仔猪相对体质量增长率显著高于对照组仔猪的相对体质量增长率(p<0.05)。以上结果表明,APP ghost可以作为有效的佐剂增强机体免疫反应,提高机体的抗病原感染能力。

转移因子对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响

为探寻转移因子(TF)对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响,将猪脾脏研磨,并反复冻融研磨液,离心获取冻融上清,用超滤法从上清液中提取转移因子。TF经理化检验合格后,以添加剂的形式与猪圆环病毒亚单位疫苗(Cap疫苗)混合,制成TF–Cap疫苗,并和未添加TF的Cap疫苗同时进行小鼠免疫试验。TF–Cap疫苗和Cap疫苗免疫的小鼠都设一免组和二免组,首次免疫后每隔10 d对实验鼠进行尾静脉采血,并用间接ELISA方法测定血清中猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平。结果表明:用超滤法制得的TF,多肽含量为1.83 mg/mL;抗体检测数据显示,4个免疫组与对照组(注射生理盐水)的抗体检测值有极显著差异(P<0.01),而4个免疫组之间无显著差异(P>0.05),TF–Cap疫苗一免组的抗体水平与Cap疫苗二免组的抗体水平相当,表明在圆环病毒基因工程疫苗中添加TF可一定程度的提高免疫动物的抗体水平。

转移因子对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响

为探寻转移因子（TF）对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响，将猪脾脏研磨，并反复冻融研磨液，离心获取冻融上清，用超滤法从上清液中提取转移因子。TF经理化检验合格后，以添加剂的形式与猪圆环病毒亚单位疫苗（Cap疫苗）混合，制成TF—Cap疫苗，并和未添加TF的Cap疫苗同时进行小鼠免疫试验。

猪圆环病毒2型疫苗及其效力评价方法比较研究

为探索对不同猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)疫苗产品进行统一质量评价的可行性,对国内该类疫苗产品及其现有效力评价方法进行了归纳和比较研究。结果发现,目前猪圆环病毒2型疫苗类产品种类有25个,且疫苗毒株数量多达10余个,效力检验方法包括传统的免疫攻毒法、血清学方法和多种不同的替代方法,但尚没有统一的效力评价体系。本研究可为进一步完善PCV2疫苗效力评价方法、统一评价疫苗效力、提高产品质量提供参考。

猪圆环病毒病流行现状、新型疫苗与防控措施

1猪圆环病毒病概述。猪圆环病毒病是一种动物病毒。在20世纪90年代,世界范围内人们在病猪及一些无明显临床症状猪体内检测到了一种新型猪小环装样病毒。该病毒与已知的由PK-15细胞培养污染而分离的猪圆环病毒(Porcine circovirus,缩写:PCV)不同。

猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗的佐剂筛选

为筛选适合猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)基因工程亚单位疫苗的佐剂,将重组的PCV2 Cap蛋白抗原与佐剂混合,分别制备氢氧化铝胶佐剂、ISA 15A VG佐剂和IMS 251C VG佐剂疫苗,并选择PCV2阴性仔猪(14日龄)开展动物安全性检验和免疫效力检验。安全性检验结果显示:3组免疫高剂量(2倍免疫剂量)佐剂疫苗的仔猪在免疫后14 d内,精神、食欲、呼吸均正常,注射部位及其周围组织未见异常,仅IMS 251C VG佐剂组有2头仔猪出现发热症状(1~2 d)。免疫效力检验结果显示:3种佐剂疫苗免疫攻毒组仔猪免疫当天(接种前)PCV2抗体均为阴性,免疫第28天抗体均为阳性,其中ISA 15A VG佐剂组、IMS 251C VG佐剂组仔猪抗体S/P值均显著高于氢氧化铝胶佐剂组(P<0.05),均极显著高于空白对照组(P<0.01);于免疫第28天进行攻毒实验,攻毒对照组100%(5/5)发病,氢氧化铝胶佐剂组60%(3/5)保护,ISA 15A VG佐剂组和IMS 251C VG佐剂组均100%(5/5)保护。结果表明:ISA 15A VG是PCV2基因工程亚单位疫苗的适宜佐剂。

猪圆环病毒2型疫苗的应用和研发进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,感染后会导致猪淋巴系统功能衰竭和免疫抑制,严重危害养猪业的正常生产。近年来,PCV2疫苗的研发一直备受关注,相关研究已取得一定进展,已上市了多种疫苗,包括灭活疫苗、亚单位疫苗、嵌合疫苗和合成肽疫苗等。此外,研究人员还在疫苗的免疫机制和接种策略方面进行了深入探讨,为疫苗的研发和应用提供了重要的理论支持。然而,目前PCV2疫苗的研究仍面临着诸多挑战,如临床流行的主要毒株从PCV2b逐渐转变为PCV2d,疫苗安全性、长期免疫效果等,现有疫苗的免疫效果仍需进一步研究证实。本文对PCV2及其现有疫苗的生产现状、新型疫苗的研发进展、佐剂在疫苗中的应用、疫苗对不同基因型的保护能力等进行了综述,以期为我国有效防控PCVAD提供科学参考。

猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗不同免疫程序的免疫效果比较分析

为了评估不同免疫策略对猪场免疫效果和经济效益的影响,以确定最佳的疫苗免疫程序,本试验将处于产前1个月的四胎次健康三元母猪随机分为2个组,A组(联合免疫组)母猪于产前27 d联合免疫猪圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗(圆柯欣+柯喘宁+稳柯健),其所产仔猪于21日龄联合免疫圆柯欣、柯喘宁和稳柯健;B组(对照组)母猪于产前34和27 d分别免疫稳柯健、猪圆环病毒疫苗和猪肺炎支原体疫苗二联疫苗(圆-支二联疫苗),其所产仔猪于14日龄免疫圆-支二联疫苗,28日龄免疫稳柯健。统计和分析免疫各组临床指标、生产性能和持续性抗体水平。结果显示,免疫疫苗后,2个组的母猪采食情况均正常;2个组的仔猪整体精神状态良好,哺乳情况正常,均未出现咳嗽和喘气等呼吸道疾病。在试验期间内,2个组的母猪的窝产健仔数和仔猪出生健仔均重并无差别。A组和B组的出生至23日龄死淘率、出生至50日龄死淘率分别为3.77%、5.11%和4.07%、5.43%,A组略优于B组。抗体监测结果显示,A组母猪的CSFV和PCV2抗体水平较B组无显著差异(P>0.05);A组仔猪的CSFV抗体阳性率与B组无明显差异(P>0.05),而PCV2抗体水平在免疫早期阶段(21日龄)明显高于B组(P<0.05)。结果表明,猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗可以联合免疫,且免疫后相互之间不干扰。该联合免疫策略在确保免疫效果的同时,简化了疫苗免疫程序,为确定最佳的疫苗免疫程序提供了有价值的临床应用参考。

无针免疫猪圆环病毒2型亚单位疫苗效果评价

为评价用无针注射器接种猪圆环病毒2型亚单位疫苗的安全性及免疫效果,为无针免疫的使用、推广提供数据支撑,将40头3~5周龄三元猪随机均分为4组,即有针注射1头份剂量组以及无针注射低(1/4头份)、中(1/2头份)、高(1头份)剂量组,分别于第1、21天开展两次免疫,观察试验前后动物的临床症状、体重变化,并对第7、14、21、28、42天各组动物体内抗体水平变化及免疫效率等进行研究。结果显示:采用无针注射器进行免疫时动物疼痛反应较小,注射速度快,免疫后各组动物精神状态、饮食、饮水、自发活动等无异常;与有针注射组动物相比,减量注射(1/4头份)可以显著促进仔猪增重(P<0.05),同时可以达到和有针注射同样的免疫效果(P>0.05);同等剂量亚单位疫苗注射免疫后,无针免疫组动物体内抗体水平更高(P<0.01),且各组动物体内抗体阳性率均可有效维持至试验结束。结果表明,用无针注射器接种猪圆环病毒2型亚单位疫苗安全性高、耐受性好、有效性稳定,无针注射器减量免疫可以达到有效保护作用的同时促进了仔猪生长,可尝试推广应用。

猪圆环病毒2型疫苗抗原定量方法及其应用

猪圆环病毒病是一种可以给猪场造成严重经济损失的疾病,当前,猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)感染在很多猪场仍有很高的比例,给猪场管理带来了巨大压力。有效的疫苗免疫有利于猪抵抗病毒,减少病毒血症的发生和缩短带毒时间,因此,疫苗免疫仍是猪场控制PCV2的重要手段。

不同圆环病毒2型疫苗对生长育肥猪影响的研究

为评估不同圆环病毒2型疫苗对生猪生长肥育期免疫效果,本试验选择国产和进口两种疫苗,对同一批23日龄断奶长大二元杂交去势仔猪360头,随机分成A、B、C三组,每组120头,A组免疫国产SEPPIC佐剂PCV2a全病毒灭活疫苗(WH株)、B组免疫进口水质佐剂亚单位疫苗(PCV2a Cap蛋白),C组不做任何处理。结果显示,与国产圆环病毒2型疫苗相比,进口疫苗在生长性能、抗体水平及免疫保护期等方面均表现出了较强的优势,经济效益较为显著。

酵母表达系统制备的猪圆环亚单位疫苗效果评估

猪圆环病毒目前仍然是危害养猪业的重要病原,接种疫苗是目前最有效的预防措施,采用昆虫-杆状病毒或大肠杆菌系统表达制备的猪圆环亚单位疫苗已经在临床上推广使用,免疫效果良好。酵母表达系统因具有成本低、易培养、无内毒素等优势,理论上更适合用于动物疫苗的开发。笔者利用国内自主知识产权的马克斯克鲁维酵母(KM)系统表达猪圆环cap蛋白,蛋白表达水平可达到2g/L;通过对生产工艺的不断优化,可获得高纯度的cap蛋白,且均能自我组装形成VLP。酵母源圆环亚单位疫苗免疫猪后,产生的抗体滴度高于进口的圆环亚单位疫苗,且安全性良好,免疫猪未出现任何不良反应。

猪圆环病毒2型Rep/Rep'和Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护性试验

猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1基因编码的Rep/Rep'蛋白与病毒复制酶相关,ORF2编码的Cap蛋白为病毒核衣壳,是病毒保护性抗原。为比较这3种蛋白作为亚单位疫苗的免疫保护性,本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep、-rRep'和-rCap蛋白制备亚单位疫苗及PCV2灭活苗,分组免疫BALB/c鼠进行攻毒,以评价疫苗的免疫保护力。对PCV2-rRep和-rRep'亚单位疫苗免疫鼠血清ELISA抗体检测表明,于免疫后第14 d抗体全部转阳,第35 d抗体效价分别达到1∶42 667和1∶51 200。PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫组于第21 d抗体转阳,第35 d抗体效价分别达1∶2 133和1∶333。攻毒试验表明,PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠获得完全保护;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫组无保护作用。血清中和试验表明,PCV2-rCap蛋白亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠血清中和抗体效价达1∶1 600和1∶800;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫鼠血清无中和病毒能力。该研究表明,PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗具有良好的免疫保护力,可以与PCV2自然感染猪产生的抗Rep蛋白抗体相鉴别,具有良好的开发前景。

猪圆环病毒2型亚单位疫苗的研制及其ELISA抗体评价

为制备并筛选出安全性更好、免疫效果更佳的猪圆环病毒2型(PCV-2)亚单位疫苗,本研究选取本地流行毒株PCV2 TX01株,通过杆状病毒表达系统对Cap蛋白进行高效表达,采用水性佐剂制备成灭活疫苗,从临床症状、日增重和ELISA抗体水平等方面评价免疫后对仔猪的安全性和血清学效力。结果表明,疫苗免疫后仔猪精神、食欲和行为活动均正常,接种部位未见红肿等不良症状,证实疫苗对仔猪安全。免疫组仔猪ELISA抗体效价在1:400~1:800,说明该疫苗免疫后可以有效地刺激仔猪产生体液免疫,可以作为预防猪圆环病毒相关疾病的候选疫苗。

猪圆环病毒2型灭活疫苗佐剂选择

用水包油佐剂Merckinade SDA 25、HS1010和双向佐剂Montanide ISA 206三种不同佐剂分别制成猪圆环病毒2型灭活疫苗,对三种疫苗的稳定性、黏度、免疫仔猪后的安全性及效力进行了比较。试验结果表明,以3000 r/min离心15 min,三种疫苗均无水析出;三种疫苗的黏度均低于200 cP;三种疫苗按2.0 mL/头的剂量接种21日龄健康易感猪,试验猪体温、采食、饮水、精神状况均正常,均无不良临床反应,剖检后各脏器均无病理变化;加强免疫后21d,各组试验猪采血,检测猪圆环病毒2型抗体效价,结果表明,佐剂MontanideISA206相较MerckinadeSDA25可诱导更高水平抗体效价。攻毒试验结果表明免疫组可以得到100%的保护。根据以上试验结果,确定猪圆环病毒2型灭活疫苗使用Montanide ISA 206。

不同圆环病毒病疫苗和蓝耳病灭活疫苗联合免疫的效果比较

【目的】建立一种简便有效的圆环病毒病和蓝耳病联合免疫方法。【方法】在同一个集团2个不同猪场选择3个不同厂家的圆环病毒病疫苗(简称为“A圆环病毒病疫苗”“B圆环病毒病疫苗”“C圆环病毒病疫苗”)和同一猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(CH-1A株,简称为“A蓝耳病灭活疫苗”)同时开展免疫试验,试验的3个处理组均采取14日龄、30日龄2次免疫。A组:免疫A圆环病毒病疫苗1 mL+A蓝耳病灭活疫苗1 mL;B组:免疫B圆环病毒疫苗1 mL+A蓝耳病灭活疫苗1 mL;C组:免疫C圆环病毒病疫苗1 mL+A蓝耳病灭活疫苗1 mL。观测免疫后的体温变化,接种后应激反应、采食量变化、精神状态、异常猪情况;采血检测IgM、IgG抗体,了解抗体变化情况、离散度和新旧感染;检测蓝耳病病毒和圆环病毒的病毒载量变化、血液中核酸阳性率。【结果】2个猪场3个免疫组14日龄、30日龄2次免疫后,体温均有不同程度升高;A组相对B组增重有优势,和C组相差不大;从圆环病毒抗体检测结果来看,A组免疫疫苗后产生IgM、IgG抗体水平更快、更高;H场A组在45日龄检测到PCV2核酸后,没有再检测到,但B组和C组在110日龄均可以检测到PCV2核酸阳性;H场B组110日龄、H场C组70日龄、G场C组可以检测到PRRVS(蓝耳病病毒)核酸。【结论】对比3个试验组的结果发现,免疫A圆环病毒病疫苗1 mL+A蓝耳病灭活疫苗1 mL组免疫效果最佳。这说明圆环病毒病疫苗和蓝耳病疫苗可以联合免疫,不影响抗体的产生。但由于圆环病毒病疫苗不一样,免疫后产生的保护水平有差异,高水平IgG持续时间越长,保护不被感染时间越长。

猪圆环病毒2型合成肽疫苗佐剂筛选与免疫保护性研究

【目的】筛选更安全高效的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)合成肽疫苗佐剂。【方法】将IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、台湾细菌鞭毛、卡波姆、多糖共8种佐剂与适量PCV2多肽抗原按照特定方法配制成不同疫苗,并验证其物理性状,采用小鼠试验初步检验疫苗安全性及免疫效果,筛选出较优的佐剂进行仔猪免疫攻毒保护试验,进一步评估各疫苗的免疫保护效果。【结果】物理性状显示,所有疫苗稳定性均较好,4℃保存期均超过12个月。ISA 61 VG油佐剂黏度较高且乳滴粒径较大,ISA 15A VG、ISA 206 VG双相佐剂次之,其余水佐剂均较低较小。小鼠试验结果显示,除台湾细菌鞭毛佐剂外其他佐剂安全性均良好;小鼠ELISA抗体水平检测结果显示,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组免疫效果明显高于其余疫苗组;综合评定安全性和免疫效果,筛选ISA 61 VG、GEL 02 PR、卡波姆、多糖、ISA 206 VG共5个佐剂组进行仔猪免疫攻毒保护试验。仔猪免疫攻毒保护试验结果显示,免疫后,ISA 61 VG和GEL 02 PR组保护效果明显优于其他佐剂,其制备的疫苗产生的ELISA抗体和中和抗体水平均明显高于其他组,同时还可刺激产生更高水平的细胞因子γ-干扰素(IFN-γ);攻毒后,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组疫苗的仔猪相对日增重显著高于其他佐剂组(P<0.05),且实时荧光定量PCR和免疫组化结果显示,上述疫苗组可显著降低仔猪体内病毒载量(P<0.05)。临床症状观察显示,ISA 61 VG和GEL 02 PR疫苗组无体温升高或被毛粗乱等现象,病理切片表明这2个疫苗组组织病变较轻。【结论】油佐剂ISA 61 VG佐剂和水佐剂GEL 02 PR制备的PCV2合成肽疫苗对预防PCV2感染具有较好的免疫保护作用,试验结果为PCV2合成肽疫苗的研究提供了数据基础。

3种不同类型佐剂的猪圆环病毒2型亚单位灭活疫苗免疫效果的比较研究

为制备猪圆环病毒2型商品化亚单位疫苗选择良好的佐剂,对由水性佐剂GEL 01、白油佐剂以及氢氧化铝胶佐剂分别制备的3种猪圆环病毒2型亚单位疫苗的免疫效果进行比较研究。本实验选取3~4周龄猪圆环病毒2型抗体阴性猪30头,根据试验疫苗接种情况分为6组,分别为:3种不同佐剂制备的亚单位疫苗(A组、B组和C组)、商品化疫苗(D组)以及空白对照组和攻毒对照组,然后进行临床观察、抗体水平监测和免疫效力评价,观察各组仔猪的不良反应情况、抗体水平以及攻毒保护情况。结果显示:3种不同类型佐剂制备的猪圆环病毒2型亚单位疫苗接种猪后均无任何不良反应、能刺激机体产生良好的ELISA抗体水平和免疫效果,但水性佐剂GEL 01制备的疫苗与另外2种佐剂制备的疫苗相比,综合抗体水平、免疫效果等因素,水性佐剂GEL 01制备的疫苗在临床使用上更具优势,为商品化亚单位疫苗佐剂的选择提供了重要的数据支持。

猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗的安全性与生产性能评价

为评估猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗(圆柯欣)在临床上的单次免疫效果,本试验在6个养殖场选取14~19日龄仔猪20770头,分为组1圆柯欣免疫组(亚单位疫苗)和组2圆健免疫组(全病毒灭活疫苗)进行免疫。圆柯欣为单次免疫,圆健为首免后两周进行二次免疫,并在每次免疫之后记录试验猪的免疫应激情况、死淘率和日增重(保育猪和育肥猪)。结果显示:圆柯欣单次免疫的应激率为0.0073%,低于全病毒灭活疫苗免疫组(0.212%),安全性良好;死淘率为2.12%,低于全病毒灭活疫苗免疫组(3.31%);日增重在保育猪和育肥猪中较全病毒灭活疫苗组分别增加25克和17克,经济效益明显。以上研究结果表明,圆柯欣的免疫可为生猪养殖的健康发展提供有力保障。

猪圆环病毒-支原体二联疫苗(诗圆静)免疫攻毒试验

猪圆环病毒2型(PCV2)和猪肺炎支原体(M.hyo)是世界范围内影响猪群健康和给牧场带来严重经济损失的两种主要病原。PCV2是猪圆环病毒相关疾病(PCVD)的主要病原,感染可导致明显的临床症状如种猪繁殖障碍以及生长育肥猪生长迟缓、日增重降低、料重比升高,并发其他疾病,导致死亡率增加;也可能不表现症状,呈亚临床感染状态,导致猪群生长速度变慢,严重影响经济效益。