猪圆环病毒2型疫苗及其效力评价方法比较研究

为探索对不同猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)疫苗产品进行统一质量评价的可行性,对国内该类疫苗产品及其现有效力评价方法进行了归纳和比较研究。结果发现,目前猪圆环病毒2型疫苗类产品种类有25个,且疫苗毒株数量多达10余个,效力检验方法包括传统的免疫攻毒法、血清学方法和多种不同的替代方法,但尚没有统一的效力评价体系。本研究可为进一步完善PCV2疫苗效力评价方法、统一评价疫苗效力、提高产品质量提供参考。

猪圆环病毒2型疫苗的应用和研发进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,感染后会导致猪淋巴系统功能衰竭和免疫抑制,严重危害养猪业的正常生产。近年来,PCV2疫苗的研发一直备受关注,相关研究已取得一定进展,已上市了多种疫苗,包括灭活疫苗、亚单位疫苗、嵌合疫苗和合成肽疫苗等。此外,研究人员还在疫苗的免疫机制和接种策略方面进行了深入探讨,为疫苗的研发和应用提供了重要的理论支持。然而,目前PCV2疫苗的研究仍面临着诸多挑战,如临床流行的主要毒株从PCV2b逐渐转变为PCV2d,疫苗安全性、长期免疫效果等,现有疫苗的免疫效果仍需进一步研究证实。本文对PCV2及其现有疫苗的生产现状、新型疫苗的研发进展、佐剂在疫苗中的应用、疫苗对不同基因型的保护能力等进行了综述,以期为我国有效防控PCVAD提供科学参考。

猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗不同免疫程序的免疫效果比较分析

为了评估不同免疫策略对猪场免疫效果和经济效益的影响,以确定最佳的疫苗免疫程序,本试验将处于产前1个月的四胎次健康三元母猪随机分为2个组,A组(联合免疫组)母猪于产前27 d联合免疫猪圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗(圆柯欣+柯喘宁+稳柯健),其所产仔猪于21日龄联合免疫圆柯欣、柯喘宁和稳柯健;B组(对照组)母猪于产前34和27 d分别免疫稳柯健、猪圆环病毒疫苗和猪肺炎支原体疫苗二联疫苗(圆-支二联疫苗),其所产仔猪于14日龄免疫圆-支二联疫苗,28日龄免疫稳柯健。统计和分析免疫各组临床指标、生产性能和持续性抗体水平。结果显示,免疫疫苗后,2个组的母猪采食情况均正常;2个组的仔猪整体精神状态良好,哺乳情况正常,均未出现咳嗽和喘气等呼吸道疾病。在试验期间内,2个组的母猪的窝产健仔数和仔猪出生健仔均重并无差别。A组和B组的出生至23日龄死淘率、出生至50日龄死淘率分别为3.77%、5.11%和4.07%、5.43%,A组略优于B组。抗体监测结果显示,A组母猪的CSFV和PCV2抗体水平较B组无显著差异(P>0.05);A组仔猪的CSFV抗体阳性率与B组无明显差异(P>0.05),而PCV2抗体水平在免疫早期阶段(21日龄)明显高于B组(P<0.05)。结果表明,猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗可以联合免疫,且免疫后相互之间不干扰。该联合免疫策略在确保免疫效果的同时,简化了疫苗免疫程序,为确定最佳的疫苗免疫程序提供了有价值的临床应用参考。

山药多糖作为猪圆环病毒2型疫苗佐剂的活性研究

山药多糖(Chinese Yam polysaccharide,CYP)是中药山药的主要活性成分之一,具有良好的免疫刺激作用。为了探究山药多糖作为猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)疫苗的佐剂活性,从中药山药中提取分离得到山药多糖,与PCV2灭活抗原液混合后对小鼠进行免疫接种。通过测定血清中特异性抗体及亚型的水平,脾脏淋巴细胞中CD4+和CD8+T细胞的活化水平,记忆T细胞活化水平,细胞因子水平以及淋巴结中生发中心(germinal center,GC)B细胞活化水平,从而评估CYP作为PCV2疫苗的佐剂活性。结果显示,CYP作为佐剂能够诱导特异性抗体IgG及亚型IgG1和IgG2a的表达,促进CD4+T细胞的活化,促进CD8+T细胞的中央记忆T细胞活化,增强IFN-γ和IL-6细胞因子的表达,促进淋巴结GC B细胞的活化。以上结果表明,CYP作为PCV2疫苗的佐剂能够同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,具有开发成畜禽疫苗佐剂的潜力。

猪圆环病毒2型疫苗抗原定量方法及其应用

猪圆环病毒病是一种可以给猪场造成严重经济损失的疾病,当前,猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)感染在很多猪场仍有很高的比例,给猪场管理带来了巨大压力。有效的疫苗免疫有利于猪抵抗病毒,减少病毒血症的发生和缩短带毒时间,因此,疫苗免疫仍是猪场控制PCV2的重要手段。

不同圆环病毒2型疫苗对生长育肥猪影响的研究

为评估不同圆环病毒2型疫苗对生猪生长肥育期免疫效果,本试验选择国产和进口两种疫苗,对同一批23日龄断奶长大二元杂交去势仔猪360头,随机分成A、B、C三组,每组120头,A组免疫国产SEPPIC佐剂PCV2a全病毒灭活疫苗(WH株)、B组免疫进口水质佐剂亚单位疫苗(PCV2a Cap蛋白),C组不做任何处理。结果显示,与国产圆环病毒2型疫苗相比,进口疫苗在生长性能、抗体水平及免疫保护期等方面均表现出了较强的优势,经济效益较为显著。

猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

为了制备猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)Cap蛋白单克隆抗体,试验将Cap基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,将获得的重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)用IPTG进行诱导后表达重组蛋白,利用His标签对表达的重组蛋白进行纯化;将纯化后的重组蛋白于皮下免疫Balb/c小鼠,免疫结束后测定免疫小鼠血清效价,当小鼠血清抗体效价达到1∶100000时进行细胞融合;采用有限稀释法进行亚克隆,筛选能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性杂交瘤细胞株,鉴定杂交瘤细胞株抗体亚类,并选择1株抗体效价最高的细胞株再次注射到小鼠腹腔中(5×10^(5)个/只),取腹水采用亲和层析法对单克隆抗体进行纯化;采用间接ELISA方法测定单克隆抗体效价并检测其特异性,分别采用Western-blot和间接免疫荧光试验检测单克隆抗体的反应性。结果表明:PCR扩增得到大小为708 bp的Cap基因,经双酶切与测序验证后,成功构建重组表达质粒pET28a-Cap;重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)经诱导后表达的重组蛋白可与His标签抗体发生特异性反应,纯化后的重组蛋白在预期位置(31.7 ku)出现清晰的单一条带;共筛选出8株能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性单克隆细胞株(1E5、2A9、3C6、4B3、5F7、6D11、7A2、8G1株),抗体亚类鉴定均为IgG1亚类。其中7A2株抗体效价最高,用于单克隆抗体的制备;间接ELISA方法证实7A2株单克隆抗体仅与PCV-2 Cap蛋白发生反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)不发生反应;Western-blot和间接免疫荧光试验均证实PCV-2 Cap蛋白可被7A2株单克隆抗体特异性识别。说明本试验成功制备出具有高纯度、强特异性、良好反应性的PCV-2 Cap蛋白单克隆抗体。

猪圆环病毒2型疫苗的研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带来巨大的困难。疫苗免疫接种是防控PCV2感染的有效手段,有关PCV2疫苗的研究已成为国内外学者的关注热点。迄今为止,欧美几家跨国公司已先后推出商品化的PCV2灭活疫苗、亚单位疫苗及嵌合病毒疫苗,国内也已研制出PCV2灭活疫苗,这些疫苗的推广应用为有效防控猪圆环病毒病发挥了重要作用。鉴于这些疫苗尚不能完全阻断PCV2传播,无法彻底清除体内感染的病毒,因此,开发高效、价廉的新型活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗是今后研究的趋势。笔者在本文中概括地介绍了目前商品化的PCV2疫苗的特性和免疫效力,并对近年来有关PCV2活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗等新型疫苗的研究进展进行综述,以期为猪圆环病毒病的防制提供参考。

多肽疫苗对猪圆环病毒2型的免疫保护效果研究

为检验猪圆环病毒2型(PCV-2)多肽疫苗对猪免疫保护的效果,采用非蛋白多糖载体耦联多肽作为抗原,以断奶仔猪为试验动物,设多肽疫苗组、常规市售Cap蛋白亚单位疫苗组和不同对照组进行免疫。用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血清特异抗体(Ig G),当抗体达到一定水平时进行攻毒试验,对试验各组的临床症状、特征变化及带毒血症进行观察和动态检测,对圆环病毒易感组织进行病毒检测及组织病理学检查,最终评估该多肽疫苗的免疫效果及保护率。结果显示:多肽疫苗能够快速产生体液免疫应答,具有显著的免疫效果;攻毒后采集的各试验数据也表明该多肽疫苗具有很好的免疫保护作用。

猪瘟兔化弱毒疫苗与猪圆环病毒2型灭活疫苗同时接种的免疫效果评价

为评价猪瘟兔化弱毒疫苗和猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗同时免疫效果,本实验采用猪瘟活疫苗(细胞源)和PCV2灭活疫苗(LG株)两种疫苗同时分点注射和混合注射35日龄仔猪,于免疫后间隔3周、5周、7周、9周采血,通过猪瘟病毒(CSFV)抗体检测试剂盒和PCV2抗体检测试剂盒进行CSFV和PCV2特异性抗体检测。结果显示,无论是两种疫苗同时颈部两侧分点分别注射,还是用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗后混合免疫,免疫后3周CSFV和PCV2抗体均呈阳性,CSFV抗体滴度和PCV2抗体滴度于7周和9周达到峰值,与各疫苗单独免疫对照组抗体产生时间和滴度无明显差异。实验表明,两种疫苗可以同时注射或采用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗进行免疫,均不影响各自免疫抗体的产生。因此,可以将PCV2灭活疫苗作为CSFV活疫苗的稀释剂,采用一次性注射的形式同时接种这两种疫苗,为简化这两种病临床疫苗免疫注射方面提供了实验依据。

猪圆环病毒2型感染对伪狂犬疫苗免疫应答的影响

为明确PCV2感染对伪狂犬(PR)疫苗免疫应答的影响,本研究采用阻断ELISA方法对单独接种猪PR疫苗组(A组)及PCV2人工感染3周后接种猪PR疫苗组(PA组)不同时相血清中的猪PR病毒gB抗体进行检测;同时对不同时相前腔静脉血进行CD4+/CD8+流式细胞术及血常规分析。结果表明,在PCV2感染后2周至5周间,A组白细胞含量均高于PA组,随后PA组白细胞恢复至与A组略高的正常水平;在整个实验中,除接种猪PR疫苗后1周(WPI)和9周(WPI)外的所有时相PA组的淋巴细胞含量均略高于A组;PCV2感染后可使记忆/激活Th细胞数量略有升高,幼稚型Th细胞含量的下降;PCV2感染后2周～7周PA组Tc细胞均高于A组,在9WPIPA组Tc细胞数量显著下降(p<0.05);除9WPI外,A组的S/N值均低于PA组。结果表明,PCV2感染看降低机体产生针对PRVgB特异性抗体水平,而且在一定程度上降低了幼稚型Th细胞及Tc细胞含量。

猪圆环病毒2型感染对猪瘟疫苗体液免疫应答的影响

采用ELISA方法对单独接种猪瘟疫苗组(CSFV组,n=3)、PCV2感染且出现病毒血症后接种猪瘟疫苗组(PCV2/CSFV组,n=3)及PCV2感染同时接种猪瘟疫苗组(CSFV/PCV2组,n=3)不同时相血清中的猪瘟抗体进行检测;并对PCV2感染对照组(PCV2组)及PCV2/CSFV和CSFV/PCV2组血清中PCV2特异的抗体和核酸分别进行ELISA和PCR检测。结果表明,在接种后52 d CSFV组血清中抗体的阻断值显著高于CSFV/PCV2组(P<0.05);接种后42 d和52 d CSFV组平均抗体效价明显高于PCV2/CSFV和CSFV/PCV2组,其中在52 d CSFV组抗体阳性率达100%(3/3)而PCV2/CSFV和CSFV/PCV2在相应时相抗体阳性率仅为67%(2/3)。结果提示PCV2感染可在一定程度上抑制猪瘟疫苗特异性的抗体反应。

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫佐剂的比较试验

以猪圆环病毒2型(PCV2)遗传标记毒株为毒种,经细胞培养传代,优化了病毒增殖条件,获得较高滴度的病毒培养物用于PCV2灭活疫苗的研制。为了比较不同免疫佐剂的效果,本试验对国产矿物质白油和铝胶两种佐剂以及赛比克公司提供的MONTANIDETMISA206、ISA15VG、IMS1315VG3种佐剂配制的灭活疫苗进行了猪体免疫试验。通过临床观察、血清抗体效价测定,确认ISA15VG佐剂配制的疫苗在增强免疫效果方面优于其它佐剂。按5种佐剂免疫效果排序为ISA15VG、IMS1315VG、铝胶、ISA206、国产白油。ISA15VG佐剂属于水包油剂型,可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生效价高、持续时间长,有可能成为新型PCV2灭活疫苗佐剂的候选。

猪GM-CSF基因对猪圆环病毒2型DNA疫苗诱导仔猪免疫反应的调节作用

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)能够诱导树突状细胞的成熟和存活,并提高其抗原递呈功能,是非常有潜力的分子佐剂之一。为了探讨猪GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)DNA疫苗诱导免疫反应的调节作用,本研究将表达猪GM-CSF和PCV2衣壳蛋白的重组质粒混合物(pcDNA3.1-gm-csf和pcDNA3.1-orf2)及在同一载体上表达PCV2衣壳蛋白与猪GM-CSF的双表达重组质粒(pIRES-orf2/gm-csf),分别接种于7日龄健康仔猪,共肌肉注射3次,每次间隔2周。结果表明猪GM-CSF基因能够明显增强PCV2DNA疫苗诱导的特异性体液免疫反应,提高外周血淋巴细胞(PBLC)对ConA刺激的增殖活性,增强NK细胞的杀伤功能,影响细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平。但GM-CSF基因单独表达和与PCV2衣壳蛋白基因在同一载体上表达,对上述4个细胞因子表达的影响有一定差异。

猪瘟疫苗在猪圆环病毒2型阳性猪场的免疫效果观察

为了研究猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪瘟疫苗免疫效力的影响,对PCR证实为PCV-2阳性的试验猪进行猪瘟疫苗的免疫,分别在免疫后第1、3、7、14、21、28和63天对试验猪进行猪瘟病毒(CSFV)和PCV-2的抗体检测。检测结果表明PCV-2阳性猪在猪瘟疫苗免疫后均未能产生有效的CSFV抗体,从免疫猪的血液和内脏组织中也未能检测到CSFV核酸。虽然只能从1头PCV-2阳性猪的血清中检测到PCV-2抗体,但是却能从全部实验猪的淋巴结中检测到PCV-2的核酸。试验猪的病理组织学观察和白细胞计数也表明PCV-2阳性猪的淋巴结呈典型的PCV-2感染的病理变化,且白细胞数量显著低于健康猪。表明PCV-2的感染会对猪的免疫系统造成损害从而抑制猪瘟疫苗的免疫效果。

猪圆环病毒2型疫苗的研究进展

猪圆环病毒2型（PCV-2）是引起猪圆环相关疾病（PCVAD）的主要病原,临床上常与其他病毒混合感染或继发细菌性感染,给养猪业造成巨大的经济损失。目前,对于PCV-2的感染,疫苗预防是最主要手段,商品化疫苗在防控上具有重要作用,但各自存在一定弱点,均不能有效清除病毒血症,疫苗效果的评价方式尚待完善。近年来,研究者在PCV-2疫苗研究方面不断探索,又有了新的研究成果。目前,临床上PCV-2d基因亚型已逐渐占据主导,现有的商品化疫苗对其免疫是否切实有效,亟待进一步研究证实。文章综述了疫苗的最新研究成果和基因型转变后的商品化疫苗免疫效果,旨在为新型疫苗的开发与利用提供参考。

猪圆环病毒2型分子流行病学及疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)在世界范围内广泛分布,主要以PCV2a和PCV2b两种基因型为主,PCV2b亚型为当前流行基因型。现有商品化疫苗主要针对PCV2a型病毒,也可对PCV2b型病毒产生部分交叉保护,但不能显著控制PCV2b型病毒在猪群中的传播。除此之外,由于已有的商品化疫苗以传统疫苗为主,存在种毒增殖难、疫苗生产周期长等缺点。因此,研发PCV2b新型疫苗可能成为未来PCV2疫苗研制的主要方向。对PCV2的分子流行病学及疫苗研究现状进行了综述,以期为PCV2疫苗的研究提供参考。

猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV-2)是一种猪疾病综合征的病原体,这种疾病综合征在欧洲被称为猪圆环病毒病(PCVD),在美国被称为猪圆环病毒相关疾病(PCVAD),可导致巨大的经济损失。基于PCV-2a的灭活疫苗和亚单位疫苗在市场上已有销售,这些疫苗为降低商品化猪群的死亡率、增加其生长指数提供了有力的技术支持。从2003年开始,伴随着临床症状的加剧,全球猪群中PCV-2流行亚型逐渐由PCV-2a变成PCV-2b。虽然现在市售的基于PCV-2a的疫苗可以提供对PCV-2b的交叉保护,但已研制出了基于PCV-2b的新型实验性疫苗,比如改良减毒活疫苗,这些新型疫苗可以提供更高的保护力,降低免疫成本。论文主要介绍现在市面上销售的PCV-2疫苗在实验和田间条件下的免疫效果,并对新型PCV-2疫苗的研究进行了展望。

猪圆环病毒2型Rep/Rep'和Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护性试验

猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1基因编码的Rep/Rep'蛋白与病毒复制酶相关,ORF2编码的Cap蛋白为病毒核衣壳,是病毒保护性抗原。为比较这3种蛋白作为亚单位疫苗的免疫保护性,本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep、-rRep'和-rCap蛋白制备亚单位疫苗及PCV2灭活苗,分组免疫BALB/c鼠进行攻毒,以评价疫苗的免疫保护力。对PCV2-rRep和-rRep'亚单位疫苗免疫鼠血清ELISA抗体检测表明,于免疫后第14 d抗体全部转阳,第35 d抗体效价分别达到1∶42 667和1∶51 200。PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫组于第21 d抗体转阳,第35 d抗体效价分别达1∶2 133和1∶333。攻毒试验表明,PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠获得完全保护;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫组无保护作用。血清中和试验表明,PCV2-rCap蛋白亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠血清中和抗体效价达1∶1 600和1∶800;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫鼠血清无中和病毒能力。该研究表明,PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗具有良好的免疫保护力,可以与PCV2自然感染猪产生的抗Rep蛋白抗体相鉴别,具有良好的开发前景。

猪圆环病毒2型感染对高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫应答的影响

采用阻断ELISA法对单独接种高致病性猪繁殖与呼吸综合征组(hpPRRS,B组)及PCV2人工感染21d后接种hpPRRS疫苗组(PB组)不同时期血清中的PRRSV抗体进行检测,同时对不同时期前腔静脉血进行CD4/CD8流式细胞术及血常规分析。结果表明,在接种后32dB组白细胞含量极显著高于PB组(P<0.01),接种后62dB组淋巴细胞含量极显著高于PB组(P<0.01),接种后75dPB组幼稚型Th细胞含量显著高于B组(P<0.05),接种后32、62及75dB组Tc细胞含量为PB组的2.40、1.98和1.86倍,接种后32、48及62dB组记忆/激活Th细胞含量分别为PB组的1.54、1.46及1.32倍。