猪瘟病毒-猪圆环病毒2型疫苗联合免疫效果的评价

为建立一种既有效又简便的猪瘟和猪圆环病毒病疫苗联合免疫方法,通过细胞感染试验和动物免疫试验,评价了猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗和猪瘟病毒(CSFV)冻干活疫苗联合免疫的可行性。通过细胞感染试验证明了PCV2灭活疫苗稀释CSFV冻干活疫苗不影响CSFV疫苗的病毒活性;将PCV2灭活疫苗稀释的CSFV冻干活疫苗免疫试验猪群(联合免疫),以2种疫苗分边单独免疫的猪群为对照,在免疫后4、7、14、28、60和90 d采集血清检测2种疫苗对应的抗体,经统计学分析发现,2种疫苗的联合免疫不影响其抗体的产生,并且能够保持抗体在猪群个体间的稳定分布。

猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗不同免疫程序的免疫效果比较分析

为了评估不同免疫策略对猪场免疫效果和经济效益的影响,以确定最佳的疫苗免疫程序,本试验将处于产前1个月的四胎次健康三元母猪随机分为2个组,A组(联合免疫组)母猪于产前27 d联合免疫猪圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗(圆柯欣+柯喘宁+稳柯健),其所产仔猪于21日龄联合免疫圆柯欣、柯喘宁和稳柯健;B组(对照组)母猪于产前34和27 d分别免疫稳柯健、猪圆环病毒疫苗和猪肺炎支原体疫苗二联疫苗(圆-支二联疫苗),其所产仔猪于14日龄免疫圆-支二联疫苗,28日龄免疫稳柯健。统计和分析免疫各组临床指标、生产性能和持续性抗体水平。结果显示,免疫疫苗后,2个组的母猪采食情况均正常;2个组的仔猪整体精神状态良好,哺乳情况正常,均未出现咳嗽和喘气等呼吸道疾病。在试验期间内,2个组的母猪的窝产健仔数和仔猪出生健仔均重并无差别。A组和B组的出生至23日龄死淘率、出生至50日龄死淘率分别为3.77%、5.11%和4.07%、5.43%,A组略优于B组。抗体监测结果显示,A组母猪的CSFV和PCV2抗体水平较B组无显著差异(P>0.05);A组仔猪的CSFV抗体阳性率与B组无明显差异(P>0.05),而PCV2抗体水平在免疫早期阶段(21日龄)明显高于B组(P<0.05)。结果表明,猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗可以联合免疫,且免疫后相互之间不干扰。该联合免疫策略在确保免疫效果的同时,简化了疫苗免疫程序,为确定最佳的疫苗免疫程序提供了有价值的临床应用参考。

猪瘟兔化弱毒疫苗与猪圆环病毒2型灭活疫苗同时接种的免疫效果评价

为评价猪瘟兔化弱毒疫苗和猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗同时免疫效果,本实验采用猪瘟活疫苗(细胞源)和PCV2灭活疫苗(LG株)两种疫苗同时分点注射和混合注射35日龄仔猪,于免疫后间隔3周、5周、7周、9周采血,通过猪瘟病毒(CSFV)抗体检测试剂盒和PCV2抗体检测试剂盒进行CSFV和PCV2特异性抗体检测。结果显示,无论是两种疫苗同时颈部两侧分点分别注射,还是用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗后混合免疫,免疫后3周CSFV和PCV2抗体均呈阳性,CSFV抗体滴度和PCV2抗体滴度于7周和9周达到峰值,与各疫苗单独免疫对照组抗体产生时间和滴度无明显差异。实验表明,两种疫苗可以同时注射或采用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗进行免疫,均不影响各自免疫抗体的产生。因此,可以将PCV2灭活疫苗作为CSFV活疫苗的稀释剂,采用一次性注射的形式同时接种这两种疫苗,为简化这两种病临床疫苗免疫注射方面提供了实验依据。

不同阶段猪只圆环病毒2型疫苗免疫程序研究

试验旨在研究不同阶段接种猪圆环病毒2型疫苗的免疫效果,主要通过检测猪只的料重比、死亡率、淘汰率、成活率,选择一种最佳的免疫方式在实际生产中运用。采用大规模群体试验(猪群数量约40000头),在14、35日龄以及在14、35、63日龄分别进行2次和3次猪圆环病毒2型疫苗免疫。结果表明,与圆环病毒2型疫苗免疫2次相比,免疫3次在降低猪只的死亡率、淘汰率和料重比,以及提高猪只的成活率上更优越。结论:圆环病毒2型疫苗免疫3次的效果优于免疫2次,猪场圆环病毒2型疫苗免疫时可以根据猪场的实际状况进行3次免疫。

猪圆环病毒2型灭活疫苗安全性及免疫效力的评价

为了对制备的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)灭活疫苗进行安全性及免疫效力的评价,本试验将3批次猪圆环病毒2型灭活疫苗以2倍剂量接种PCV2阴性仔猪后,进行了安全性分析抗体检测和攻毒试验。结果显示:3批次疫苗以2倍剂量接种仔猪后,仔猪均无异常临床反应,可达到1∶1600以上,而攻毒对照组及空白对照组仔猪的抗体水平均在1∶400以下;攻毒后免疫组可以达到100%保护,攻毒对照组出现100%发病。结果表明,所制备的猪圆环病毒2型灭活疫苗对仔猪不仅安全性好,而且可以为仔猪提供有效的保护,为疫苗推广奠定了重要基础。

多肽疫苗对猪圆环病毒2型的免疫保护效果研究

为检验猪圆环病毒2型(PCV-2)多肽疫苗对猪免疫保护的效果,采用非蛋白多糖载体耦联多肽作为抗原,以断奶仔猪为试验动物,设多肽疫苗组、常规市售Cap蛋白亚单位疫苗组和不同对照组进行免疫。用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血清特异抗体(Ig G),当抗体达到一定水平时进行攻毒试验,对试验各组的临床症状、特征变化及带毒血症进行观察和动态检测,对圆环病毒易感组织进行病毒检测及组织病理学检查,最终评估该多肽疫苗的免疫效果及保护率。结果显示:多肽疫苗能够快速产生体液免疫应答,具有显著的免疫效果;攻毒后采集的各试验数据也表明该多肽疫苗具有很好的免疫保护作用。

猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗与猪瘟活疫苗混合免疫效果评价

为评价猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗(以下简称圆支二联苗)与猪瘟活疫苗混合免疫效果,本研究利用圆支二联苗作为稀释剂稀释猪瘟(CSFV)活疫苗,稀释后的混合疫苗在室温放置0、1 h、2 h取样测定CSFV含量,结果显示放置2 h CSFV含量未下降,表明圆支二联苗作为稀释剂不影响CSFV含量。用圆支二联苗对仔猪首次免疫,首免后14 d用稀释后的混合疫苗二免,分别在二免后21 d和28 d利用猪圆环病毒2型(PCV2)和猪肺炎支原体(Mhp)攻毒,结果显示圆支二联苗和CSFV活疫苗混合使用的免疫效果与单独使用圆支二联苗的免疫效果相当,针对PCV2的攻毒保护率均为80%,针对Mhp攻毒,混合疫苗免疫的仔猪肺炎病变减少率分别为73.1%和75.0%。此外,分别在混合疫苗和CSFV活疫苗免疫仔猪后不同时间采血,检测血清中CSFV抗体水平,结果显示混合疫苗免疫一次与CSFV活疫苗免疫一次后CSFV抗体水平相当。以上结果表明圆支二联苗可以作为稀释剂稀释CSFV活疫苗,一次性注射免疫,各疫苗免疫效力均不受影响。本研究为临床免疫程序优化及相关疫病的防制提供了实验依据。

猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估

试验旨在评估猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫的效果。试验选取7日龄健康仔猪500头,分为A组(联合免疫组)和B组(单苗免疫组)。A组在21日龄,每头仔猪免疫1 mL猪圆环病毒2型基因工程疫苗、2 mL猪肺炎支原体灭活疫苗和1头份猪瘟活疫苗,在55日龄每头仔猪免疫1头份猪瘟活疫苗。B组猪按照试验猪场现有的程序免疫。在三种疫苗联合免疫后的第四周、第八周采血,检测血清中猪瘟病毒抗体和猪圆环病毒2型抗体。联合免疫组猪圆环病毒抗体和猪瘟抗体的水平与单苗免疫组相当。结果表明,猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗,可以联合一起,同时免疫。

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫试验

采用勃林格殷格翰动物保健公司生产的猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗,在光明农牧科技有限公司3个畜牧场分别进行免疫核心试验。结果显示,相比对照组,实验组猪成活率、日增重、整齐度等都有较大的改善,投入产出经济效益较好。

猪圆环病毒2型灭活疫苗细菌内毒素凝胶法的检测

为建立猪圆环病毒2型灭活疫苗(WH株)细菌内毒素检测方法,监测疫苗样品中的内毒素含量。本研究分别使用湛江安度斯和厦门生物的鲎试剂采用凝胶法对猪圆环病毒2型灭活疫苗(WH株)进行细菌内毒素检测。结果显示,当供试品稀释至40倍或以上稀释度(最大有效稀释倍数范围内)时对内毒素检查均无干扰。湛江安度斯鲎试剂和厦门生物鲎试剂对7批猪圆环病毒2型灭活疫苗(WH株)的细菌内毒素检测浓度均小于10 EU/ml。该结果表明采用凝胶法可对猪圆环病毒2型灭活疫苗(WH株)进行细菌内毒素检测。

人参复合多糖提高猪圆环病毒疫苗免疫效果的研究

为探索人参复合多糖(GPS)对仔猪的免疫调节作用,本研究以哺乳仔猪为研究对象,选取7日龄的哺乳仔猪8窝,随机分成4组,每组2窝,分别在基础饲粮中添加100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg GPS,在PCV2灭活疫苗接种仔猪后第7 d、14 d、28 d、42 d和56 d,采用ELISA方法测定仔猪血清中PCV2抗体、SOD、GSH-Px和MDA含量,采用荧光定量RT-PCR法测定仔猪血液白细胞中IL-6和TNF-α的m RNA表达水平。结果表明,添加200 mg/kg GPS可以显著提高仔猪血清中PCV2抗体水平(p<0.05)。添加200 mg/kg和400 mg/kg GPS组除第7 d外,在其余检测时间点均显著促进仔猪血液白细胞中TNF-α和IL-6的m RNA表达水平(p<0.05)。添加200 mg/kg GPS 42 d时能够显著提高仔猪血清中GSH-Px的活性(p<0.05),猪血清中MDA的含量在第14 d、42 d和56 d显著低于对照组(p<0.05)。本实验研究表明合适剂量GPS对PCV2疫苗的免疫效果具有明显的增强作用,同时增强抗氧化作用。

中国首个“猪圆环病毒2型灭活疫苗”获准上市

由洛阳普莱柯生物工程有限公司（以下简称＂普莱柯公司＂）研制的＂猪圆环病毒2型灭活疫苗＂于2010年8月27日获得中华人民共和国新兽药注册证书【证号：（2010）新兽药证字25号】（《中华人民共和国农业部公告第1448号》颁布）,并获得农业部批准独家上市。

甲醛灭活猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液的最佳条件研究

为探究甲醛对猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液最佳的灭活条件,本试验采用10%的甲醛溶液与猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液混匀,使甲醛终浓度分别达到0.05%、0.07%、0.10%、0.15%、0.20%,在4~8℃下经过不同时间的灭活,通过对灭活液不同时间点的无菌检验及灭活检验,综合判定灭活效果。结果显示:猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液在甲醛终浓度为0.07%时灭活72h,或甲醛终浓度为0.10%和0.15%时灭活60h,或甲醛终浓度为0.20%时灭活48h,均取得可靠的灭活效果。考虑到甲醛的毒副作用,笔者认为4~8℃下用0.07%甲醛终浓度灭活72h是比较理想的灭活条件。

2种佐剂在猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗中的效果比较

为给猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗选择一种理想的佐剂,以增强机体对抗原的适应性免疫应答,协同提高动物免疫力。实验用水包油Merckinade SDA 25佐剂和双向Montanide ISA 206佐剂,分别按各自说明制备猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗,再对两种佐剂的疫苗进行稳定性、黏度、安全及效力检验,比较评价出猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗的理想佐剂。结果表明,两种佐剂疫苗的稳定性、黏度、安全均合格,无明显差异;但Montanide ISA 206佐剂疫苗较Merckinade SDA 25佐剂疫苗诱导抗体效价更高。据此,笔者认为,Montanide ISA 206佐剂是猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗比较理想的佐剂。

通过检测血清中的病毒载量评估不同圆环病毒疫苗对母猪的免疫效果

为了给规模化猪场圆环病毒2型(PCV2)的感染和疫苗评价提供科学合理的评判标准,本研究建立了一套成熟敏感的real-time PCR检测方法,通过检测母猪免疫前后血液中病毒载量变化,来评价不同类型圆环病毒疫苗的免疫效果。结果显示:4个厂家疫苗对降低病毒载量的效果差异很大,其中原核表达的PCV2疫苗效果最佳,降幅比例为97.78%,离散度为49.8。此外,PCV2疫苗免疫能够降低猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的抗体水平,有助于猪场PRRS疫情的控制。以上试验证明:PCV2病毒载量的降低是控制PCV2感染的关键;抗体水平不能作为疫苗的评价标准;不同厂家的PCV2疫苗效果存在很大差异。

一种猪圆环病毒疫苗的免疫效果评估

为评价湖南某企业所生产的猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫效果,在一存栏450头的母猪场选择40头妊娠85天左右的母猪,随机分为试验组和对照组(每组20头母猪),对照组母猪每头接种2m L生理盐水,试验组母猪每头接种1头份(2m L/头份)猪圆环病毒2型灭活疫苗,接种后对所用疫苗的安全性、免疫效果和母猪免疫后的生产成绩做了评估。结果显示:两组母猪接种疫苗后均未出现红肿、起包及流产等症状;试验组母猪免疫后两周病毒血症阳性率下降特别明显,而对照组的病毒血症阳性率随着时间的延长,比率在逐渐增加;试验组的母猪其各项生产指标明显优于对照组母猪。

三种猪用疫苗联合免疫的可行性分析

为简化免疫程序,减少免疫次数,降低反复多次免疫对猪只的应激,采用三种猪用疫苗联合免疫进行可行性分析。首先将猪瘟、猪丹毒、猪多杀性巴氏杆菌病三联活疫苗与猪伪狂犬病活疫苗进行混合,测定了混合后猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪丹毒杆菌和多杀性巴氏杆菌的活性。同时,在试验猪群中开展混合疫苗与猪圆环病毒2型灭活疫苗同步两点注射的联合免疫效果评价。结果显示,三联活疫苗和猪伪狂犬病活疫苗的混合疫苗与猪圆环病毒2型灭活苗的联合免疫不会降低疫苗的免疫效果,且能够达到较单独免疫更好的免疫效果,表明采用三种猪用疫苗进行联合免疫是完全可行的。

不同佐剂对猪圆环病毒2型灭活抗原免疫效果的影响

为了筛选到能有效提高猪圆环病毒2型(PCV2)灭活抗原免疫原性的佐剂,将ISA206、ISA15A、GEL、CP934、CP940五种佐剂与PCV2灭活抗原混合,配制疫苗后,进行小鼠免疫试验及猪体攻毒保护性试验。小鼠免疫试验结果显示,ISA206和ISA15A组的ELISA抗体、中和抗体水平和淋巴细胞转化试验刺激指数都显著高于空白对照组(P<0.05),但ISA206组与ISA15A之间无显著差异(P>0.05)。猪体攻毒保护试验结果显示,ISA206组的ELISA抗体水平、中和抗体水平明显高于其他组(包括ISA15A组)(P<0.01),二免后ISA206免疫组淋巴细胞转化试验刺激指数与ISA15A组之间差异不显著(P>0.05),但显著高于其他组(P<0.01)。攻毒后,ISA206组仔猪相对日增重高于其他各组(P<0.01),体内带毒和体外排毒的仔猪数量最少(各2头)、持续时间最短(分别在第11天和第7天消失)。病理切片显微观察显示,攻毒后ISA206组的组织病理变化最为轻微。上述结果说明,佐剂ISA206配制的疫苗免疫效果明显优于其他佐剂疫苗。

肉鸡口服猪疫苗产生高免血清的可行性研究

卵黄抗体的产生主要通过注射免疫产蛋鸡获得,该方法不仅对鸡群的应激大,还会加重工作量。通过在肉鸡日粮中添加疫苗研究其体内产生高免血清的可行性,能为口服免疫产生高免卵黄抗体奠定技术基础。本试验设置两个试验组和两个对照组,以14日龄的肉鸡作为研究对象,在试验组日粮中连续5 d添加猪伪狂犬病活疫苗和猪圆环病毒2型灭活疫苗进行口服免疫。在免疫结束后第2 d进行采血,每隔5 d采血一次,连续采血4次。分离血清,用ELISA试剂盒测定抗体滴度。结果显示,用伪狂犬活疫苗免疫过的鸡群在免疫后第2周就能够产生抗体,用猪圆环灭活苗免疫过的鸡群始终没有检测到抗体。该试验表明,在日粮中添加疫苗对肉鸡体内抗体的形成是可行的,但还需要采取进一步的措施提高血清中的抗体滴度。

猪圆环病毒2型重组多肽抗原的免疫保护效果

为检验猪圆环病毒2型(PCV-2)重组多肽抗原对猪的免疫保护效果,以表达的重组大分子多肽作为抗原,断奶仔猪为实验动物,设置多肽疫苗组、常规市售Cap蛋白亚单位疫苗组和不同对照组进行免疫。用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清特异抗体(IgG),当抗体达到一定水平时进行攻毒试验,对试验各组的临床症状、体征变化及病毒血症进行观察和动态检测,对PCV-2易感组织进行病毒检测及组织病理学检查,最终评估该多肽疫苗的免疫效果及保护率。结果显示:表达的多肽疫苗能够快速产生体液免疫应答,具有显著的免疫效果;攻毒后采集的各项试验数据也表明该多肽疫苗的免疫保护效果理想。