猪圆环病毒2d型病毒样颗粒疫苗的制备及发酵工艺研究

为制备猪圆环病毒2d型(PCV2d)病毒样颗粒(VLPs)疫苗并对其免疫效果进行评价。本研究采用原核表达系统表达PCV2d Cap蛋白,并对其发酵工艺条件进行了优化,去除His-SUMO标签使其体外自组装形成VLPs,通过SDS-PAGE和Western-blot进行验证,采用透射电镜和纳米粒度仪进行表征,将验证正确的VLPs免疫小鼠,测定其抗体水平和细胞因子水平。结果显示,在0.5 mmol/L IPTG、N源补料速率为12%时,蛋白表达量最高,利用透射电镜、纳米粒度仪进行表征鉴定,发现PCV2d可自组装形成VLPs,粒子直径约为20~25 nm。PCV2d VLPs与ISA 201佐剂混合免疫小鼠,特异性抗体滴度达到1∶512以上,中和抗体滴度达到1∶32以上,IL-4和IFN-γ细胞因子水平均可达到80 pg/m L,且明显高于PBS组。综上所述,本研究利用原核表达系统构建表达并成功获得PCV2d VLPs,且可以诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫,这为猪圆环病毒2d型疫苗及猪圆环病毒多价疫苗的研制奠定了基础。