孟河医派特色炮制猪心血丹参及其他炮制品对大鼠脑缺血保护及PI3K/AKT信号通路的影响

目的比较孟河医派特色炮制猪心血丹参及其他炮制品抗脑缺血作用差异,并从PI3K/AKT凋亡信号通路阐明其抗脑缺血分子机制。方法采用线栓法构建局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、丹参生品组、猪心血丹参组、猪血丹参组和酒丹参组。采用Longa评分法进行神经行为学评分,TTC染色法考察脑梗死情况,TUNEL法检测神经细胞凋亡的情况,Western印迹法检测p-PI3K/t-PI3K、p-AKT/t-AKT、Bcl-2/Bax、活化胱天蛋白酶3和活化胱天蛋白酶9表达水平。结果神经功能评分、TTC染色和TUNEL细胞凋亡结果均显示,与模型组比较,孟河医派特色炮制猪心血丹参及其他炮制品均能显著抑制脑缺血大鼠神经行为学评分、脑梗塞体积及神经细胞凋亡指数(P<0.01),且抑制顺序为猪心血丹参组>酒丹参组>猪血丹参组>丹参生品组。Western印迹结果显示,孟河医派临方特色炮制猪心血丹参能显著促进p-PI3K/t-PI3K,p-AKT/t-AKT和Bcl-2/Bax蛋白比值水平(P<0.05,P<0.01),显著抑制活化胱天蛋白酶3和活化胱天蛋白酶9蛋白水平(P<0.01),且均比丹参生品及其他炮制品调控更显著。结论明确猪心血能显著促进丹参抗脑缺血作用,其机制可能是通过调控PI3K/AKT凋亡信号通路对脑缺血大鼠进行保护。

猪心血丹参性状特征与内在品质相关性研究

目的探究猪心血丹参(Salvia miltiorrhiza processed by porcine cardiac blood)性状特征与内在品质之间的关系,快速评价猪心血丹参的质量。方法基于分光测色等技术对猪心血丹参性状特征建立客观量化方法,结合HPLC技术建立二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA4个二萜类成分及丹参素钠、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B 4个酚酸类成分的多成分含量测定方法,并对上述表(性状特征)、里(内在品质)指标建立参考范围,进行了相关性分析,建立线性回归方程,并进行真实世界样品验证。结果酚酸类成分与横截面直径显著正相关,丹参酮类成分与粉末a^(*)值显著正相关,水分值与粉末L^(*)值显著负相关,建立了7个内外关联的线性回归方程,验证证明相对误差小于10%,可对猪心血丹参质量进行快速评价。结论分析总结了猪心血丹参性状特征与内在品质的相关性,为猪心血丹参饮片快速评价奠定基础,并为传统“辨状论质”理论提供支撑。

UPLC-Q-TOF/MS分析孟河医派特色猪心血丹参炮制前后化学成分的变化

目的:分析猪心血丹参炮制前后的化学成分变化情况,为深入阐明该饮片的炮制机制提供科学依据。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS),色谱条件为ACQUITY UPLC~ C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)梯度洗脱(0~1 min,8%B;1~1.5 min,8%~20%B;1.5~4 min,20%B;4~5 min,20%~60%B;5~9 min,60%~70%B;9~10 min,70%~95%B;10~13 min,95%B),柱温40℃,流速0.3 m L·min^(-1);质谱分析使用电喷雾离子源(ESI),分别在正、负离子模式下扫描,扫描范围均为m/z 50~1 200,采用对照品比对、质谱数据、数据库匹配和文献参照对各离子峰进行归属,通过比较猪心血丹参炮制前后离子峰数目和峰面积,研究其化学成分变化。结果:猪心血丹参炮制前后共鉴别出59个成分,未发现有新的成分产生。猪心血炮制丹参后,共有25种化学成分峰面积发生显着变化,其中丹参水溶性成分原儿茶醛,丹酚酸C,F,G和脂溶性成分丹参醛,丹参二醇A,丹参酮Ⅰ和氨基酸类成分L-苯丙氨酸峰面积显著增高。结论:猪心血丹参炮制前后化学成分的含量变化显著,其中丹参部分水溶性、脂溶性和氨基酸类成分产生了量变,推测这可能与猪心血促进丹参治疗脑缺血的作用有关。

基于AHP-熵权法结合色差原理优选猪心血丹参炮制工艺

目的优选猪心血丹参最佳炮制工艺,建立色泽鉴别标准。方法采用L9(34)正交实验,以丹酚酸B、丹参酮ⅡA、水溶性浸出物、醇溶性浸出物为指标,采用AHP-熵权法计算综合评分,研究猪心血用量、黄酒用量、烘干温度、烘干时间对猪心血丹参炮制工艺的影响。结合色差原理,建立色泽鉴别标准。结果正交实验得出猪心血丹参最佳炮制工艺为将100 g丹参用20 g猪心血与30 g黄酒混合液拌匀,使之吸尽,放入烘箱50℃干燥4 h。猪心血丹参色泽鉴别标准为50.19≤L^(*)≤75.29,16.10≤b^(*)≤24.14。结论建立的猪心血丹参炮制工艺条件稳定可行,为后续研究猪心血丹参炮制机理奠定了基础。

孟河医派特色猪心血丹参炮制历史沿革及现代研究进展

猪心血丹参是孟河医派特色炮制品种,已传承数百年,临床常用于治疗脑缺血引起的心神不宁、心悸怔忡及痰迷心窍等症。历代医家认为猪心血为养心药之向导,能增强丹参入脑补血安神之功,但其炮制物质基础和炮制机制并不明确。该文从猪心血丹参临床应用和临方炮制意图、炮制方法历史沿革及现代研究等方面进行初步探讨,并对猪心血丹参中药饮片炮制品研究开发的难题及重要意义进行思考与展望,以期为猪心血丹参炮制物质基础和炮制机制研究提供一定的依据,为传承和发展孟河医派临方特色炮制技术作出努力。

孟河医派特色炮制猪心血拌丹参及其他炮制品活性成分与抗脑缺血氧化损伤相关性分析

目的:分析猪心血拌丹参及其他丹参炮制品中11个小分子活性成分及1个蛋白成分与抗脑缺血氧化损伤的相关性,明确猪心血拌丹参抗脑缺血氧化损伤的关键成分标志物。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定丹参、猪心血拌丹参、猪血拌丹参、酒拌丹参、猪血清转铁蛋白(Tf)拌丹参5种饮片中11种活性成分含量;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测丹参不同炮制品中Tf的含量。构建斑马鱼缺血性脑卒中模型,考察丹参不同炮制品对脑缺血斑马鱼行为轨迹、转基因斑马鱼Tg(elavl3:eGFP)脑神经元损伤及脑组织中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响;构建糖氧剥夺/复氧(OGD/R)诱导的小鼠海马神经细胞缺血缺氧模型,以乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)、MDA和SOD为评价指标,考察丹参不同炮制品对神经细胞氧化损伤的影响;通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别法-判别分析(PLS-DA)及Spearman相关性分析对11个小分子活性成分及1个蛋白成分与药效指标进行分析,筛选猪心血拌丹参抗脑缺血氧化损伤的关键成分标志物。结果:与丹参比较,丹参各炮制品中水溶性、脂溶性成分含量均呈不同程度的升高,而丹酚酸A成分含量降低;与酒拌丹参比较,猪心血拌丹参、猪血拌丹参及Tf拌丹参中丹酚酸B、丹参素、迷迭香酸等成分含量均升高,而丹酚酸A含量降低。ELISA结果显示,猪心血拌丹参、猪血拌丹参及Tf拌丹参中均含有Tf蛋白,且三者含量差异无统计学意义。药效结果显示,丹参不同炮制品均能改善斑马鱼缺血性脑卒中后出现的行为缺陷、脑神经元损伤及氧化应激,且猪心血拌丹参组作用最明显。PCA结果显示,丹酚酸B、丹酚酸A、迷迭香酸、紫草酸、丹参素、咖啡酸、丹参酮Ⅱ_(A)、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ为丹参及其炮制品中的主要贡献成分。相关性分析结果显示,隐丹参酮、迷迭香酸、咖啡酸、二氢丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、丹参酮Ⅱ_(A)、丹参酮Ⅰ与斑马鱼脑组织中MDA水平呈负相关,紫草酸、原儿茶醛、迷迭香酸、二氢丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、Tf与SOD水平呈正相关,迷迭香酸、咖啡酸、二氢丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、丹参酮Ⅱ_(A)、丹参酮Ⅰ、丹参素、Tf与斑马鱼脑神经元荧光强度呈正相关;紫草酸、原儿茶醛、迷迭香酸、二氢丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、丹参素、Tf与HT22细胞中LDH、ROS、MDA水平呈负相关,与SOD水平呈正相关。结论:丹参及其不同炮制品抗脑缺血氧化损伤作用存在差异,其中以猪心血拌丹参改善氧化损伤作用最强,这可能与丹酚酸B、丹参素、迷迭香酸等成分的含量变化有关,可为明确该孟河医派特色炮制品抗脑缺血质量标志物及阐明其炮制机制提供依据。