高效快速检测食物中猪成分的PCR和RT-PCR方法

依据猪线粒体DNA中的细胞色素b基因序列设计一对特异性引物,用于检测食物中的猪源成分DNA扩增片段(130bp)可以从猪的基因组中检出而对其它物种(牛、羊、鸡等)样品的检测为阴性,且在各种组织中稳定存在,亦可应用于实时荧光PCR从加工的熟食和混合食物中灵敏地检出痕量猪DNA。

食品中牛、羊、猪、马源性成分检测能力验证结果与分析

目的:通过参加外部组织的能力验证,提高实验人员的专业水平,提升实验室对食品中牛、羊、猪、马源性成分检测的准确性,增强实验室综合竞争力。方法:对两个样品使用SN/T 2051—2008进行牛、羊源性成分检测;SN/T 3730.5—2013进行马源性成分检测;SN/T 3730.8—2013进行猪源性成分检测,并用BJS 201904对猪源性成分检测结果再确认。实验设置阳性对照、阴性对照、试剂空白对照及提取空白对照进行质量控制。结果:样品22-K950检出羊源性成分,未检出牛、猪、马成分;样品22-W704检出牛、羊、猪源性成分,未检出马源性成分。结论:本次能力验证结果为满意,证明本实验室有能力进行动物源性成分的检测。

两种测定肉制品中牛、猪源性成分的方法对比研究

随着经济的发展,人们对肉类的需求量日益增长,一些无良商家为了牟取暴利,掺假现象层出不穷,对人的身体健康造成危害。目前,在生物学领域鉴定动物源性成分的方法以核酸分析为主,检测方法有实时荧光PCR、普通PCR、聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性、PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)等。

食品中猪源性成分定性检测能力验证结果与分析

本文根据中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供的能力验证作业指导书以及SN/T 2051—2008、GB/T 38164—2019、SN/T 3730.8—2013 3种方法对2个肉糜样品进行猪源性成分检测,通过参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心食品中猪源性成分鉴定能力验证,验证实验室动物源性成分检测的能力,扩大实验室的影响力。结果表明,3种方法均可在样品22-W514中检出猪源性成分,在样品22-K216中未检出猪源性成分,本次能力验证获得满意结果。

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中猪源性成分

目的建立一种快速、特异、灵敏的猪源性成分检测方法。方法本研究以猪线粒体12S rRNA基因序列为靶位点设计引物和探针,进行荧光定量PCR扩增,建立猪源性成分检测方法;以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、鸭肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对猪肉DNA进行梯度稀释,做灵敏度检测。结果该方法能够有效对猪源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(可达0.1μg/kg)并且羊肉成分的存在对猪肉灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测畜肉食品中含有的猪源性成分。

应用PCR-RFLP法鉴别肉制品中的猪和牛源性成分

以动物线粒体DNA中Cytb区段的保守序列为目的基因进行PCR-RFLP,从猪、牛、羊、鸡、鸭、兔6种生肉及高压猪肉、猪肉火腿肠、猪肉枣、猪肉松、牛肉干、牛肉枣、牛肉火腿肠7种加工肉制品中鉴别出猪源性和牛源性成分。所有样品经PCR扩增均产生359 bp的片段。扩增子采用AluⅠ限制性酶切所产生的片段差异可用于区分猪肉和牛肉。

猪源性成分的PCR检测技术优化研究

为确定食品和饲料中的猪源性成分,本试验优化了PCR检测猪源性成分的反应体系。试验采用20μl的PCR反应体系,分别测定Taq DNA聚合酶为0U、1U、2U、3U时;25m mol/L的MgCl2为0、2、4、6μl时;dNTP为0、0.1、0.2、0.4μl时,其他PCR反应因素为最大量的结果。结果表明:优化的猪源性成分PCR反应体系中Taq DNA聚合酶、25mmol/L MgCl2、dNTP适宜浓度分别为2U,2μl,0.4μl。优化后的反应体系对猪肉DNA最低检测浓度为0.04ng/μl。本研究优化出的猪源性成分PCR反应体系经二重PCR反应技术进行验证,不仅快速,简便,准确性与灵敏度高,并且经济、高效。

牛羊肉中猪源性成分检测能力验证研究

目的了解我国食品检测实验室的牛羊肉中猪源性成分的检测能力。方法国家认监委组织实施了牛羊肉中猪源性成分的检测能力验证工作,22个省、市、自治区的38家实验室参加了本次能力验证。本研究介绍了本次能力验证的实施过程,包括方案设计、样品制备、均匀性稳定性试验、结果统计等,并对能力验证结果进行了分析。结果实验室检测结果满意率为97.40%,样品检测结果一致率为99.47%。结论参加能力验证的绝大多数实验室可以准确检测牛羊肉中猪源性成分,具备了分子生物学检测肉种鉴定的能力。

一种基于实时荧光聚合酶链式反应的肉及肉制品中猪源性成分含量测定

为了建立一种基于实时荧光聚合酶链式反应的肉及肉制品猪源性成分含量测定方法,分别以猪线粒体DNA的NADH4基因和16S rRNA基因为靶位点设计猪特异性引物、探针和通用引物、探针,建立猪源性成分含量测定方法,通过特异性、灵敏性、线性、准确度及市售肉制品检测,对该方法体系进行检验和评价。结果表明:建立的猪源性成分含量实时荧光聚合酶链式反应测定方法体系具有良好的特异性及灵敏性,最低可检测到0.4pg/μL纯猪肉DNA;无论是猪特异性体系还是通用体系都呈现良好的线性关系(R2均达到0.999以上)和较宽的线性范围;通过含猪源性成分的模拟混合肉样检测,样品猪源性成分含量的回收率平均值为122.27%,说明该方法具有较高的准确度;通过市售肉制品检测表明该方法可以用来检测实际样品(包括生鲜样品和熟肉样品)中猪源性成分含量。

应用多重Taqman-LNA荧光PCR同时检测肉制品中猪鸡鸭源性成分

为了建立同时检测肉制品中猪、鸡、鸭3种动物源性成分的多重Taqman-LNA荧光PCR,给打击肉制品掺假提供技术手段。针对动物线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和Taqman-LNA探针,建立同时检测肉制品中猪、鸡、鸭源性成分的多重荧光PCR方法,并应用于市售肉制品的检测。建立的多重Taqman-LNA荧光PCR方法可同时检测肉制品中上述动物源性成分,与牛、羊、驴、兔、鹅等动物源性成分无交叉反应,其检测限均达到肉含量的0.001%。对170份市售肉制品检测发现,有42份样品检出与标签标示成分不符的肉种成分,样品不合格率为24.7%。本研究建立的多重Taqman-LNA荧光PCR方法可同时检测肉制品中猪、鸡、鸭3种动物源性成分,具有特异、快速、经济、高效等优点,可适应于肉制品中多种肉源性成分的高通量检测。

基于TaqMan PCR鉴定猪源性成分的引物和探针研发

为了研发具有自主知识产权的猪源性成分检测的引物和探针,比对猪、牛、羊、马、鸡、鸭、兔、鹅等8种动物的线粒体基因组,筛选并设计猪特异性的引物和探针组合进行荧光定量PCR。研究结果表明,所研发的猪源性成分检测的引物和探针仅对猪相关DNA模板有典型扩增曲线,对其他动物来源的DNA模板无扩增,具有高度的猪源性特异性。灵敏度实验表明,利用此引物和探针的检测方法具有高度的灵敏度,可达1pg级。肉制品中猪源性定量检测实验说明此方法具有较好的定量检测能力。此引物和探针组合适用于猪源性食品和农畜产品的检验检测。

双重PCR熔解曲线峰快速检测食品中猪源性成分方法的建立

基于国际生命条码联盟(CBOL,the Consortium for the Barcode of Life)提出的barcoding技术所确定的序列区域,针对猪的线粒体COⅠ基因序列设计特异性引物。为了避免食品中PCR抑制剂的影响,本实验设置GCG(胰岛素受体)基因125bp的纯化片段为内参照,控制假阴性结果的出现。通过优化PCR反应条件,猪和GCG基因的特异性产物在79.2℃和75℃有特异性熔解峰。设置牛、羊、鸡、兔、鼠和空白对照,均无扩增。测序结果表明,该猪特异性引物的PCR产物含有245bp的核苷酸序列与GenBank中相应序列吻合;该方法检出限为0.001%。

利用锁核酸探针技术快速检测肉制品中猪源性成分

[目的]建立快速检测肉制品中猪源性成分的锁核酸探针荧光PCR检测方法。[方法]基于猪线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和锁核酸探针,建立快速检测肉制品中猪源性成分的锁核酸荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度、重复性测试及应用检测对建立的方法进行评价。[结果]建立的锁核酸荧光PCR方法对牛、羊、马、鸡、鸭、鹅均无非特异性扩增;该法可检测低至1.20 pg的猪肉DNA,重复检测结果的变异系数均小于1%。应用该法检测市售肉制品50份,32份标示含有猪肉成分样本的检测结果均与预期相符,另发现1份羊肉丸为猪肉制备、2份鸡肉火腿肠中掺有猪源性成分而未标示。[结论]本研究建立的方法具有特异、灵敏、稳定等优点,适用于大规模快速检测肉制品中猪源性成分。

鸡肉粉中猪源性成分的检测分析

本研究建立了一种基于实时荧光聚合酶链式反应的鸡肉粉中猪源性成分含量测定方法,以期了解市场上饲料原料鸡肉粉中猪源性成分的含量及其污染情况。利用该方法对从上海、山东、广东、四川等地收集的61份鸡肉粉样品进行猪源性成分检测。检测结果显示,61批样品中检出含有猪源性成分的样品15批,检出率为24.6%。由检测结果可知,市场上鸡肉粉中含有猪源性成分的比例较高,需要加强对饲料原料鸡肉粉中猪源性成分的监管。

动物源性食品中猪源性成分检测

为探讨猪源性成分检测可行的方法,利用SYBR Green Ⅰ Real time PCR对动物源性食品中猪源性成分进行测定。根据猪mtDNA保守序列设计特异性引物,对牛、羊、猪的动物源性食品进行扩增;克隆目的基因片段,并以此为标准品,优化反应条件和反应体系,提高灵敏度;反复检测不同样品,测试稳定性。结果表明SYBR GreenⅠReal time PCR技术能够特异性的检测到动物源性食品中猪源性成分,引物特异性强、稳定性可靠,灵敏度达到1×10^(-6)ng/μL,建立了动物源性食品中猪源性成分的快速、精准、经济、便捷的检测方法。

实时荧光定量PCR和常规PCR检测肝水解肽样品中牛、猪源性成分的对比研究

目的对比实时荧光定量PCR与常规PCR检测肝水解肽样品中牛、猪源性成分的有效性。方法对牛、猪源性肝水解肽样品肝脏至上清液工艺段样品进行DNA提取,采用实时荧光定量PCR和常规PCR同时检测样品中的DNA。结果实时荧光定量PCR和常规PCR在猪源、牛源肝水解肽从肝脏到酶解液的各工艺步骤段样品中,均检测到动物源性DNA,在上清液至超滤液四中,均未检测出动物源性DNA。结论两种方法均可用在检测肝水解肽样品中牛、猪源性成分。实时荧光定量PCR同时还具有快速、简便、不污染环境、重复性好的特点,可明显提高工作质量及效率。

食用明胶中猪源性成分检测研究进展

明胶是一种重要的食品添加剂,主要来源于猪、牛等动物的骨和皮。在伊斯兰教的宗教信仰中,禁止食用含有猪源性成分的产品,因此对于食用明胶中猪源性成分的检测至关重要。该文主要对近年来国内外有关明胶中猪源性DNA或蛋白质成分的检测方法及优缺点进行了阐述分析,并对未来检测方法的发展趋势进行了展望。由于食品在加工过程中会发生DNA和蛋白质降解,故对样品进行前处理显得尤为重要,因此该文同时对样品前处理方法进行了总结评价。

几种添加物对猪乳成分、仔猪生长及部分血液生化指标的影响

选用预产期基本一致的初产长白母猪24头,随机分为4组,每组6头。对照组饲喂基础日粮,其余3组为试验组,分别饲喂基础日粮+大豆黄酮60mg/kg、基础日粮+缬氨酸600mg/kg+大豆黄酮60mg/kg、基础日粮+烟酸铬200μg/kg+大豆黄酮60mg/kg。饲喂两个月后,各组合对初乳成分、仔猪的生产性能和断奶仔猪血液的生理生化反应的影响结果为:①母猪初乳成分的中乳蛋白和乳脂肪、乳糖含量测定结果表明,烟酸铬+大豆黄酮组、大豆黄酮组中乳蛋白含量与对照组相比差异显著(P<0.05),乳脂肪、乳糖含量差异不显著;②与对照组相比,各试验组均可以提高仔猪的初生重、21日龄(P<0.05)和断奶平均个体重(P<0.05),其中以缬氨酸+大豆黄酮组最好;③烟酸铬+大豆黄酮组在高温情况下补铬可以缓解血浆中的甘油三酯、总蛋白和球蛋白下降。而缬氨酸、烟酸铬分别与大豆黄酮共同作用对断奶仔猪血浆中尿素氮、甘油三酯、总蛋白的影响差异不显著。烟酸铬+大豆黄酮组对血浆中碱性磷酸酶的影响显著高于其它各组(P<0.05)。

一种食品中猪源性成分的快速检测技术

建立一种基于PCR技术的食品中猪源性成分快速检测技术。根据猪线粒体cytb基因设计引物,进行PCR扩增。该方法对猪DNA检测的灵敏度达到100pg;该方法仅对猪DNA检测呈阳性,与其他物种DNA无交叉反应;同时可用于商业样本及复杂食物样本的检测。本研究的猪源性成分特异PCR检测技术具有快速、准确的特点,且具有较高的特异性和敏感性,可作为肉制品中猪源性成分快速检测的手段。

肉制品中猪源性成分相对定量检测方法研究

目的建立一种肉制品中猪源性成分的相对定量检测方法。方法针对猪的ER-beta基因的mRNA序列设计了特异性引物与探针序列,并对引物和探针的特异性进行了验证。构建重组质粒,利用质粒拷贝数的log值和Ct值构建标准曲线。通过标准曲线计算各个样本拷贝数,将待测样本和标准种源样本的拷贝数进行比较,确定检测样本的猪源性含量。结果实际掺加量分别为20%、40%、50%和60%的混合样品经该方法检测所得掺假量均值为猪体系24.8%、53.1%、53.1%、61%,检测结果与其实际含量基本一致。结论该方法基本能实现肉制品中猪源性成分的相对定量检测。