利用改进的酚-氯仿法从猪毛囊中提取基因组DNA

为提高从猪毛囊组织中提取基因组DNA的效率，文章在借鉴从其他组织提取基因组DNA方法的基础上，对经典的酚-氯仿法的反应体系和步骤进行了改进。利用改进的酚-氯仿抽提法，从猪的毛囊组织中快速、高效地提取了高质量基因组DNA。利用该方法从1-6根猪毛囊中提取的基因组DNA可满足基于PCR技术的相关分子生物学实验需要。

从猪毛囊中快速提取基因组DNA的有效方法

采用酚仿抽提法提取猪毛囊中的基因组DNA,并以此为模板进行猪骨形态发生蛋白7基因(BMP7)片段的扩增鉴定,优化建立一种快速、简单提取动物基因组DNA的方法。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,从猪毛囊中提取的基因组DNA纯度、质量浓度较高,能满足PCR扩增需要。提取DNA所用猪毛囊数量以10根为好。用毛囊提取动物基因组DNA简便、经济,能够在短期内获得群体基因组DNA,且不会对动物造成损伤。

阿霉素对体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨阿霉素对体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖和凋亡的影响。方法 用MTT法通过比色分析测定吸光度值 ,检测不同浓液 (0、5、10、2 0mg L)阿霉素作用 2 4h和 10mg L阿霉素作用不同时间 (4、8、12、2 4、4 8h)对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响 ;用流式细胞仪检测不同剂量的阿霉素作用 2 4h后猪毛囊真皮鞘细胞的凋亡率。结果 阿霉素抑制了体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞的增殖 ,其抑制效应随阿霉素浓度的增大和作用时间的延长而增强 ;细胞凋亡率随阿霉素浓度增大而升高 ,阿霉素浓度为 10mg L时细胞凋亡率最高。结论 阿霉素抑制体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖 ,诱导细胞凋亡 。

某些中药煎剂对阿霉素抑制的猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响

目的:探讨何首乌、女贞子等中药煎剂对阿霉素抑制的猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响。方法:用MTT法通过比色分析测定吸光度值(OD),检测不同剂量(0、5、10、20)mg/L阿霉素作用24h和10mg/L阿霉素作用不同时间(4、8、12、24、48h)对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测不同剂量的阿霉素作用24h后猪毛囊真皮鞘细胞的凋亡率,从而找出用于以下研究中阿霉素的最适浓度。用MTT法检测不同剂量中药煎剂和10mg/L阿霉素同时给药共同作用24h以及先给予不同剂量中药煎剂作用24h,然后给予10mg/L阿霉素作用24h两种条件下对猪毛囊真皮鞘细胞增殖的影响。结果:阿霉素抑制体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖,其抑制效应随阿霉素浓度的增大和作用时间的延长而增强;细胞凋亡率以阿霉素浓度为10mg/L时最高。中药煎剂和阿霉素10mg/L同时给药条件下,前者不能有效升高OD值(P>0.05);如果先给予中药煎剂处理,后给10mg/L阿霉素,则中等剂量的中药煎剂即能有效升高OD值(P<0.001)。结论:阿霉素抑制体外培养的猪毛囊真皮鞘细胞增殖,先给予适当剂量的中药煎剂处理细胞,能在一定程度上减轻阿霉素对细胞的损伤。