猪流行性乙型脑炎的诊断与防治

我国猪养殖业规模越来越大,在养殖过程中难免会发生猪流行性乙型脑炎疾病,该疾病具有极高的致死率,一旦发生感染将影响猪的正常生长,降低了养猪户的经济利益。因此,对该病及早诊断并采取科学的防治措施尤为重要,本文主要对猪流行性乙型脑炎进行研究,阐述了该病的诊断方法以及具体的防治措施,以此减少猪流行性乙型脑炎的发生几率。

猪流行性乙型脑炎的诊断与预防

【目的】探讨猪流行性乙脑(又名“日本乙型脑炎”)的防治策略,为猪场疫病防控提供借鉴和参考,以保障猪场稳定生产。【方法】基于对猪流行性乙型脑炎的全面分析,总结其流行病学特征:妊娠母猪感染乙脑会表现流产或早产,新生仔猪可能表现出全身性痉挛,公猪在高热后会出现睾丸肿胀。提出其主要的诊断方法是通过细菌学和病毒学检测进行确定。【结果】猪流行性乙脑的治疗措施主要为康复猪血清或抗血清的应用、加强饲养管理、降低颅内压、利尿解毒和使用免疫增强剂等。【结论】作为一种严重的人畜共患传染病,猪流行性乙脑在亚洲各国包括中国的部分地区广泛存在。为有效控制猪流行性乙脑的传播,猪场需加强对其病原学特点和传播方式的认识,采取免疫接种、灭蚊和做好人员防护等措施进行综合防控。

猪流行性乙型脑炎流行特点趋势以及防控要点概述

我国目前猪养殖业发展迅速,由于养殖量扩大和饲养密度增加,随之而来的就是猪传染病发生率逐年提高,而猪流行性乙型脑炎是人畜共患病,该病引起母猪繁殖障碍和生产性能下降,对我国猪养殖业造成的危害极大。通过对猪流行性乙型脑炎流行特点、流行趋势、临床症状、剖检变化、实验室诊断、治疗与预防措施等方面进行综合概述,为今后在临床上有效预防该病的发生提供基础依据。

猪伪狂犬病、猪细小病毒病和猪流行性乙型脑炎检测基因芯片的制备及检测方法研究

对猪伪狂犬病(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒病(Porcine parvovirus,PPV)和猪流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)检测基因芯片的制备及该芯片的检测方法进行了研究。试验克隆和鉴定了16个芯片靶基因,经筛选,取其中13个靶基因PRV gB、gG、TK和gE;PPV NS2、NS3、VP1和VP2以及JEV C、PrM/M、E、NS1和NS5制备PRV、PPV和JEV检测基因芯片,基因芯片点样系统SpotArrayTM 24将靶基因点样于氨基化玻片表面,靶基因最佳点样浓度为200 ng/μL,探针扩增标记反应体系中,Cy3-dCTP使用终浓度为2.5μmol/L,芯片杂交温度可在44℃～60℃之间任意选择。以PRRSV、CSFV、PCV1、PCV2、TGEV、HPS、PAP、E.coli和S.pp菌毒株DNA或CDNA为模板标记制备的探针均不与PRV、PPV、和JEV检测基因芯片杂交,芯片检测的灵敏度为3 pg/μL,芯片批间重复性好,同一张芯片可进行至少10次的重复杂交。该方法对8株PRV、5株PPV和JEV SA14-14-2单独或混合样品检测均为阳性,可区分伪狂犬病病毒野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品单独或混合感染的检出率分别为:单独感染PRV检出率15%(3/20),PPV 5%(1/20),JEV 0%(0/20);PRV和PPV混合感染检出率15%(3/20),PRV和JEV混合感染检出率5%(1/20),JEV和PPV混合感染检出率5%(1/20),三者混合感染的检出率5%(1/20)。与PRV、PPV和JEV多重PCR检测方法比较,芯片检测的灵敏度大大提高,同时可区分PRV野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品的检出率一致。

流行性乙型脑炎病毒(JEV)全长感染性克隆的制备及恢复病毒的获得

根据JEV病毒减毒株SA14-14-2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT-PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR-kpn中,构建我国流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因组全长cDNA克隆。经过体外转录后得到的转录子转染BHK-21细胞,重新获得JEV的恢复病毒,通过生物学特性、分子生物学水平、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定。结果获得了稳定的全长cDNA克隆,转录子转染BHK-21细胞后,第4天开始出现细胞病变(CPE),第6～7天时CPE为 ,经过Vero细胞进一步放大培养后,间接免疫荧光实验和RT-PCR实验均为阳性。证实了构建的JEV的全长cDNA克隆有感染性,为进一步的研究奠定了基础。

开江县2002-2006年猪流行性乙型脑炎病毒感染监测

目的探讨开江县猪流行性乙型脑炎（乙脑）病毒感染强度和感染时间分布，为乙脑防制提供科学依据。方法2002-2006年6—7月上、中、下旬在开江县新宁镇肉联厂采集本地8月龄的屠宰猪血清，采用酶联免疫法（ELISA）进行乙脑抗体IgG检测，阳性计为感染猪。结果5年共采集猪血清592份，乙脑抗体阳性194份，阳性率为32．77％。2002-2006年抗体阳性率分别为43．41％、24．17％、26．89％、4．62％及75．53％，之间差异有统计学意义（X^2=137．32，P〈0．01），感染高峰时间2002-2005年在7月中、下旬，2006年在6月中旬，比前4年早30-40d。结论根据2002-2006年猪乙脑病毒感染率和感染高峰时间，可以预测人间乙脑流行强度和发病高峰时间。由此，可早期做好乙脑防制措施，控制其发病和流行。

三种ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体比较

目的比较国内常用商品化ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体的诊断效果。方法选用3种猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒(Keqian,Lvshiyuan,Tianchen),以微量中和试验为金标准,对90份猪血清进行检测分析。结果中和试验的阳性检出率为34.4%(31/90),Keqian,Lvshiyuan和Tianchen阳性检出率分别为50.0%(45/90),47.8%(43/90)和38.9%(35/90)。灵敏度最高的是Keqian,为90.32%,但其特异度只有71.19%;Tianchen的灵敏度和特异度分别为83.87%和79.66%;Lvshiyuan的灵敏度和特异度分别仅为41.94%和16.95%。与中和试验比较,Tianchen试剂盒的κ系数最高为0.63,其次是Keqian为0.57,Lvshiyuan仅为0.04。显示3种试剂盒具稳定性。结论目前国内商品化猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒诊断结果差异较大,与中和试验相比存在较高的假阴性,质量有待提高。

伪狂犬病病毒、猪细小病毒和流行性乙型脑炎病毒检测基因芯片的制备

对伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和流行性乙型脑炎病毒(JEV)检测基因芯片的制备及该芯片的检测技术进行了研究。选定靶基因最佳点样质量浓度为200 mg/L,用基因芯片点样仪将其点制在氨基化基片上,经干燥、水合、紫外线交联和洗涤后,成功制备了PRV-PPV-JEV检测基因芯片。以CY3荧光素标记的dCTP经PCR扩增制备探针,对芯片的质量进行了评价。结果表明,制备的芯片质量好,探针最佳使用质量浓度为3 000μg/L,芯片系统检测灵敏度可达3μg/L。该芯片可同时检测PRV、PPV和JEV,其灵敏度高、特异性强,芯片可重复使用,室温下至少可保存4个月。

猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析

利用RT-PCR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物。在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10 d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠脑组织RT-PCR结果均为阳性。用病死鼠脑组织研磨上清接种BHK-21细胞,感染60 h后用JEV单抗进行间接免疫荧光鉴定均为阳性,这表明分离毒株均为JEV流行毒株,分别命名为BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3。对新分离毒株进行体外细胞培养,BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3连续传代3次后病毒量均获得明显增加,最高分别可达104.5±0.1TCID50/mL和104.2±0.2TCID50/mL。用生物学软件MEGA 4.0分别构建JEV基因的系统进化树,发现BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3处于同一进化分支,均属于基因Ⅲ型。

猪流行性乙型脑炎的血清学调查

为调查贵州省猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的隐性感染率和使用疫苗后的血清抗体水平,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对贵州省规模化养猪场和农村散养户共764头份猪血清样本进行了JEV抗体水平检测。结果表明,未免疫猪群JEV的血清抗体阳性率为13.25%;而免疫猪群中JEV的血清抗体阳性率为82.18%;表明JEV的免疫效果比较理想,但未免疫猪群存在JEV感染,应引起重视。

猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法的建立与初步应用

[目的]建立1种快速、灵敏、特异的检测猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。[方法]根据JEV E基因序列的保守区6个位点设计了4条特异性LAMP引物,以JEV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,并对反应条件和反应体系进行了优化。[结果]该方法具有较高的灵敏度,其检测极限为0.5 pg;特异性试验表明其具有较高的特异性,对其他病毒性病原体均无扩增反应。与RT-Nested-PCR相比,2种方法检出率的符合率为90.9%。反应结束后可以通过添加化学发光剂进行可视化观察,大大缩短了检测时间。该方法无需特殊仪器,只需在水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的猪JE的检测方法。[结论]成功建立了猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法,并在临床上进行了初步应用。

猪流行性乙型脑炎的诊断与防制

猪乙型脑炎是由乙型脑炎病毒引起的一种动物和人共患的蚊媒病毒性疾病。该病不仅给人类健康带来巨大威胁,也给作为农业支柱产业的畜牧业造成巨大的经济损失。本文主要从乙型脑炎流行病学特点、发病后引起的临床症状、病理变化特征及其诊断方法和防制措施方面进行阐述总结。

猪流行性乙型脑炎综合防治

流行性乙型脑炎是由乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种人畜共患病。本病多发于7~10月的蚊虫滋生、活动旺季,猪是该病毒的主要增殖宿主、扩散宿主和传染源。易感季节管理不善的猪群该病感染率极高,是夏秋季猪场的主要流行病,常呈散发性或地方性流行。1流行病学流行性乙型脑炎属自然疫源性疫病。JEV于上世纪50年代首先在日本分离获得,因此又称日本脑炎病毒。为与甲型脑炎区别,该病定名为流行性乙型脑炎,简称乙脑。

猪流行性乙型脑炎病毒一步法RT-PCR的建立及达州市猪流行性乙型脑炎病毒流行病学调查与分析

为了建立一种快速检测猪流行性乙型脑炎病毒(Janpanese encephalitis virus,JEV)的病原学检测方法,并掌握达州市JEV的感染情况,试验根据GenBank中JEV E基因序列设计1对检测引物,建立一步法RT-PCR,并对退火温度(50,52,54,56,58℃)、模板添加量(1,2,4,6,8μL)、引物添加量(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8μL)进行优化,考察方法的特异性、敏感性、重复性、符合性,同时对2017-2020年分别采集于达州市7个市(县、区)的243份样品进行JEV检测,对检测结果进行不同地区、不同年份、不同季节、不同饲养方式下猪群中JEV阳性率的比较分析。结果表明:优化后的一步法RT-PCR扩增体系为2×Step Buffer 12.5μL,上下游引物(20μmol/L)各0.4μL,RNA(68 ng/μL)4μL,H2O 7.7μL。扩增程序为50℃30 min;95℃5 min;94℃40 s,54℃40 s,72℃40 s,30个循环;72℃10 min;4℃终止反应。该方法能够特异性扩增JEV,而检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均为阴性,对JEV RNA的检测灵敏度为27.2 pg,对JEV、CSFV、PRRSV、PEDV、TGEV、PRV、PCV-2、PPV、3份JEV阳性病料、3份JEV阴性病料重复检测3次的结果完全一致,检测243份猪临床病料样品的平均阳性率为9.05%,其中不同地区阳性率为3.45%~13.04%,2017,2018,2019,2020年阳性率分别为5.77%、6.90%、10.29%和12.31%,夏季和冬季的阳性率分别为13.33%和5.17%,规模化养猪场和散养户的阳性率分别为5.94%和11.27%,说明建立的JEV一步法RT-PCR具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,达州市JEV的流行存在个别地区感染情况较严重、2019年和2020年感染情况较2017年和2018年严重、夏季感染情况较冬季严重、散养户感染情况较规模化养猪场严重等特点。

猪流行性乙型脑炎及防治

流行性乙型脑炎．又叫日本脑炎，是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种中枢神经系统疾病为主要特征的人畜共患性疾病。这是一种严重危害人畜健康的蚊媒传染病。在流行性乙型脑炎的流行中蚊虫是重要的传播媒介。猪是乙脑的危害对象，同时猪也是流行性乙型脑炎病毒最重要的自然增殖动物（扩增器）。在猪中该病毒流行环节是猪一蚊一猪或蚊一猪一蚊。猪发生1次本病后当年可以再发．第二年还可再感染．但症状一次比一次轻，最后成为无症状的隐性感染。感染的公猪精液也可作为媒介感染猪。目前本病多为隐性感染或呈散发性。

猪流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的灵敏度可达到10个拷贝,是常规PCR灵敏度的100倍。该方法对其它相关猪病病毒的检测显示均为阴性。重复性试验表明该方法的组间和组内的变异系数均小于2%。通过检测未免疫猪和免疫减毒活疫苗猪在感染JEV后的病毒血症样品,将该方法与JEV传统病毒分离方法进行比较,结果表明该方法与乳鼠脑内接种方法灵敏度相同,比细胞分离方法灵敏度高。该方法可以作为临床检测JEV及评价疫苗保护效力的检测方法。

猪流行性乙型脑炎病毒prM-E抗原捕获ELISA检测方法的建立

为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究以pr M-E结构蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5B10和5E7分别作为捕获抗体和辣根过氧化酶标记的检测抗体,对反应条件进行优化,建立了抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法。该方法与其它常见猪病病原无交叉反应,特异性强。该方法可以检出1.25×105 pfu/m L的病毒和48.44 ng/m L pr M-E重组蛋白,最佳线性检测范围为0.05μg/m L^1.00μg/m L,线性相关系数(R2)为0.996。组装的试剂盒批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。试剂盒4℃保存12个月稳定。该研究为JEV亚单位疫苗的研制与生产提供了技术支持。