猪流行性腹泻灭活疫苗佐剂筛选

为探究不同佐剂对猪流行性腹泻灭活疫苗免疫效果的影响,选用水包油佐剂A(O/W)、油包水佐剂B(W/O)和双相佐剂C(W/O/W)3种不同佐剂配制疫苗,分别接种3~5日龄仔猪后攻毒,综合评价不同佐剂的免疫效果。结果显示:A、B佐剂组疫苗免疫猪的抗体水平低于C佐剂组;攻毒后进行猪流行性腹泻病毒检测发现,仅C佐剂组试验猪全部呈阴性;剖检所有疫苗免疫组试验猪均未发现脏器病变。结果说明:双相佐剂制备的灭活疫苗免疫效果明显优于水包油和油包水佐剂疫苗,且安全性较高,可优先选择双相佐剂制备猪流行性腹泻灭活疫苗。本研究为猪流行性腹泻疫苗制备、生产提供了技术支撑。

猪流行性腹泻灭活疫苗的研究

用猪流行性腹泻(PED)沪毒株研制氢氧化铝灭活疫苗.接种途径为后海穴位。以0.1ml/头主动免疫接种3日龄仔猪,保护率为77.28%;以0.5ml/头主动免疫接种3～22日龄仔猪,保护率为85%;以3ml/头被动免疫接种妊娠母猪,其所产3日龄仔猪的保护率为97.06%。接种疫苗后14天开始产生免疫力。免疫期可达6个月.疫苗在室温(19～26℃)保存226天仍保持较好的免疫原性.

不同佐剂对猪流行性腹泻灭活疫苗免疫效果的影响

为了探究不同佐剂对猪流行性腹泻灭活疫苗免疫效果的影响,本试验用水包油佐剂Merckinade SDA 25、油包水佐剂Montanide ISA 61 VG和双向佐剂Montanide ISA 2063种不同佐剂制成猪流行性腹泻灭活疫苗,然后用疫苗免疫动物,于免疫后21日测定中和抗体,并于免后21日攻毒,攻毒10日后观察猪的临床症状、检测排毒情况并于剖检后观察脏器变化情况,综合评定免疫效果。结果显示,用双向佐剂Montanide ISA 206制成的疫苗免疫效果优于其他两种佐剂制成的疫苗。这为商品化生产高效价猪流行性腹泻灭活疫苗时佐剂的选择提供了重要的依据,具有现实指导意义。

猪流行性腹泻灭活疫苗的临床免疫效果评价

为防控猪流行性腹泻,筛选可靠的免疫方式,研究采用与猪流行性腹泻病毒毒株序列同源性最高的猪流行性腹泻灭活疫苗进行紧急免疫,于产前30、15 d分别免疫妊娠母猪,并检测免疫前后母猪的血清和初乳中猪流行性腹泻病毒中和抗体及免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)特异性抗体。结果表明,免疫后母猪的血清和初乳均产生高水平且稳定的中和抗体及IgG、IgA特异性抗体,所产仔猪无腹泻临床症状。研究表明,灭活疫苗可应用于猪流行性腹泻的紧急免疫防控,2针灭活疫苗的免疫方式可有效防控猪流行性腹泻。

猪流行性腹泻活疫苗与灭活疫苗免疫优劣势分析

猪流行性腹泻(PED)疫苗主要有活疫苗和灭活疫苗两种。PED活疫苗具有免疫效果好、免疫期长、适应性强等优势,而灭活疫苗则具有安全性高、稳定性好、预防效果稳定等优势。在选择疫苗时,需要综合考虑疫苗的特点、免疫效果、病情严重程度、养殖环境等因素,本文综述了两种疫苗的优劣,以便同行可以借鉴,以达到最好的预防效果。

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗预防效果观察

猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻是一个全球性的问题,长期一直困扰着养猪业的发展,它们不仅直接威胁着仔猪的生长发育,而且也是仔猪饲养管理工作中的重点和难点,特别是冬春季节，天气骤变，更容易促发这两种疫病。

猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其灭活疫苗的研制

旨在对疑似猪流行性腹泻(PED)患猪的病料进行病毒分离,并制备灭活疫苗。从因腹泻病死的7日龄内仔猪的小肠组织及内容物中,分离出1株猪流行性腹泻病毒(PEDV),命名为PEDV-GS。用Vero细胞对病毒进行扩增,病毒液中加入终浓度为0.7 mg/mL甲醛,28℃灭活48 h,加入ISA 61 VG佐剂进行乳化,经稳定性、安全性和效力试验,初步研制出猪流行性腹泻的流行毒株灭活疫苗。疫苗免疫妊娠母猪后对仔猪进行母源中和抗体检测、安全性和有效性试验。结果表明,制备的猪流行性腹泻灭活疫苗稳定性和黏度检测都合格,且对仔猪安全有效,对妊娠母猪产仔数量及质量无影响,其被动免疫抗体至少持续到仔猪产后28 d。试验成功制备了具有安全性和高保护率的猪流行性腹泻灭活疫苗。

猪流行性腹泻病毒全病毒灭活疫苗量效关系研究

本研究旨在探索猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)灭活疫苗不同抗原含量对仔猪感染的保护作用。测定不同浓缩倍数PEDV感染性病毒粒子数和病毒粒子总数,用不同浓缩倍数抗原分别制备灭活疫苗免疫小鼠,利用ELISA抗体检测方法、中和试验、ELISPOT方法测定体液免疫与细胞免疫产生情况,筛选合适抗原含量疫苗进行仔猪免疫并测定抗体,利用攻毒试验研究浓缩疫苗与保护之间的关系。结果显示,当抗原含量达8×10^(6) pfu·mL^(-1)以上时,灭活疫苗能有效刺激小鼠产生体液免疫及细胞免疫。以2 mL含8×10^(6) pfu·mL^(-1)抗原的灭活PEDV疫苗免疫仔猪可抵抗PEDV攻毒引起的腹泻及连续排毒,相较于总病毒粒子数,感染性病毒粒子数与抗体产生呈显著相关(r=0.9981),中和效价与仔猪保护呈显著相关性(|r|=0.9747)。PEDV灭活疫苗可以提供良好的免疫保护,其中感染性病毒数量是提升抗体水平的关键因子,抗体滴度作为一项体液免疫的指标是判断免疫保护的重要参考。

一株变异型猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其灭活疫苗的免疫效力试验

本研究旨在分离猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异株,通过悬浮培养工艺制备成高效价的PEDV灭活疫苗。2017年从中国多个规模化猪场采集腹泻病死仔猪的小肠及其内容物200份,通过RT-PCR方法进行PEDV检测并测序,筛选一株PEDV变异株,将其在2 L反应器里悬浮培养的Vero细胞上进行病毒分离与传代培养,收获的病毒液鉴定后测定TCID50,经甲醛灭活后加入氢氧化铝胶佐剂配制成PEDV灭活疫苗,对其物理性状、稳定性、黏度、无菌等进行检验,检验合格后免疫妊娠母猪及所产仔猪,对其安全性和免疫效力进行研究。结果显示,200份病料中有86份为PEDV阳性,将筛选的PEDV变异株病料在Vero细胞上传至第5代时出现细胞病变,传至第10代收获病毒液,经鉴定后确定为PEDV变异毒株,并命名为PEDV-GF10株。收获的病毒液浓缩后测得病毒滴度可达1×108.0 TCID50/mL。疫苗检验合格后在母猪产前40和25 d时试验组后海穴肌内注射4 mL疫苗,空白组不免疫,结果显示试验组与空白组母猪的生产情况无明显差异,所产3日龄仔猪分别免疫不同剂量后体温无显著差异,表明该疫苗对母猪和仔猪均安全性良好。随机挑选试验组与空白组母猪所产3日龄仔猪各20头,分别口服4 mL PEDV-F10病毒培养物,空白组母猪所产仔猪在攻毒24 h后PEDV发病率为100%,抗体均为阴性;试验组母猪所产仔猪只有10%出现了轻微的腹泻症状,仔猪获得了高达90%保护率,且仔猪被动免疫后抗体能持续至35 d以上。以上结果表明,PEDV-GF10变异株通过悬浮细胞培养后病毒滴度显著提高,研制的PEDV-GF10株灭活疫苗安全有效,能够对中国的PEDV变异株达到有效防控,为国内PED防控提供了理论依据。

猪流行性腹泻病毒灭活疫苗临床免疫效果评价

猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)引起猪的腹泻、呕吐、脱水及对仔猪高致死率的一种接触性肠道传染病,猪即使耐过也会降低经济效益。20世纪80年代初PED在我国陆续发生,目前不同阶段不同品系的猪只,对此病均有高度易感性,仔猪死亡率高达80%~100%。自2010年末开始,我国猪场陆续暴发了由PEDV变异毒株引起的“顽固性腹泻”疫情,严重影响我国养猪业健康发展,给我国养猪业造成巨大经济损失。由于PED在现阶段未有特效药能够治疗,在养殖管理中,仔猪免疫防治工作尤为重要。

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗耐热保护技术的研究

疫苗保护剂及其冻干工艺是影响疫苗效果的重要因素,对疫苗保存、运输及免疫效果有很大影响。为提高疫苗质量,在常规保护剂(明胶、蔗糖)基础上添加卡波姆、聚乙二醇和聚乙烯吡咯烷酮等基质,组成新型保护剂,分别在病毒液保存和疫苗冻干过程添加,并评价其病毒保护效果。结果表明:在半成品病毒液储存时加入10%新型保护剂,可使半成品保存期由原来的2个月延长至12个月。采用新型保护剂制备的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗,溶解性显著优于常规保护剂活疫苗,保存期由原来-20℃保存18个月提高到2~8℃保存36个月,且病毒活性及攻毒保护效力均优于原工艺产品,实现了储运过程中疫苗的冷藏储运,提升了疫苗的应用效果。

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护相关性研究

以实验室试制的3批猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗(JL株+HN-1株),对3~5日龄仔猪进行接种,免疫后14、21 d分别采血,分离血清,检测各组仔猪的TGEV、PEDV中和抗体,并以TGEV和PEDV强毒进行攻毒。结果表明,中和抗体效价的升高,对仔猪的保护率也随之升高,两者呈正相关。当血清中TGEV中和抗体达到132时,可以完全保护仔猪抵抗TGEV强毒的攻击;PEDV中和抗体达到116时,可以完全保护仔猪抵抗PEDV强毒的攻击。

猪流行性腹泻治疗药物及疫苗研究进展

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是危害养猪业发展的重要病原微生物之一,PEDV可在猪群中快速传播,使猪群大面积的感染并且爆发猪流行性腹泻(PED)。感染猪群随年龄的不同呈现不同程度的临床症状,其中新生仔猪的症状尤为明显。PEDV可破坏感染仔猪的消化系统,造成其食欲不振,呕吐、腹泻、脱水等临床症状,且患有PED在仔猪死亡率极高,仔猪的大量死亡对生猪养殖产业造成极其严重的经济损失。目前预防该病的主要手段为生物安全防控及疫苗免疫注射,对PEDV产生抑制作用的药物还在积极的研发中。就目前药物对PEDV的抑制多数是在细胞感染病毒之前,如番茄碱、Griffithsin(GRFT)。该文对目前在实验中对PEDV产生一定的抑制作用的药物进行阐述,并对PED疫苗的研究进展进行简要总结。

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗的生产应用

猪传染性胃肠炎（swine transmissible gastroenteritis,TGE）和猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）均由冠状病毒引起,该病以呕吐、腹泻、脱水为主要症状。

利用反向遗传学技术开发猪流行性腹泻减毒活疫苗的研究进展

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的接触性肠道传染病,严重威胁全球养猪业健康发展。疫苗接种是防控该病最有效的方法。虽然已开发出多款疫苗用于PED防控,但这些疫苗对PEDV强毒株攻击的保护效力仍不尽理想。PEDV反向遗传学技术的建立为PED疫苗研发提供了新的工具。笔者在回顾PEDV反向遗传学和病毒毒力相关蛋白研究进展的基础上,讨论了如何利用反向遗传学技术构建安全、有效且遗传稳定的PED减毒活疫苗候选毒株,并对PED减毒活疫苗的研究作一简要展望,旨在为PED减毒活疫苗的研发提供参考。

基因组2b灭活疫苗、美国棘波插入、干扰素λ对猪流行性腹泻病毒感染力的影响

干扰素λ为干扰素家族Ⅱ中的一种。干扰素λ与IFN-alpha相比表现出更为强大的抗病毒活性并主要作用于黏膜上皮。基因组2b(genogroup 2b)分离株比基因组1b(genogroup 1b)分离株具有更高的感染力和致病性。基因组2b(genogroup 2b)灭活疫苗的研发使猪流行性腹泻病毒基因组2b分离株得到有效的预防。美国棘波插入lowa106(S-INDEL)对猪流行性腹泻病毒(PC21A)的部分保护可能提示我们不同核苷酸的作用。猪流行性腹泻病的流行正是因为猪流行性腹泻病毒毒株的基因变异导致变异株毒力增强以及现有疫苗难以有效免疫。猪流行性腹泻病毒感染力太强。本文将从基因组2b灭活疫苗、美国棘波插入、干扰素λ三个方面进行讨论。

猪流行性腹泻疫苗研究进展

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是目前困扰养猪业发展的重要病原之一,可造成猪群暴发流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)和初生仔猪大量死亡,给养猪业带来重大经济损失。目前PED的主要防控手段是疫苗免疫,包括全群普免以及疫苗接种母猪的跟胎免疫,但市场疫苗的免疫效果往往不理想。得益于病毒生物学研究和技术的进步,近年来PED疫苗研究取得长足进展,不仅灭活疫苗和弱毒疫苗的研制方法得到不断更新和完善,病毒载体疫苗、核酸疫苗以及亚单位疫苗研究也都取得突破性进展。本文综述了不同种类PED疫苗的特点及其研究进展,指出不同种类疫苗需要着力突破的技术环节,并对未来PED疫苗发展和PED防控作简要展望。

二乙烯亚胺在猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株灭活疫苗中的应用

[目的]通过甲醛和二乙烯亚胺对猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株的灭活效果比较,获得一种适合猪流行性腹泻病毒疫苗灭活的生产工艺。[方法]将二乙烯亚胺接种小白鼠观察二乙烯亚胺的毒性。分别使用甲醛和二乙烯亚胺,在室温条件下灭活PEDV-WN株病毒液8、12、16、20和24 h,取灭活后的病毒液接种生长良好的单层Vero细胞,进行灭活效果的检验;同时,取灭活检验合格的病毒液进行无菌检验。灭活合格的病毒液乳化配苗,进行安全性和效力试验。[结果]接种二乙烯亚胺的小白鼠28 d均健活,状态良好;甲醛体积分数为0.3%,灭活16 h可使病毒液完全灭活;二乙烯亚胺浓度为0.010 mol/L,灭活12 h可使病毒液完全灭活;灭活合格的病毒液无菌;将不同方法灭活后的病毒液乳化配苗,接种3~5日龄的仔猪,安全性较好,未观察到不良反应,然后用PEDV-WN毒株攻毒,二乙烯亚胺灭活制备的疫苗比甲醛灭活制备的疫苗保护率高。[结论]在猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株病毒液中加入浓度为0.010 mol/L的二乙烯亚胺,在室温灭活12 h,可使病毒完全灭活,且制备的疫苗安全性好,保护率高。

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗田间试验

猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV）是引起猪腹泻的重要病原,主要引起两周龄以内仔猪发生以急性腹泻、脱水及高死亡率为特征的猪传染性胃肠炎（TGE）,该病给世界各国养猪业造成了巨大经济损失。我国从20世纪50年代起就有猪传染性胃肠炎的报道,并且一直以来在我国养猪场时有发生,