两广部分地区仔猪腹泻死亡的流行病学调查

研究旨在分析广东、广西地区2015年1—10月份腹泻仔猪群中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)发病情况和流行特征,以便为今后的防控提供理论数据。分别采用RT-PCR检测PEDV、用Nano PCR方法检测PRV,对2015年1—10月份广东、广西地区7个地市临床送检的56份组织样品(包括心、肝、脾、肺、肾、淋巴等,其中有35份含有小肠样品)进行病原核酸检测。病原核酸检测结果显示:PEDV的阳性率为14.28%,PRV的阳性率为53.6%;PEDV与PRV混合感染率为8.57%。对PEDV阳性样品的S1基因进行遗传进化分析,结果显示,研究获得PEDV阳性样品的S1基因与2015年广东分离的CH-HGC-01-2015的亲缘关系较近。由此可见,广东、广西地区PRV发病率较高,PEDV的发展呈新的流行态势,并且存在PEDV和PRV的混合感染。

猪流行性腹泻病毒变异株N基因的克隆及原核表达

猪流行性腹泻病（Porcine epidemic diarrhea,PED）是我国猪群近两年的多发疾病。本试验于2012年在安徽分离到一株猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）AH2012。为研究该变异株N基因的特性,采用RT-PCR方法获得了其N基因片段,经测序后与其他代表性的PEDV基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,发现该毒株与近年来在我国流行的几株PEDV变异株同源性在99.3~99.5%之间,进化分析显示该毒株属于目前流行的PEDV变异株。将其克隆到表达载体pET28a（＋）中,构建了重组质粒pET28a-N,经测序鉴定正确后,转化至感受态细胞BL21（DE3）中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为65 ku的融合蛋白,蛋白表达量较高,蛋白免疫印迹结果显示,表达的N蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性的免疫反应,表明原核表达的N蛋白具有良好的反应原性。该研究可为猪流行性腹泻病的流行病学调查、诊断与防控方法的建立奠定基础。

江苏及周边地区猪流行性腹泻病毒的检测及其ORF3基因序列分析

根据江苏省及周边地区猪场2014年出现的临床腹泻病例,对发病猪送检病料进行了猪流行性腹泻病病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、轮状病毒（RV）这3种重要病毒进行检测,同时分析PEDV的ORF3基因序列。结果显示：建立的三重RT-PCR检测方法,检测下限可达10^4拷贝/μL的混合质粒,特异性好,没有扩增出其他病毒。PEDV感染率高达36.3%,TGEV与RV的感染率均不足1%,此外还存在1例PEDV与TGEV混合感染的情况。对部分PEDV阳性病料的ORF3基因进行序列分析,发现核苷酸（氨基酸）的同源性为95.9%-100%（96.9%-100%）,且与疫苗毒株遗传关系较远。该结果明确了江苏及周边地区的仔猪病毒性腹泻病原,为该病的防控提供参考依据。