对流免疫电泳鉴定猪源多杀性巴氏杆菌血清型

通过特异性试验、敏感性试验、阻断试验等建立鉴定猪源多杀性巴氏杆菌Pasteurella multocida血清型的对流免疫电泳(CIE)技术。结果表明,抗原、抗体之间具有较好的特异性,而且有着很好的重复性;敏感性较琼脂扩散试验至少提高4倍;对本实验室分离的13株Pm进行荚膜血清型分型鉴定显示,A型(8/13,61.54%)、D型(5/13,38.46%),符合PCR鉴定结果。本方法具有快速、特异等特点,且不需要特殊设备,操作简便。

猪源A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗制备及免疫效果评估

【目的】制备猪源A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗,有效控制巴氏杆菌病的发生和流行。【方法】从发病猪病料中分离猪源A型多杀性巴氏杆菌,测定生长曲线,通过小鼠致病性试验筛选疫苗候选菌株。将筛选得到的疫苗候选菌株培养后进行灭活,无菌检验合格后,按1∶4的比例与SUMMIT-CB-200佐剂混合,制备猪源A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗。最后通过小鼠和仔猪免疫攻毒保护试验评估疫苗保护力。【结果】分离到11株猪源A型多杀性巴氏杆菌;生长曲线测定结果显示,11株菌均在培养至6 h时达到生长稳定期,活菌数范围为2.1×10^(9)~8.4×10^(9)CFU/mL;小鼠致病性试验结果显示,攻毒后小鼠出现精神沉郁、食欲降低、行动迟缓、被毛粗糙、扎堆、眼睛周围大量脓性分泌物、腹式呼吸、共济失调等症状,共筛选到A4、A8、A9和A11 4株疫苗候选菌株,其中最强毒株A4小鼠皮下攻毒半数致死量(LD50)为167 CFU;仔猪毒力试验结果显示,攻毒后仔猪出现精神沉郁、食欲降低、皮肤发红、呕吐、呼吸困难、腹式呼吸、体温升高、关节肿大、跛行等症状,A4菌株仔猪皮下攻毒LD50为1.72×10^(10)CFU;免疫攻毒保护试验结果显示,4株猪源A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗对小鼠和仔猪均具有一定保护力,其中A9保护力最强,对小鼠保护率达60%,对仔猪保护率达75%。【结论】本研究制备的灭活疫苗能对猪源A型多杀性巴氏杆菌强毒株提供较好的免疫保护力,具有一定的开发价值。

猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达

皮肤坏死毒素(Dermonecrotictoxin,DNT)是产毒素多杀性巴氏杆菌(ToxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)的主要毒力因子和保护性抗原。以猪源D型T+Pm的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到了编码DNT的toxA全基因编码序列,共4019bp。将其克隆到pMD18-T载体并测序,结果表明,toxA基因序列与GenBank已报道的5个toxA基因序列的同源性达99.8%以上。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-KG的GST基因下游,转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达,获得大小约173000的融合蛋白。Westernblot结果表明,该融合蛋白具有良好的反应原性。动物试验表明,该重组蛋白可以诱导小鼠产生高水平的抗体,并可抵抗致死剂量的天然DNT毒素攻击。

猪多杀性巴氏杆菌的鉴定方法和耐药性的研究进展

免对近年来国内外猪多杀性巴氏杆菌的分子生物学鉴定和耐药性的研究进展做了较为详细的阐述和简要总结,希望为大家在猪多杀性巴氏杆菌的鉴定和耐药性方面提供参考。

猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达研究

多杀性巴氏杆菌可以直接引起猪肺疫、禽霍乱、牛出血性败血症、猪萎缩性鼻炎等病症,对养殖业影响非常大。据调查研究显示,皮肤坏死外毒素是产毒素多杀性巴氏杆菌的重要因此和保护性抗原。基于此,重点研究猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因克隆与表达。