两种测定肉制品中牛、猪源性成分的方法对比研究

随着经济的发展,人们对肉类的需求量日益增长,一些无良商家为了牟取暴利,掺假现象层出不穷,对人的身体健康造成危害。目前,在生物学领域鉴定动物源性成分的方法以核酸分析为主,检测方法有实时荧光PCR、普通PCR、聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性、PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)等。

食品中猪源性成分定性检测能力验证结果与分析

本文根据中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供的能力验证作业指导书以及SN/T 2051—2008、GB/T 38164—2019、SN/T 3730.8—2013 3种方法对2个肉糜样品进行猪源性成分检测,通过参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心食品中猪源性成分鉴定能力验证,验证实验室动物源性成分检测的能力,扩大实验室的影响力。结果表明,3种方法均可在样品22-W514中检出猪源性成分,在样品22-K216中未检出猪源性成分,本次能力验证获得满意结果。

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中猪源性成分

目的建立一种快速、特异、灵敏的猪源性成分检测方法。方法本研究以猪线粒体12S rRNA基因序列为靶位点设计引物和探针,进行荧光定量PCR扩增,建立猪源性成分检测方法;以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、鸭肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对猪肉DNA进行梯度稀释,做灵敏度检测。结果该方法能够有效对猪源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(可达0.1μg/kg)并且羊肉成分的存在对猪肉灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测畜肉食品中含有的猪源性成分。

猪源性成分的PCR检测技术优化研究

为确定食品和饲料中的猪源性成分,本试验优化了PCR检测猪源性成分的反应体系。试验采用20μl的PCR反应体系,分别测定Taq DNA聚合酶为0U、1U、2U、3U时;25m mol/L的MgCl2为0、2、4、6μl时;dNTP为0、0.1、0.2、0.4μl时,其他PCR反应因素为最大量的结果。结果表明:优化的猪源性成分PCR反应体系中Taq DNA聚合酶、25mmol/L MgCl2、dNTP适宜浓度分别为2U,2μl,0.4μl。优化后的反应体系对猪肉DNA最低检测浓度为0.04ng/μl。本研究优化出的猪源性成分PCR反应体系经二重PCR反应技术进行验证,不仅快速,简便,准确性与灵敏度高,并且经济、高效。

一种基于实时荧光聚合酶链式反应的肉及肉制品中猪源性成分含量测定

为了建立一种基于实时荧光聚合酶链式反应的肉及肉制品猪源性成分含量测定方法,分别以猪线粒体DNA的NADH4基因和16S rRNA基因为靶位点设计猪特异性引物、探针和通用引物、探针,建立猪源性成分含量测定方法,通过特异性、灵敏性、线性、准确度及市售肉制品检测,对该方法体系进行检验和评价。结果表明:建立的猪源性成分含量实时荧光聚合酶链式反应测定方法体系具有良好的特异性及灵敏性,最低可检测到0.4pg/μL纯猪肉DNA;无论是猪特异性体系还是通用体系都呈现良好的线性关系(R2均达到0.999以上)和较宽的线性范围;通过含猪源性成分的模拟混合肉样检测,样品猪源性成分含量的回收率平均值为122.27%,说明该方法具有较高的准确度;通过市售肉制品检测表明该方法可以用来检测实际样品(包括生鲜样品和熟肉样品)中猪源性成分含量。

牛羊肉中猪源性成分检测能力验证研究

目的了解我国食品检测实验室的牛羊肉中猪源性成分的检测能力。方法国家认监委组织实施了牛羊肉中猪源性成分的检测能力验证工作,22个省、市、自治区的38家实验室参加了本次能力验证。本研究介绍了本次能力验证的实施过程,包括方案设计、样品制备、均匀性稳定性试验、结果统计等,并对能力验证结果进行了分析。结果实验室检测结果满意率为97.40%,样品检测结果一致率为99.47%。结论参加能力验证的绝大多数实验室可以准确检测牛羊肉中猪源性成分,具备了分子生物学检测肉种鉴定的能力。

双重PCR熔解曲线峰快速检测食品中猪源性成分方法的建立

基于国际生命条码联盟(CBOL,the Consortium for the Barcode of Life)提出的barcoding技术所确定的序列区域,针对猪的线粒体COⅠ基因序列设计特异性引物。为了避免食品中PCR抑制剂的影响,本实验设置GCG(胰岛素受体)基因125bp的纯化片段为内参照,控制假阴性结果的出现。通过优化PCR反应条件,猪和GCG基因的特异性产物在79.2℃和75℃有特异性熔解峰。设置牛、羊、鸡、兔、鼠和空白对照,均无扩增。测序结果表明,该猪特异性引物的PCR产物含有245bp的核苷酸序列与GenBank中相应序列吻合;该方法检出限为0.001%。

基于TaqMan PCR鉴定猪源性成分的引物和探针研发

为了研发具有自主知识产权的猪源性成分检测的引物和探针,比对猪、牛、羊、马、鸡、鸭、兔、鹅等8种动物的线粒体基因组,筛选并设计猪特异性的引物和探针组合进行荧光定量PCR。研究结果表明,所研发的猪源性成分检测的引物和探针仅对猪相关DNA模板有典型扩增曲线,对其他动物来源的DNA模板无扩增,具有高度的猪源性特异性。灵敏度实验表明,利用此引物和探针的检测方法具有高度的灵敏度,可达1pg级。肉制品中猪源性定量检测实验说明此方法具有较好的定量检测能力。此引物和探针组合适用于猪源性食品和农畜产品的检验检测。

利用锁核酸探针技术快速检测肉制品中猪源性成分

[目的]建立快速检测肉制品中猪源性成分的锁核酸探针荧光PCR检测方法。[方法]基于猪线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和锁核酸探针,建立快速检测肉制品中猪源性成分的锁核酸荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度、重复性测试及应用检测对建立的方法进行评价。[结果]建立的锁核酸荧光PCR方法对牛、羊、马、鸡、鸭、鹅均无非特异性扩增;该法可检测低至1.20 pg的猪肉DNA,重复检测结果的变异系数均小于1%。应用该法检测市售肉制品50份,32份标示含有猪肉成分样本的检测结果均与预期相符,另发现1份羊肉丸为猪肉制备、2份鸡肉火腿肠中掺有猪源性成分而未标示。[结论]本研究建立的方法具有特异、灵敏、稳定等优点,适用于大规模快速检测肉制品中猪源性成分。

动物源性食品中猪源性成分检测

为探讨猪源性成分检测可行的方法,利用SYBR Green Ⅰ Real time PCR对动物源性食品中猪源性成分进行测定。根据猪mtDNA保守序列设计特异性引物,对牛、羊、猪的动物源性食品进行扩增;克隆目的基因片段,并以此为标准品,优化反应条件和反应体系,提高灵敏度;反复检测不同样品,测试稳定性。结果表明SYBR GreenⅠReal time PCR技术能够特异性的检测到动物源性食品中猪源性成分,引物特异性强、稳定性可靠,灵敏度达到1×10^(-6)ng/μL,建立了动物源性食品中猪源性成分的快速、精准、经济、便捷的检测方法。

鸡肉粉中猪源性成分的检测分析

本研究建立了一种基于实时荧光聚合酶链式反应的鸡肉粉中猪源性成分含量测定方法,以期了解市场上饲料原料鸡肉粉中猪源性成分的含量及其污染情况。利用该方法对从上海、山东、广东、四川等地收集的61份鸡肉粉样品进行猪源性成分检测。检测结果显示,61批样品中检出含有猪源性成分的样品15批,检出率为24.6%。由检测结果可知,市场上鸡肉粉中含有猪源性成分的比例较高,需要加强对饲料原料鸡肉粉中猪源性成分的监管。

实时荧光定量PCR和常规PCR检测肝水解肽样品中牛、猪源性成分的对比研究

目的对比实时荧光定量PCR与常规PCR检测肝水解肽样品中牛、猪源性成分的有效性。方法对牛、猪源性肝水解肽样品肝脏至上清液工艺段样品进行DNA提取,采用实时荧光定量PCR和常规PCR同时检测样品中的DNA。结果实时荧光定量PCR和常规PCR在猪源、牛源肝水解肽从肝脏到酶解液的各工艺步骤段样品中,均检测到动物源性DNA,在上清液至超滤液四中,均未检测出动物源性DNA。结论两种方法均可用在检测肝水解肽样品中牛、猪源性成分。实时荧光定量PCR同时还具有快速、简便、不污染环境、重复性好的特点,可明显提高工作质量及效率。

食用明胶中猪源性成分检测研究进展

明胶是一种重要的食品添加剂,主要来源于猪、牛等动物的骨和皮。在伊斯兰教的宗教信仰中,禁止食用含有猪源性成分的产品,因此对于食用明胶中猪源性成分的检测至关重要。该文主要对近年来国内外有关明胶中猪源性DNA或蛋白质成分的检测方法及优缺点进行了阐述分析,并对未来检测方法的发展趋势进行了展望。由于食品在加工过程中会发生DNA和蛋白质降解,故对样品进行前处理显得尤为重要,因此该文同时对样品前处理方法进行了总结评价。

肉制品中猪源性成分相对定量检测方法研究

目的建立一种肉制品中猪源性成分的相对定量检测方法。方法针对猪的ER-beta基因的mRNA序列设计了特异性引物与探针序列,并对引物和探针的特异性进行了验证。构建重组质粒,利用质粒拷贝数的log值和Ct值构建标准曲线。通过标准曲线计算各个样本拷贝数,将待测样本和标准种源样本的拷贝数进行比较,确定检测样本的猪源性含量。结果实际掺加量分别为20%、40%、50%和60%的混合样品经该方法检测所得掺假量均值为猪体系24.8%、53.1%、53.1%、61%,检测结果与其实际含量基本一致。结论该方法基本能实现肉制品中猪源性成分的相对定量检测。

一种食品中猪源性成分的快速检测技术

建立一种基于PCR技术的食品中猪源性成分快速检测技术。根据猪线粒体cytb基因设计引物,进行PCR扩增。该方法对猪DNA检测的灵敏度达到100pg;该方法仅对猪DNA检测呈阳性,与其他物种DNA无交叉反应;同时可用于商业样本及复杂食物样本的检测。本研究的猪源性成分特异PCR检测技术具有快速、准确的特点,且具有较高的特异性和敏感性,可作为肉制品中猪源性成分快速检测的手段。

实时荧光定量PCR鉴别食品中猪源性成分的研究进展

本文针对目前鉴别食品中猪源性成分的方法,即实时荧光定量PCR技术进行综述,并展望其应用前景。

基于重组酶等温扩增技术快速检测生鲜肉中猪源性成分

目的建立重组酶介导等温扩增技术快速检测猪肉中猪源性成分的方法。方法应用重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),根据猪源性线粒体细胞色素b(Cytb)基因序列设计2对RPA引物,筛选了1对可用于扩增的引物,建立基于重组酶介导的等温扩增技术的检测方法,并对该方法进行扩增温度、特异性和灵敏性验证。结果 30℃等温扩增条件下,RPA引物的特异性良好,灵敏性可达0.1ng/μL。结论本研究成功建立了猪源性肉制品的等温扩增方法,该方法快速简便,具有较高的特异性和灵敏性,适用于市售生鲜肉中猪源性成分的快速鉴定。

实时荧光PCR定量检测肉制品中猪源性成分

为了准确可靠地对肉制品中猪源性成分进行定量检测,通过生物信息学方法筛选到猪细胞核单拷贝基因(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 2-like,CACA)。以CACA基因为扩增靶标,设计了特异性引物、TaqMan探针,建立了基于实时荧光定量PCR技术检测猪肉含量的方法。实验结果表明,该方法具有良好的种外特异性和种内稳定性,在20~0.032 ng/μL的DNA浓度范围内,模板DNA和扩增Ct值之间存在良好的线性关系,标准曲线为y=-3.508x+28.636,线性决定系数R^(2)为0.997。在相对标准偏差≤25%的条件下,可准确检测猪DNA含量低至0.1%的DNA样品,猪肉含量低至5.0%的肉制品。通过对市售样品的检测,发现有的肉制品中掺有猪肉但未标识,有的配料表中猪肉并非主要成分但实际上猪肉占主要成分。本研究建立的实时荧光定量PCR能够准确可靠对肉制品中的猪肉成分进行检测,对准确鉴别肉制品掺假以及量化肉制品组分具有重要参考价值。

牛肉粉末中猪源性成分定性检测FAPAS能力验证结果与分析

目的通过参加牛肉粉末中猪源性成分定性检测FAPAS能力验证,提高实验人员的专业水平,扩大实验室影响力以及增强竞争力。方法根据FAPAS组织方提供的能力验证作业指导书及SB/T 10923-2012《肉及肉制品中猪牛羊马驴鸡鸭鹅兔源性成分的快速鉴定实时PCR法》,对2个牛肉粉末样品3108A-47、3108B-19进行猪源性成分检测检测。结果 2个样品均检出牛源性成分, 3108A-47未检出猪源性成分, 3108B-19检出猪源性成分。结论本次能力验证结果为满意。

实时荧光PCR法检测肉制品中猪源性成分

目的建立一种高特异性和高灵敏度的有效检测猪源性成分的检测方法。方法以猪雌激素受体基因设计合成一对特异性引物,采用液氮研磨结合试剂盒抽提的方法提取猪肉中的DNA,分别以300、30、3、0.3、0.03ng为模板量进行梯度反应,基于荧光定量PCR技术(SYBR法)建立检测方法。结果以Ct值作为纵坐标,以lg X(X为DNA的量,ng)的值作为横坐标,得到标准曲线方法Ct=30.473-3.542lg X,r2=0.9997;该方法的检测灵敏度达到2pg。结论该猪源性成分检测方法简单快捷、特异性和重复性好、灵敏度高,可作为市场监督和检测鉴定的可行性方法。