猪源肺炎克雷伯菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为了实现猪源肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kp)的快速检测,根据GenBank公布的猪源Kp Khe基因保守序列,设计引物和探针,建立了一种Kp荧光定量PCR快速检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性及重复性进行评价。结果显示:该方法灵敏度高,最低检测限为10 copies/µL;特异性强,与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、猪2型链球菌、副猪嗜血杆菌、猪坏死杆菌、猪细胞内劳森菌和猪丹毒杆菌等病原均无交叉反应;重复性好,批内及批间变异系数均小于2%。采用本方法检测140份临床送检样品,本方法的阳性检出率高于细菌分离鉴定方法。以上结果表明,本方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可为猪源肺炎克雷伯菌病的诊断及防治提供更好的技术支持。

猪源肺炎克雷伯氏菌耐药性及毒力基因分析

为了解猪群中猪源肺炎克雷伯氏菌耐药情况和毒力基因携带状况,2019年采集存栏生猪肛拭子样品125份、宰后生猪肉类样品50份,通过细菌分离培养、药敏试验以及PCR扩增16S rRNA、khe基因、耐药基因和毒力基因等方法对肺炎克雷伯氏菌特性进行分析。结果显示,从125份肛棉拭子样品、50份宰后生猪肉类样品中各分离得到32、4株肺炎克雷伯氏菌;药敏试验结果显示,分离的肺炎克雷伯氏菌对四环素耐药性最高(83.3%),其次是氯霉素(63.9%)。对36株分离菌进行耐药基因和毒力基因检测,发现携带耐药基因tet(A)的达30株、携带floR、mcr-1的分别为23、10株,且有23株菌同时携带tet(A)和floR基因,少部份菌株携带aadA1、blaTEM、blaCTX-M-1、blaOXA、qnrB、aac(6')-Ib-cr;携带毒力基因wabG的达26株、携带uge和fimH的25株、携带kfu的23株、携带aereobactin的7株,且有20株菌同时携带wabG、uge、fimH和kfu基因。结果表明,我国猪群中肺炎克雷伯氏菌检出率可能较高,菌株携带耐药基因及毒力基因较为集中,对部分抗生素耐药性较强。本研究为肺炎克雷伯氏菌的检测、诊断以及合理使用抗生素治疗提供了试验依据,同时也为猪源肺炎克雷伯氏菌防控提供了数据支撑。

猪源性肺炎克雷伯菌的分离鉴定

肺炎克雷伯菌是一种严重威胁人类和经济类动物健康的条件性致病菌,可引发患病动物的多种器官组织病变,严重威胁着畜禽养殖业的发展。笔者采集了新疆阿克苏地区某养殖场中以高热,腹泻,呼吸困难,两耳皮肤发绀为临床特征仔猪的心、肺、淋巴等病料。对病料进行了细菌分离培养,通过菌落形态观察、16S rRNA基因测序对分离得到的菌株进行鉴定,最终获得1株猪源性肺炎克雷伯菌。继而对该菌涂板进行药敏试验,结果显示,该菌株具有较强的耐药性,对氯霉素、红霉素、利奈唑胺、利福平、四环素、复方新诺明、庆大霉素、克林霉素、诺氟沙星、头孢噻吩均耐药。本次试验为猪源性肺炎克雷伯菌的分离鉴定及进一步研究Kpn耐药机制和致病机理奠定了基础。