猪生殖和呼吸综合征病毒B_(13)株ORF7基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

利用单管RT PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒 (PRRSV)分离株B13 株包括ORF7基因的片段 ,并对其序列进行了测定 ,结果PRRSV分离株B13 ORF7基因长度为 384bp ,编码 12 8个氨基酸组成的 15kD蛋白。与已发表的PRRSVLV株、VR 2 332株进行同源性比较 ,发现核苷酸同源性分别为 99 2 %、5 9 4% ;氨基酸同源性分别为98 4%、5 4 7%。表明PRRSV分离株B13 在基因结构上可能与LV株同属于欧洲亚群。同时构建了重组转移载体质粒 pAcGHLT B ORF7,用该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV SVI-G)基因组DNA(baculogoldlinearizedbaculovirusDNA)共转染草地夜蛾 (Spodoptcrafrugiperda ,Sf9)细胞 ,得到重组病毒AcMNPV OCC- GST 6xHis ORF7。在感染了重组病毒的Sf9细胞中检测到分子量为 46kD的ORF7基因的GST融合蛋白表达产物 ,能被猪抗PRRSVB13 株多克隆血清所特异识别。

猪生殖和呼吸综合征的检疫与诊断

猪生殖和呼吸综合征(PRRS)俗称蓝耳病,它以妊娠母猪的流产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍为主,并且基于PRRS病毒所引发的各年龄段仔猪呼吸道疾病。目前,PRRS已经成为规模化养猪场的主要疫病之一,严重时会给地方养猪行业带来巨大经济损失。介绍猪生殖和呼吸综合征的发病状况、发病症状及诊断方法。

猪生殖和呼吸综合征的诊断

猪生殖和呼吸综合征是近年来频发的一种接触性传染病，目前研究表明，它在各种年龄种猪均有感染该病的机会。在临床分析上主要以母猪的生产力降低和小猪的呼吸道系统综合征为主要特征。这种病在小猪中发病率极高，很容易造成仔猪的死亡，为养猪业带来了巨大的损失。因此，对猪生殖和呼吸综合征的诊断工作已成为我国动物疾病研究的重点问题。

猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。

猪PRRSV美国株的结构多肽

美国明尼苏达州大学兽医学院Autista博士对猪生殖和呼吸综合征(PRRS)美国霉株(VR-2332)的结构多肽进行研究。用蔗糖梯度离心法提纯的病毒子,平均密度为1.15g/cm^3。用该毒株做SDSPAGE试验,表明该病毒含有3个主多肽,其分子量为15、19和26—30kDa,分别称之为核衣壳蛋白(N),膜蛋白(M)和囊膜蛋白(E)。用N,N—糖苷酶F消化优势蛋白,仅对E蛋白起作用;

PRRSV对新生仔猪的临床影响

美国W.L.Mengeling等为了确定先天性(母体内)或出生后仔猪早期感染猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV),对新生仔猪的存活及生长发育的影响,而进行了本试验。在试验中,共使用20头初次怀孕母猪,其中的16头为试验组,被分为4个小组(每小组4头)。

PRRS疫苗在妊娠期的免疫效果

美国学者Mengeling等将16头妊娠母猪平均分成4群,通过实验来评价制得的猪生殖和呼吸综合征(PRRS)弱毒疫苗的安全性和免疫原性。1组:在妊娠60天时免疫接种疫苗;2组:在妊娠60天时免疫接种疫苗,妊娠90天时暴露于PRRS中;第4组作对照。结果发现,产前和产后(分娩后15天)的死亡率是1组和4组相似,分别为16.9％(7/44)和14.9％(7/47)。

PRRS病毒对小鼠红细胞的凝集作用

日本JusA等用猪生殖和呼吸综合征(PRRS)病毒的Marc-145细胞培养物,分别在4℃、室温和37℃条件下,与不同动物的红细胞做血凝试验。结果在各种温度下,PRRS病毒只与小鼠红细胞发生血凝反应,而对牛、绵羊、山羊、马、猪、豚鼠、蒙古沙鼠、鹅、鸡的红细胞均无凝集作用。如果将PRRS病毒先用吐温-80处理,再用乙醚处理,其对小鼠红细胞的凝集滴度将比不用吐湿温-80和乙醚处理的PRRS病毒的提高4—8倍。对病毒预处理的最适条件:先用浓度0.06—0.125％(v/v)