猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-la株N基因的分子克隆、序列测定及其比较分析

根据已发表的ＰＲＲＳＶＩＡＦ－ｅｘｐ９１株的核酸序列，设计了一对特异性引物，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了ＰＲＲＳＶＣＨ－ｌａ株的Ｎ基因，经补平和磷酸化后，克隆到ｐＵＣ１８ＳｍａＩ位点上。经电泳分析、酶切和ＰＣＲ鉴定证实后，进行序列测定。序列分析表明ＣＨ－ｌａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株（美洲型）Ｎ基因核苷酸同一性为９３．２％，氨基酸同一性高达９６．７％，而与ＬＶ株（欧洲株）核苷酸同一性为６３％，氨基酸同一性仅为５９％。其推导氨基酸残基分子量为１３．３ｋＤａ。根据ＣＨ－ｌａ株Ｎ基因推导的氨基酸残基缺少欧洲型毒株ＬＶ特有的两个氨基酸片段，表明ＣＨ－１ａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株同源性高于它与ＬＶ株的同源性，而且ＣＨ－１ａ株与鼠乳糖脱氢酶增高症病毒（ＬＤＶ）在进化关系上比ＬＶ株与ＬＤＶ更密切。ＣＨ－１ａ株Ｎ基因推导的氨基酸残基Ｎ－端１／２段约２６％是由Ａｒｇ、Ｌｙｓ和Ｈｉｓ这３种氨基酸组成的，其疏水性侧像图与ＬＶ株和ＶＲ－２３３２株（美洲型）几乎相同，这表明两种基因型的核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）具有一定的保守性。由于Ｎ蛋白是ＰＲＲＳＶ所有结构蛋白中免疫原性比较强的病毒蛋白，是现行血清学试验的抗原基础，因此Ｎ基因的分子克隆为研制ＰＲＲ?

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明，ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应；分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应；而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明，我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验，结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。

中国华东地区猪生殖-呼吸道综合征病毒(S_1株)ORF_(5～7)基因特征研究

本研究对我国华东地区猪生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）分离株Ｓ１主要结构蛋白基因（ＯＲＦ５～７）进行了ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ测序分析。结果表明，长度为１５２０ｂｐＤＮＡ序列含有３个阅读框ＯＲＦｓ，即ＯＲＦ５、ＯＲＦ６和ＯＲＦ７，ＯＲＦ５和ＯＲＦ６及ＯＲＦ６和ＯＲＦ７间有部分碱基重叠，且与欧洲型和美洲型ＰＲＲＳＶ相似。ＯＲＦｓ推导的氨基酸序列与美国ＶＲ２３３２和欧洲ＬＶ毒株同源性分析为９９％～１００％和５９％～７８％。ＯＲＦｓ预测的蛋白质分子量、等电点、糖基化位点、亲水性分布图及跨膜螺旋区与ＶＲ２３３２毒株相似。

猪生殖-呼吸道综合征病毒的分子生物学研究现状

:猪生殖 -呼吸道综合征病毒 (PRRSV)是近几年发现的一种新病毒 ,就该病毒的生物学特性、基因组结构、病毒蛋白。

猪生殖—呼吸道综合征病毒(PRRSV)E蛋白基因真核表达质粒的构建

新近发现的ＰＲＲＳＶ是单股ＲＮＡ病毒，属于不久前成立的动脉炎病毒科。其基因组包括８个开放阅读框架（ＯＲＦ），其中ＯＲＦ５编码糖基化的囊膜（Ｅ）蛋白，是病毒的主要免疫保护性抗原之一。为了研制ＰＲＲＳ基因疫苗，扩增并克隆了ＰＲＲＳＶ－１ａ株ＯＲＦ５，并将其亚克隆至真核表达载体ｐＣＲ３－Ｕｎｉ的ＣＭＶ启动子下游，构建成真核表达质粒。

猪生殖道及呼吸道综合症

本文旨在提供有关猪生殖道和呼吸道综合症方面的综合资料。材料引自1991年11月1日召开的英国兽医协会托拉斯专题讨论会的会议记录。1987年美国首次报道了猪生殖道及呼吸道综合症(PRRS)或猪蓝耳病,随后相继<正>蔓延到加拿大及欧共体各国。在英国本病大多发生于集约化猪场。病原学现已查明本病最可能的病原是荷兰中央兽医研究所分离的莱利斯塔德病毒(Lelystad virus)。大多数康复的母猪含有这种病毒抗体。实验证明给母猪滴鼻可复制本病症状。本病毒是一种有囊膜的RNA病毒,属于对脂溶剂敏感的动脉病毒群。病毒只能用猪肺泡巨噬细胞培养。据报道,美国正在使用一种新的更为稳定的培养系统。

对猪生殖道呼吸道综合征的若干见解

现在还没有较好的办法来显示产房中猪生殖道呼吸道综合征许多方面的特点.一排隔离室内饲养着妊娠期感染了该病病毒各种分离株的后备母猪.然后,这些母猪中有的产下了表面正常的仔猪,有些产下的活仔迅速消瘦,又或者产下整窝死仔.其中有一头不食料达一周之久的母猪却试图哺育其仔猪.另一头母猪则被怀疑其子宫内怀有死胎.这些隔离室位于美国国家动物疾病中心,由美国农业部农业研究服务站负责管理.笔者随同美国国家动物疾病中心的猪病毒研究室主任Bill Mengeling博士和兽医官Lelly Lager博士在那里进行了参观.Mengeling博士认为,生殖道呼吸道综合征病毒有很大的变异性,不同毒株间毒力的差异似乎比那些已研究了多年的其它病毒大得多.

猪生殖—呼吸综合征病毒感染禽类的研究

本文报道用ＰＲＲＳＶ感染禽的三个试验及评价禽源ＰＲＲＳＶ对猪的传染性和传播性的第４个试验。试验１较番鸭，野鸭，珠鸡和考尼价杂交鸡对ＰＲＲＳＶ的易感性，禽类通过饮水感染ＰＲＲＳＶ，以野鸭对ＰＲＲＳＶ最易感；试验２用野鸭作试验以证实和扩大试验１的观察结果，从感染后至２５天收集的野鸭粪便中分离到病毒，感染后３８天迫杀的２０只野鸭中有８只肠内容物有病毒，感染后０－１５天的野鸭无肉眼和显微病变；

当前我省常见猪病的诊治要点

猪圆环病毒感染,猪生殖-呼吸道综合症和猪链球菌病是近年来我省猪群中经常发生的几 种疾病,本文对这三种疾病的临床症状,病理解剖学变化和防治措施进行了介绍。

PRRSV核衣壳蛋白基因在杆状病毒中的表达

根据已发表的猪生殖 -呼吸道综合征病毒 ( PRRSV) CH-1 a分离株核衣壳 ( N)蛋白基因核苷酸序列和杆状病毒转移载体 p Blue-Bac-His B多角体蛋白阅读框架 ,设计合成了 1对特异性引物 P7S1 /P7R1。应用PCR对重组质粒 p UC1 8-ORF7扩增 ,获得了 CH-1 a株 N基因的片段。经 Hind 和 Bgl 双酶切 ,将其定向克隆到同样双酶切的 p Blue-Bac-His B的 PH启动子下游 ,获得转移载体 p Blue-Bac-His B-ORF7。将转移载体p Blue-Bac His B-ORF7与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒 ( Ac MNPV,简称杆状病毒 )线性化 DNA ( Bac-N-Blue TMDNA)共转染 Sf9细胞 ,经过蓝斑筛选和蚀斑纯化 ,获得重组病毒 r Bac7。经用引物 P7S1 /P7R1和杆状病毒多角体蛋白基因通用引物 PCR鉴定 ,证明目的基因已插入到杆状病毒中。将重组病毒接种于对数生长期的 Sf9细胞 ,分别于感染后 2 4、4 8、72、96、1 2 0 h收集感染细胞 ,经 SDS-PAGE和 Western blot分析 ,结果表明 ,细胞接种重组病毒 2 4 h即开始表达重组蛋白 ,至 96h达到峰值 ,占整个细胞蛋白的 8.4 % ,此后开始下降。表达产物为融合蛋白 ,大小约 2 0 0 0 0。将重组病毒感染的 Sf9细胞用抗 PRRSV N蛋白的单克隆抗体SDOW-1 7进行间接免疫荧光试验 。

哈兽研所PRRSV分子生物学研究简况

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)是新发现的猪生殖-呼吸道综合征(PRRS)的病原。PRRSV为最新成立的动脉炎病毒科(Ateriviridae)的成员,系单链正股RNA病毒,其基因组具有8个开放阅读框架(ORF),即LRFla、ORFlb和ORF2-7,分别编码病毒复制酶和结构蛋白。自1996年下半年起,哈兽研所兽医生物技术国家重点实验室仇华吉、童光志对国内分离的第一株PRRSV—CH-1a株开展了分子生物学方面的研究,目前取得一定的进展。