用于检测猪瘟抗体的免疫金标试纸条的研制与应用研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜的检测区,在其下端附着胶体金标记的猪瘟抗原,组成免疫金标试纸条,根据胶体金免疫层析原理,用该试纸条建立检测猪瘟抗体水平的免疫金标检测法。再用本试纸条检测法与Dot-ELISA及间接血凝法对298份猪、鸡、鸭、鹌鹑、兔、鼠、羊血清进行猪瘟抗体检测,结果符合率达100%。试验结果表明,本法与Dot-ELISA及间接血凝法一样特异、敏感和微量,而且检测时间短、直观,结果容易判定,适用于大面积猪瘟抗体监测普查。

胶体金免疫层析试纸条与ELISA检测猪瘟抗体的比对试验

胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体阳性检出率94.69%,ELISA法检测猪瘟抗体合格率95.58%,两者符合率为99.07%;胶体金免疫层析试纸条强阳性率为86.73%,ELISA检测猪瘟抗体阻断率≥60%为89.38%,检测线显色强度与抗体水平呈正相关。

应用猪瘟抗体免疫金标试纸检测猪瘟抗体的比较试验和改进试验

目前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法,DOT—ELISA检测法、单抗ELISA检测法和猪瘟正向间接血凝法。这些方法虽然都具有微量、特异、准确的优点，但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员，一次检测至少需要4h，对于基层兽医站、兽医诊所和养猪场不适用。猪瘟抗体免疫金标试纸的研制成功开创了猪瘟抗体水平检测的新方法，该方法操作简便，不需要任何仪器设备及复杂的样品处理，检测一个样品只需5～10min，操作简便、快速、准确、灵敏度高、直观、结果容易判定，非常适应于基层兽医站和各养猪场使用。基层兽医站和各养猪场（户）可应用猪瘟抗体免疫金标试纸进行猪瘟抗体监测。但金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法，其应用有待于继续研究，针对这种情况，试验对三种检测方法进行了比较研究，并对金标试纸条法进行了改进研究，使金标试纸条法的检测结果与其他方法的符合率达到了无显著差异的水平。

非洲猪瘟病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

为了建立一种快速、准确检测非洲猪瘟病毒（ASFV）的胶体金免疫层析方法,试验以原核表达的ASFV PET-30A-P72蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备血清,以ASFV单克隆抗体杂交瘤细胞株2D3接种至Balb/c小鼠腹腔内制备腹水,采用间接ELISA法分别测定其效价。经protein G抗体纯化柱纯化后获得ASFV的单克隆抗体和多克隆抗体,并分别测定其浓度。选择出最适p H值及最适蛋白用量后,制备胶体金标记的ASFV单克隆抗体。以硝酸纤维素（NC）膜上分别包被的ASFV多克隆抗体和SPA作为检测线和质控线,制备用于检测ASFV的胶体金免疫试纸条。以两种原核表达的ASFV P72蛋白作为抗原对该检测试纸条的特异性、敏感性及稳定性进行验证。结果表明：制备的ASFV多克隆抗体和单克隆抗体的效价较高,分别为1∶51 200和1∶160 000,经纯化后其浓度分别为1.2 mg/m L和1.0 mg/m L;制备胶体金标记的ASFV单克隆抗体所需的最适p H值为8.5,最适标记蛋白用量是48μL;该试纸条可在5~10 min内准确检测出两种抗原,对两种抗原的最低识别量分别为15 ng和21 ng,经测试该试纸条的特异性、敏感性、稳定性表现良好。

O型口蹄疫抗体金标检测试纸条判定标准的确立

本试验旨在迅速、准确检测口蹄疫阴性血清和阳性血清,确立O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准。通过3批次O型口蹄疫抗体金标检测试纸条,对180份猪、牛、羊口蹄疫阴性血清,197份猪、牛O型口蹄疫弱阳性血清,317份猪、牛、羊O型口蹄疫阳性血清,223份牛Asia 1、A型口蹄疫阳性血清,600份田间血清样品进行检测,同时用O型口蹄疫液相阻断ELISA和O型口蹄疫正向间接血凝2种方法检测相同的血清样品。对3种方法检测的结果进行分析,并且将试纸条的检测线和质控线的显色情况与O型口蹄疫液相阻断ELISA的抗体滴度相比较。确立了试纸条的诊断标准:试纸条抗体滴度1∶2-为口蹄疫抗体阴性;试纸条抗体滴度1∶8+为O型口蹄疫阳性血清。根据试纸条的显色结果与液相阻断ELISA的结果的关系,绘制了比色卡。试纸条的判定标准检测血清结果与液相阻断ELISA和正向间接血凝结果分别进行统计学分析,试纸条与液相阻断ELISA和正向间接血凝相关性分别为y=1.142x+0.7421,y=1.1845x+0.8623;相关系数(r)分别为0.9221和0.9033。结果显示,O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准的确立和比色卡的绘制,实现半定量分析,更加迅速、准确,适于实验室、基层兽医站和养殖场使用。

猪繁殖——呼吸综合症(PRRS)抗体免疫金标快速检测试纸的研制与应用

应用酶联免疫吸附原理和胶体金层析技术,在玻璃纤维和硝酸纤维素膜的检测线和对照线上分别喷上胶体金PRRSV,PRRSV和兔抗PRRS抗体,从而制作成猪PRRS抗体免疫金标试纸,用该试纸与PRRS-ELISA试剂盒分别对30份猪血清及血液样品进行抗体水平检测,结果完全一致。说明金标试纸法是一种微量、特异、简便和结果容易判定的新的检测方法,非常适用于基层兽医站和猪场,特别是进行现场检测和开展大规模疫情普查时使用。

口蹄疫抗体免疫金标快速检测试纸法的建立

应用免疫学原理与胶体金层析技术,采用双抗原夹心ELISA建立了检测口蹄疫(O型)抗体水平的“口蹄疫抗体(O型)免疫胶体金快速检测试纸法”。应用该法与“口蹄疫正向间接血凝抗原法”对300份猪、鸡、鸭、牛、羊等血液或血清进行口蹄疫抗体水平检测试验,符合率达100%。试验结果显示,该法与间接血凝法一样,具有微量、特异、准确等优点,且操作简易,不需要任何仪器,检测时间短,结果直观,容易判定,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积口蹄疫抗体普查。

猪伪狂犬病抗体免疫金标快速检测试纸法

应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合 ,采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的“猪伪狂犬病抗体免疫胶体金快速检测试纸法” ,用该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒 ,同时对 1 6份猪血液或血清进行抗体水平检测 ,符合率达 1 0 0 %。同时使用金标法对 1 0 0份猪血液和对应血清进行检测 ,结果也相同。试验结果显示 ,金标法与ELISA一样 ,具有微量、特异、准确等优点 ,且操作简易 ,而金标法不需要任何仪器 ,检测时间短 ,结果直观 ,容易判定 ,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积猪伪狂犬病抗体普查。

畜禽疫病抗体免疫金标检测试纸研制成功

猪瘟、蓝耳病、伪狂犬、口蹄疫、禽流感、新城疫等仍是严重危害猪禽的最重要疾病.疫苗的免疫接种,不仅使急性烈性典型性疾病发病率和死亡率大大降低,而且使疾病的流行形式趋于缓和,由原来的大面积暴发性流行变为周期性、区域性散发流行,临床上多以非典型症状出现,给疾病的初步确诊造成了很大的困难.究其原因,可能有二个方面,一是疫苗的质量,二是机体母源抗体状况及是否存在免疫抑制病毒等.

应用免疫金标试纸开展种猪群猪瘟净化

猪瘟是一种急性、烈性、毁灭性、病毒性传染病。近年来随着免疫抑制性病毒病的流行，尤其是圆环病毒、蓝耳病毒对猪群造成很大的威胁，病毒抑制了猪机体的免疫器官功能，造成猪只注射了猪瘟疫苗产生不了对应性的免疫抗体，造成猪瘟的暴发和流行。从最近厦门地区许多猪场求诊的病例分析，大多数猪群都因感染了圆环病毒、蓝耳病毒，也最终暴发猪瘟死亡，损失严重。但是，如果猪群有较高水平的猪瘟抗体，即便感染了蓝耳病毒、圆环病毒，其死亡率也会大大降低。

免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对猪瘟免疫效果的评估对比

当前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法、猪瘟正向间接血凝法以及免疫金标试纸检测法。前两种方法虽然都具有微量、特异、准确的优点,但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员,且检测时间较长。而金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法,检测一个样品只需8～15min,操作简便、快速、直观、结果容易判定,但其应用检测结果的准确性尚待求证。鉴于这种情况,开展了免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验两种检测方法的比较研究[1]。结果表明,免疫金标试纸检测与猪瘟正向间接血凝试验的结果基本符合,试验结果可靠。

淋病、梅毒和尖锐湿疣三联金标试纸条的制备及其应用

目的:建立能同时检测梅毒螺旋体(TP)血清抗体、淋病奈瑟菌(NG)PIA-PIB及人乳头瘤病毒(HPV)L1抗原的三联金标试纸条并进行临床标本检测。方法:梅毒螺旋体tpN15-17-47和淋病奈瑟菌pIA-pIB融合基因、人乳头瘤病毒L1基因原核表达系统在IPTG诱导下表达目的重组蛋白抗原rTpN15-17-47、rPIA-PIB和rL1。采用SDS-PAGE观察表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白。参照文献用常规方法制备能同时检测TP血清抗体、PIA-PIB及HPV L1抗原的三联金标试纸条。分别建立TpN15-17-47-IgG-ELISA、PIA-PIB-ELISA和L1-ELISA作为对照。采用三联金标试纸条和上述ELISAs检测120例梅毒病人血清、65例淋病病人脓性分泌物、45例尖锐湿疣组织标本。结果:三联金标试纸条与TpN15-17-47-IgG-ELISA检测梅毒血清标本的阳性率分别为91.7%和96.6%。三联金标试纸条与PIA-PIB-ELISA检测淋病脓性分泌物标本的阳性率分别为75.4%和86.2%。三联金标试纸条与L1-ELISA检测尖锐湿疣组织标本的阳性率分别为71.1%和82.2%。所有ELISAs检测抗体或抗原的阳性率虽均高于三联金标试纸条,但无显著性差异(χ21=1.55-2.73,P>0.05)。三联金标试纸条与三种ELISAs对健康人血清、非淋病脓性分泌物和包皮组织标本检测结果均为阴性。结论:本研究成功地建立了快速、敏感和特异的能同时检测TP血清抗体、NG PIA-PIB和HPV L1抗原的三联金标试纸条。

猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用

为探究猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用效果,对181份未免疫猪瘟疫苗、71份已免疫猪瘟疫苗的临床猪血清,采用本研究试纸条和北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒分别进行抗体检测,对4头存在母源抗体的不同免疫时间仔猪血清、不同阶段的猪血清,采用本研究试纸条进行抗体检测,并对检测结果进行分析统计。结果显示,本研究试纸条与北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒的阴性符合率为100%,阳性符合率为95.77%,经Kappa检验两者一致性良好;初生仔猪首免后,猪瘟抗体滴度有所下降,30 d后加强免疫,抗体滴度逐渐升高,试纸条检测结果与猪瘟抗体衰减变化过程呈正相关;不同阶段猪群的猪瘟抗体阳性率均为100%,抗体平均值较高,离散度较整齐,与规模化养猪场合理免疫程序相吻合。综合表明,本试纸条的临床应用效果较好,可用于实时监控猪群的猪瘟抗体变化,适用于基层规模化猪场的猪瘟抗体快速检测。

免疫层析检测试纸条法在现场初筛乙肝表面抗体中的应用

1目的乙型肝炎是病毒性肝炎中传播最广、对人类健康危害极大的传染病,特别是对学龄前儿童的身体健康造成了极大的威胁。为了解中卫市镇罗镇学龄前儿童乙肝疫苗接种免疫学效果,为采取措施提供有力依据,我院于2010年5月份开始对全镇的学龄前儿童做乙肝表面抗原和乙肝表面抗体普查。目的在于对乙肝表面抗原、

免疫金标试纸法与正向间接血凝试验检测猪口蹄疫免疫效果探讨

当前国内检测猪口蹄疫抗体水平的方法有ELISA法、猪口蹄疫正向间接血凝法和免疫金标试纸法等。前两种方法虽然都具有微量、特异、准确的优点,但需要比较完备的试验仪器和经验丰富的技术人员,且检测时间较长。而免疫金标试纸检测法是新开发的一种全新的猪口蹄疫抗体检测方法,检测一个样品只需8～15min,操作简便、快速、直观,结果容易判定,但其检测结果的准确性尚待验证。