密码子优化提高猪IL-7在HEK293T细胞表达的研究

为提高重组猪白细胞介素-7(pIL-7)在人胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达,依据人偏爱的密码子对pIL-7基因进行了优化修饰,然后用pcDNA3.1A质粒构建其与Myc/His-标签融合的真核表达载体。将此表达载体和过去构建的野生型pIL-7表达载体分别转染HEK293T细胞进行表达,利用镍-琼脂糖凝胶颗粒从培养基中纯化表达的重组pIL-7,比较二者的表达水平。结果显示,密码子优化后pIL-7基因在HEK293T细胞中的表达水平为(45±3.2)μg/T25细胞瓶,比野生型pIL-7基因的表达水平(21±1.8)μg/T25细胞瓶,提高了2倍多,可见密码子优化可明显提高重组pIL-7在HEK293T细胞中的表达。这为猪IL-7的生物学功能的研究提供了必要条件。

重组猪IL-7在真核细胞的分泌表达及生物活性分析

为了解猪IL-7(pIL-7)在防治猪免疫抑制性传染病及疫苗生物佐剂中的作用,通过RT-PCR方法从猪脾脏中扩增出含有自身信号肽序列的pIL-7 cDNA基因,将其克隆到pcDNA3.1A表达载体上,构建出羧基端与Myc/His融合的pIL-7基因真核表达载体pcDNA3.1A-pIL-7/MH。由磷酸钙介导将pcDNA3.1A-pIL-7/MH质粒转染人类胚胎肾细胞293T(HEK293T)使其进行瞬时表达,以Western-blot检测构建的pIL-7基因表达载体是否可介导重组pIL-7在真核细胞中进行分泌型表达。然后利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化表达的重组pIL-7,并通过淋巴细胞增殖试验检测其的生物活性。结果表明,扩增的pIL-7基因序列与GenBank序列完全一致;构建的表达载体可介导重组pIL-7在真核细胞HEK293T中进行分泌型表达。表达的重组pIL-7对猪脾淋巴细胞有明显的促增殖效应。由此可见,利用真核细胞表达的重组pIL-7具有生物活性。