猪矿化病毒样颗粒疫苗在口蹄疫防控中的新型应用

口蹄疫作为一种高度传染性病毒性疾病,主要感染偶蹄类动物,如牛、羊和猪等,对养殖业造成严重影响。疫苗是口蹄疫防控的重要手段之一,近年来研究表明,猪矿化病毒样颗粒疫苗在口蹄疫防控中展现出了新的应用前景。本文就该疫苗的基本特点、应用情况、免疫效果、安全性评估以及在口蹄疫防控中的作用等方面进行综述,旨在为猪矿化病毒样颗粒疫苗在口蹄疫防控中的更广泛应用提供参考。

猪口蹄疫O、A二价矿化病毒样颗粒疫苗的制备工艺及未来发展

猪口蹄疫是一种高度接触传播的猪类疾病,其对猪类养殖业造成了严重的经济损失。矿化病毒样颗粒疫苗作为一种新型疫苗,对猪口蹄疫的预防具有重要意义。本文对猪口蹄疫O、A二价矿化病毒样颗粒疫苗的制备工艺及未来发展进行了概述。

生物矿化的口蹄疫病毒样颗粒疫苗的免疫原性评价

生物矿化技术可以增强口蹄疫(foot-and-mouth,FMD)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的耐热性,但并无试验数据支撑矿化FMD VLPs用于临床的可行性。本研究旨在评价矿化FMD VLPs疫苗在牛和猪上的免疫原性。用VLPs和矿化VLPs免疫猪,采用液相阻断ELISA(LPBE)检测猪血清中的特异性抗体滴度,并经酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测免疫猪外周血淋巴细胞(PBLs)经体外刺激后分泌的特异性IFN-γ。用矿化A型VLPs、矿化O型VLPs、矿化的A型和O型二价VLPs分别免疫牛,采用LPBE、中和试验、夹心ELISA检测血清中的特异性抗体、中和抗体以及IL-4和IFN-γ的含量。结果显示,VLPs与矿化VLPs免疫猪的血清抗体水平无显著差异,相对于VLPs,矿化VLPs免疫猪的PBLs分泌的IFN-γ水平高于VLPs免疫猪(P<0.05);3种疫苗免疫牛血清中IL-4和IFN-γ水平均高于PBS组,矿化二价疫苗与相应的矿化单价疫苗免疫牛的血清特异性抗体和中和抗体效价均无显著差异。综上所述,矿化VLPs对牛和猪均具有良好的免疫原性,不同血清型的矿化VLPs可以联合使用并且矿化壳层可增强VLPs诱导细胞免疫应答的能力。

病毒样颗粒疫苗在猪病防控中的应用

一些猪病如猪瘟、猪圆环病毒病等,其病毒可能会通过肉类食品传播给人类,对人体健康造成威胁,且危害公共卫生安全。因此,猪病防控在养猪生产中占有至关重要的地位,不仅关系到养殖户的经济效益、我国肉类供应稳定,还关系着国家食品安全与公共健康。病毒样颗粒(VLPs)疫苗具有安全性高、免疫原性好等优势,是目前研究预防动物病毒性疾病的疫苗的最热关注点。文章结合实践经验,对病毒样颗粒及其表达系统进行简要介绍,并对病毒样颗粒疫苗在多种猪病防控中的应用情况进行综述,包括猪细小病毒病、猪圆环病毒病、猪传染性胃肠炎、猪乙型脑炎、猪瘟等,旨在为病毒样颗粒疫苗在猪病防控中的推广与使用提供更多依据。

病毒样颗粒疫苗及其在猪病防控中的应用研究进展

病毒样颗粒(VLPs)疫苗因其免疫原性好、安全性好,已成为研制安全高效的预防人和动物病毒性疾病的潜在候选疫苗。文章综述了VLPs疫苗在猪病防控中的应用研究进展,以期为兽医科技工作者和广大养殖业主更好的了解和对疾病进行有效的预防和控制提供参考。

3种TLR配体对猪圆环病毒2型病毒样颗粒疫苗佐剂活性的比较

为比较3种TLR配体对猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP)疫苗的佐剂活性,本研究利用重组大肠杆菌表达脑膜炎奈瑟菌Ag473脂蛋白、创伤弧菌FlaB鞭毛蛋白和结核分枝杆菌热应激蛋白70(Hsp70),采用镍亲和柱纯化获得该3种重组蛋白;分别将相同剂量(10μg)3种重组蛋白、ISA206佐剂(100μL)和不完全弗氏佐剂(FIA)(100μL)与PCV2 VLP疫苗(50μg)混合,肌肉注射免疫小鼠,初免后14 d加强免疫1次;初免后每周采血分离血清,采用ELISA检测抗原特异抗体;加强免疫后14 d利用PCV2攻毒,攻毒后7 d和14 d采血分离血清,采用荧光定量PCR检测病毒DNA拷贝数;攻毒后14 d迫杀小鼠,制备并培养其脾细胞,经PCV2 VLP疫苗刺激后,采用试剂盒检测细胞因子的表达。SDS-PAGE分析结果显示,3种TLR配体在重组大肠杆菌中均获得正确表达,纯化重组蛋白的纯度大于90%。从初免14 d起,3个分子佐剂组中Ag473佐剂组的PCV2抗体水平最高,但低于ISA206佐剂组却高于FIA组,差异不显著(p>0.05)。在PCV2攻毒前,3个分子佐剂组中Ag473佐剂组的小鼠脾细胞TNF-α和IFN-γ表达水平最高,但低于ISA206佐剂组却高于FIA组,差异显著(p<0.05);Hsp70佐剂组的IL-4表达水平最高,Ag473佐剂组次之,但均高于ISA206和FIA组。在攻毒后第7 d,5个免疫组小鼠的病毒拷贝数均较对照组显著下降(p<0.05),但免疫组间差异不显著;在攻毒后第14 d,5个免疫组小鼠的病毒拷贝数进一步下降,免疫组间差异不显著。研究结果表明在测试的3种分子佐剂中,Ag473脂蛋白具有较强的总体免疫佐剂活性,有望进一步开发为PCV2等病毒的亚单位疫苗佐剂。

病毒样颗粒疫苗在猪病防控中的应用研究进展

病毒样颗粒(VLPs)疫苗因其免疫原性好、安全性好,已成为研制安全高效的预防人和动物病毒性疾病的潜在候选疫苗。通过综述VLPs疫苗在猪病防控中的应用研究进展,以期为兽医科技工作者和广大养殖业主更好地了解VLPs疫苗提供参考。

猪病毒病病毒样颗粒疫苗研究进展

病毒样颗粒(VLPs)是由病毒的一种或多种结构蛋白在异源系统内重组表达,并自动装配成的一种不含病毒核酸的空心颗粒。与传统疫苗相比,VLPs具有相当的免疫原性和更好的安全性而成为一种理想的疫苗形式,是最有发展潜力的新型基因工程疫苗。本文就VLPs疫苗在猪病毒病防治应用方面的研究进行综述,以期为猪病毒病的防控工作提供新的思路。

猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及其在疫苗研制中的应用

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原体。病毒衣壳唯一的结构蛋白Cap是PCV2亚单位疫苗的主要靶点。本研究旨在利用重组伪狂犬病病毒(PRV)gE基因缺失株来表达PCV2的Cap,该缺失株在PRV标记疫苗中被广泛使用。试验使用同源重组技术构建了重组PRV病毒株gE(-)/PCV2cap(+)PRV,其中PRV病毒株gE基因上游被PCV2的Cap基因替代。通过免疫荧光技术和Western blotting方法证实重组病毒复制过程中可表达Cap蛋白。电子显微镜结果显示,所表达的Cap蛋白能组装成病毒样颗粒(VLP)。用纯化的VLPs免疫小鼠和豚鼠可产生针对PCV2Cap的特异性免疫应答。这些结果提供了一种基于VLP构建PCV2亚单位疫苗的方法。

猪塞内卡谷病毒和圆环病毒2型嵌合病毒样颗粒疫苗的制备与抗体检测

为了防控猪场塞内卡谷病毒(SVV)和圆环病毒2型(PCV2)的混合感染,本试验建立了一种猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗的制备方法并进行抗体检测。试验将猪SVV P 1基因部分VP 3序列替换为PCV2 ORF 2基因C端部分多肽序列,利用杆状病毒表达系统获得表达猪SVV、PCV2嵌合重组蛋白的重组杆状病毒,将病毒培养物纯化,经蛋白检测及电镜观察确定成功构建猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒(大小约30 nm)。结果表明,制备的猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗可使试验猪同时产生针对猪SVV和PCV2的特异性抗体,充分显示出其作为一种针对猪场SVV和PCV2合并感染的安全有效疫苗的前景。

猪圆环病毒2型病毒样颗粒研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病的主要病原体,给养殖业造成重大经济损失。一直以来,对于PCV2的防控主要通过疫苗接种。目前使用的疫苗可大致分为全病毒灭活疫苗、嵌合病毒疫苗、重组亚单位疫苗三大类。病毒样颗粒(VLPs)作为一种伪病毒,以其高免疫原性、高安全性成为新型疫苗的研究热点。本文综述了VLPs在国内外的最新研究动态、研究和开发的意义,提出了VLPs作为一种基因转载工具,其研究为疫苗研发开拓了新的方向。

猪圆环病毒2b型表位嵌合病毒样颗粒在E.coli中的制备及鉴定

为了研究一种更为高效、廉价的猪圆环病毒2型(PCV2)亚单位疫苗,针对PCV2b型Cap基因核酸序列进行优化,将其编码中和表位226LKDPPLNP233的基因序列连接于Cap基因C端(Capc),并插入PE-Sumo载体,借助大肠杆菌表达系统对Capc蛋白进行表达;利用SDS-PAGE、Western blot、动态光散射和透射电镜观察等手段,对纯化后的目的蛋白活性及其形成的结构进行初步鉴定。结果显示,嵌合Capc基因片段成功插入PE-Sumo载体,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中;Sumo-Capc重组蛋白在26℃下诱导12 h能够以可溶形式大量表达;经纯化的Capc蛋白能够与PCV2单克隆抗体特异结合,并能够自组装形成直径约为18 nm的病毒样颗粒。综上,成功构建了能够表达PCV2b型中和表位嵌合Cap的大肠杆菌表达系统,纯化得到的Capc蛋白具有良好的免疫反应性,且能够自组装成病毒样颗粒。

猪细小病毒病毒样颗粒的制备及其免疫评价

为了研制猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗,结合大肠杆菌密码子偏好性,经密码子优化,合成猪细小病毒VP2蛋白编码区序列,并将其插入原核表达载体pET28a中,随后转化BL21(DE3)感受态细胞,再转入伴侣蛋白质粒pTf16构建共表达载体,优化诱导表达条件,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果表明,在L-阿拉伯糖质量浓度为2 mg/mL、IPTG浓度为0.1 mmol/L、温度为30℃、诱导12 h时重组蛋白VP2可溶性表达量最高,经硫酸铵沉淀和Ni-NTA亲和层析纯化获得纯度约90%的VP2蛋白,体外装配可形成直径约20 nm的具有血凝活性的VLPs。用制备的VLPs免疫昆明鼠并对其进行免疫评价,结果表明,制备的VLPs能有效刺激机体产生高滴度抗体,ELISA效价高达1∶25600。可见,制备的VLPs能刺激机体产生特异性抗体。

中和表位串联的PCV2b病毒样颗粒在昆虫细胞中的表达与鉴定

为了研究一种高效的预防猪圆环病毒2b亚型(PCV2b)感染的亚单位疫苗,针对其主要免疫原Cap蛋白的基因进行分析,将Cap蛋白上重要中和表位226LKDPPLNP233以重复串联的方式连接于cap基因C端(capE2),并构建于pFastBacTMI载体上,借助昆虫杆状病毒表达系统进行表达,利用SDS-PAGE、Western blot分析和动态光散射及透射电镜观察等对重组蛋白CapE2进行鉴定。将纯化的CapE2蛋白免疫小鼠,同时以未连接中和表位的Cap蛋白、PCV2亚单位疫苗和PBS为对照,收集免疫血清分析目的重组蛋白的免疫原性以及连接中和表位对Cap蛋白免疫原性的影响。结果表明,Cap及CapE2蛋白成功在sf21细胞内表达;纯化后的目的蛋白能够有效地与PCV2单克隆抗体产生特异性反应,并且可以在体外自组装形成均一的、直径约17 nm的病毒样颗粒;血清抗体检测结果显示,在第2次免疫后,CapE2免疫组抗体水平迅速提高,并在3免之后显著高于其他免疫组;中和抗体测定结果表明,Cap及CapE2组血清抗体效价均显著高于疫苗免疫对照组,且CapE2免疫组血清的中和效价可达1:29。通过昆虫杆状病毒表达系统表达的连接2个中和表位的Cap蛋白,能自组装形成病毒样颗粒,并且具有较好的免疫原性,为PCV2感染的预防提供了新的疫苗候选。

猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗的安全性与生产性能评价

为评估猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗(圆柯欣)在临床上的单次免疫效果,本试验在6个养殖场选取14~19日龄仔猪20770头,分为组1圆柯欣免疫组(亚单位疫苗)和组2圆健免疫组(全病毒灭活疫苗)进行免疫。圆柯欣为单次免疫,圆健为首免后两周进行二次免疫,并在每次免疫之后记录试验猪的免疫应激情况、死淘率和日增重(保育猪和育肥猪)。结果显示:圆柯欣单次免疫的应激率为0.0073%,低于全病毒灭活疫苗免疫组(0.212%),安全性良好;死淘率为2.12%,低于全病毒灭活疫苗免疫组(3.31%);日增重在保育猪和育肥猪中较全病毒灭活疫苗组分别增加25克和17克,经济效益明显。以上研究结果表明,圆柯欣的免疫可为生猪养殖的健康发展提供有力保障。

猪乙型脑炎疫苗研究进展

猪乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种经蚊虫传播的人畜共患病,且是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病。猪是JEV的重要储存宿主和扩增宿主,同时也是乙型脑炎的主要传染源,可引起母猪繁殖障碍和公猪睾丸炎。人是JEV的终末宿主,特别是儿童,感染发病后,死亡率可达25%。目前,仍无有效药物治疗乙型脑炎感染,而其流行区域的扩大及其优势基因型的改变为JEV防控策略带来了新的挑战。近年来,随着基因工程和蛋白质工程的发展,以及对病毒分子结构和功能的深入研究,一些新技术新手段被应用到JEV疫苗研发中,基因工程亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、嵌合病毒减毒活疫苗、多表位疫苗、DNA疫苗等应运而生。在疫苗制备过程中,培养工艺的优化、病毒抗原的纯化、新型佐剂和耐热保护剂的应用等生产工艺的提升策略,为保障JEV疫苗的质量提供了新方向。文章简述了猪JEV疫苗的使用现状及研发进展,旨在为研制更安全、有效的猪JEV疫苗提供参考依据。

应用高效体积排阻色谱偶联多角度激光散射鉴定猪圆环病毒2型灭活疫苗及病毒样颗粒疫苗抗原

本文旨在建立基于高效体积排阻色谱(high-performance size-exclusion chromatography,HPSEC)偶联多角度激光散射仪(multi-angle laser light scattering,MALLS)的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)疫苗抗原检测方法。以纯化的PCV2灭活病毒及病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)为参照,对4家生产企业的2种PCV2灭活病毒疫苗(a、b)及VLP疫苗(c、d)破乳后进行HPSEC-MALLS检测及分子量分析;结合PCV2抗原检测卡、Western blotting和透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM),鉴定了特征色谱峰;考察了方法的重复性和检测线性。结果表明,两家企业生产的PCV2灭活病毒疫苗破乳液水相经HPSEC分离,在保留时间约13.3 min处出现抗原特征峰;MALLS计算该色谱峰分子量分别为2.61×10^(6)(±4.34%)Da和2.40×10^(6)(±2.51%)Da。两种VLP疫苗也在13.3 min处出现抗原特征峰,分子量分别为2.09×10^(6)(±2.94%)Da和2.88×10^(6)(±11.85%)Da,接近PCV2的理论分子量;同时在保留时间约11.4 min处也出现色谱峰,经检测分子量为4.37×10^(6)(±0.42%)Da,TEM表征显示为VLP二聚体。取疫苗d和PCV2 VLP纯品进行重复检测,抗原色谱峰面积的RSD(n=3)均小于1.5%,重复性好;将PCV2 VLP纯品梯度稀释检测,VLP及其多聚体的色谱峰面积与浓度均呈良好的线性关系,R2分别为0.999及0.997,能够满足定量及多聚体含量分析。该方法有望成为一种准确、高效的PCV2疫苗的体外评价方法,用于质量评价与提升。

积跬步致千里,创新疫苗显威力——金宇生物股份猪圆环和猪瘟疫苗上市发布会圆满落幕侧记

2016年3月27日,由金宇生物技术股份有限公司（生物股份,股票代码：600201）主办的,以＂创新,引领未来＂为主题的＂金宇猪业高峰论坛暨新产品发布会＂在扬州香格里拉大酒店隆重召开（图1）。全国生猪养殖龙头企业代表、各大经销商和多位国内知名专家、教授、学者和行业代表共计300余人出席了会议。

国内新型生猪疫苗在洛阳诞生

记者从洛阳市有关方面获悉：位于洛阳高新区的普莱柯生物工程股份有限公司主持承担的河南省重大科技专项成果之一——国内首个纯病毒样颗粒猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗（大肠杆菌源）产品，日前成功获批农业部新兽药注册证书，并成功上市。

普莱柯新型猪疫苗上市

位于洛阳高新区的普莱柯生物工程股份有限公司研发的国内首个纯病毒样颗粒猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗（大肠杆菌源）产品日前成功获批农业部新兽药注册证书,并成功上市.