猪精原干细胞超微结构观察与体外冻存条件的优化研究

【目的】检测猪精原干细胞(PSSCs)在分化过程中其内部超微结构及细胞器的变化情况,并且找到适宜PSSCs的冷冻保存条件,为长期保存PSSCs和研究PSSCs的分化机制提供科学依据.【方法】采用两步酶消化法和Percoll不连续密度梯度法获取PSSCs,利用透射电子显微镜(TEM)对PSSCs在体外不同培养时间的超微结构变化进行观测,并且利用台盼蓝染色法和碱性磷酸酶(AP)染色法比较不同浓度的甘油和二甲基亚砜(DMSO)保存液对PSSCs冻存效果的影响.【结果和结论】未分化的PSSCs细胞膜完整平滑,细胞器正常,胞质均匀,无伪足出现,细胞核清晰.而开始分化的PSSCs出现伪足,线粒体数量大幅增加.冻存7 d后,解冻结果表明,PSSCs以V(DMSO)∶V(DMEM/F12)∶V(FBS)∶V(100×双抗)=10∶69∶20∶1为宜.

猪精原干细胞的原子力显微镜检测

从幼年猪的睾丸中获取精原干细胞(SSC),并用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平上分析SSC的形貌、超微结构和机械性能。试验中利用差速贴壁的方法分离纯化获得SSC,40 g/L的多聚甲醛固定SSC,空气中干燥后,在近生理条件下用AFM观察。由差速贴壁方法纯化后,SSC纯化率为91.61%±4.04%。从AFM的形貌图可知,SSC呈规则的圆形,中间隆起,超微结构显示SSC膜表面有一定的颗粒状物质存在,从附带的IP2.1软件可得出细胞的高低差Rp-v、均方根粗糙度Rq、平均粗糙度Ra、平均高度MeantHt等膜表面的几何参数。膜表面的黏弹力、硬度和杨氏模量等细微信息由AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统得出。AFM对细胞的清晰成像和提供的表面定量信息为猪的SSC深入研究提供了可视化依据。