猪细小病毒病研究进展

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎和公猪的精液质量下降。临床采用接种疫苗的方式进行防控,起到了一定的效果。论文对病毒的基因组和蛋白特征、流行病学和疫苗研究进行综述,以期为PPV的基础研究和疫苗开发提供参考。

2021-2022年河南省猪细小病毒1~7型检测与分析

旨在了解猪细小病毒1~7型(PPV1~PPV7)在河南省的流行情况。利用PCR检测了2021-2022年河南省猪场送检的748份样品,并对检测数据进行了分析。结果表明,PPV1/2/3/5/6/7在河南省各地区一年四季广泛流行,而秋、冬季节是感染高峰期,PPV2(16.04%)的感染率最高,PPV7(15.11%)次之。产房仔猪未检出PPV1/3/5,PPV2/6/7在各生长阶段猪群中均有检出,患呼吸系统疾病的保育和育肥猪中PPV各型检出率均较高,尤以PPV2常见。PPV2和PPV7在口腔液、血样、肺脾淋巴结中检出率均较高,血样中较低,PPV3常存在于血清和组织中,PPV5多见于口腔液,PPV6多见于血样。研究证实,除PPV4未检出外,其他6种PPV在河南均存在,并且多与其他病原混合感染,PPV2、PPV7可与多种病原混合感染,PPV7与PCV2混合感染最常见。

猪细小病毒4型单克隆抗体制备及抗原表位鉴定

为了制备猪细小病毒(PPV)4型Cap蛋白单克隆抗体(mAb)并鉴定其抗原表位,试验采用原核表达的Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、血凝抑制(HI)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选阳性克隆,最终获得2E7、4D6和5C9这3株特异性杂交瘤细胞株;然后用mAb对Cap蛋白多肽进行ELISA检测,鉴定分析其抗原表位。结果显示:4D6和5C9 mAb识别表位为线性表位,分别为387RRQDN^(391)和578QRKE^(581),而2E7 mAb识别的表位为构象表位;通过对Cap蛋白3D结构定位分析,387RRQDN^(391)和578QRKE^(581)抗原表位位于蛋白表面,且在PPV4亚型中高度保守,而与猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)和猪博卡病毒(PBoV)基因序列同源性低。本研究为PPV4诊断试剂的开发和新型疫苗的研制提供了参考。

家蚕中猪细小病毒病毒样颗粒的制备

为了防控猪细小病毒(PPV)感染,本试验利用家蚕杆状病毒表达系统制备PPV病毒样颗粒(VLPs)。首先扩增PPV结构蛋白VP2基因,克隆至pFastBacⅠ载体中,构建转移载体pFastBacⅠ-VP2,将转移载体pFastBacⅠ-VP2转化大肠杆菌制备重组杆粒(Bacmid)。将Bacmid转染家蚕卵巢(BmN)细胞,制备重组杆状病毒。利用Western blot鉴定VP2蛋白的表达,采用透射电子显微镜观察PPV VLPs形态,血凝试验检测PPV VLPs的效价。将含有PPV VP2基因的重组杆状病毒注射家蚕幼虫制备PPV VLPs,并对家蚕中PPV VLPs进行鉴定。结果显示:BmN细胞样品和家蚕幼虫样品的Western blot检测,均可见64 kDa处存在VP2目的条带;在透射电子显微镜下可观察到约23 nm的PPV VLPs。BmN细胞中制备的PPV VLPs的血凝效价为1∶2~6,家蚕中制备的PPV VLPs的血凝效价为1∶2~9,其效价高于BmN细胞中制备的PPV VLPs效价。结果表明,本试验在家蚕中成功制备PPV VLPs,且具有良好的生物学活性,为PPV VLPs疫苗的研发提供了数据支持。

猪细小病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

旨在建立一种猪细小病毒(PPV)快速准确PCR检测方法,根据PPV VP2基因的保守序列设计并合成1对特异性引物和1条特异性探针,建立了可检测PPV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。建立的检测方法敏感性高,最低可检测8.76×10^(1)copies/μL的PPV VP2基因标准品;特异性试验结果显示,该方法检测猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应;重复性试验组内与组间变异系数均低于2%,重复性良好。用该方法检测102份临床样本,检出阳性样本16份,阳性检出率为15.69%,将检测出的阳性样本进行PCR扩增并测序,证实检测样品中确实存在PPV。该方法敏感性高、特异性强,适用于PPV的定量检测及猪细小病毒病的流行病学调查。

猪细小病毒血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清的制备与鉴定

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1∶512;阳性血清HI效价达1∶1024;阴性血清HI效价小于1∶8,且特异性均良好。用制备的HI试验抗原与不同PPV疫苗株的阳性血清进行HI试验,同时,用制备的阳性血清、阴性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原进行HI试验。结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,制备的阴性血清与不同疫苗株抗原均呈阴性反应,可用于PPV制品的统一评价。

猪细小病毒7型荧光定量PCR检测方法的建立与应用

猪细小病毒7型(PPV7)是近年来新发现的一种新型PPV。目前,缺乏更为高效的针对PPV7的检测方法,为了建立能够快速检测PPV7的方法,本研究根据PPV7 NS1基因的保守区序列,设计1对特异性引物及TaqMan探针。经过各反应条件的优化,初步建立了一种便捷、灵敏、能够快速准确检测PPV7的荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、稳定性以及与SYBR GreenⅠqPCR检测方法的符合率进行检测与对比。结果显示,该方法除对PPV7的基因组DNA有特异性扩增,对猪伪狂犬病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、日本乙型脑炎病毒及PPV1核酸均无交叉反应,特异性较强。该方法对重组质粒标准品检测限为1.76拷贝/μL,而常规PCR方法检测限为1.76×10^(2)拷贝/μL,表明本研究建立的方法敏感性较高。该方法对不同浓度质粒标准品的组内和组间重复性试验变异系数均小于1.7%,重复性较好。利用本研究建立的qPCR方法和SYBR GreenⅠqPCR方法对采自福建地区的150份样品进行检测,结果显示,两种检测方法的阳性率分别为24.67%(37/150)和6.67%(10/150),二者的总符合率为80.67%(121/150)。表明本研究建立的qPCR方法可以用于临床样品的检测。本研究建立的qPCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性稳定性好,为PPV7的流行病学调查及检测提供了新的技术支撑。

猪细小病毒病的诊断与科学防控

猪细小病毒病是由猪细小病毒感染引起的猪的一种繁殖障碍类传染病。该病在我国很多猪场广泛存在,造成大量的妊娠母猪出现流产,产死胎和木乃伊胎,给养猪业带来了严重危害。为使广大养殖户能够更加全面地掌握猪细小病毒病的流行趋势,掌握该病科学的诊断和防治方法。本文对最近几年来我国猪场细小病毒病的病原学、流行病学、临床症状、诊断方法和防治策略等方面进行了总结,旨在为兽医诊断和防治该病提供参考。

猪细小病毒病防控

生猪在感染猪细小病毒后,会出现生殖方面的障碍,降低养殖场内部繁育成效的同时,还会诱发猪渗出性皮炎。仔猪感染后易引起多系统衰弱综合征,猪细小病毒的传播途径较多,母体多无明显病变,前期不易发现,综合防控难度相对较高。本文第一部分阐述了猪细小病毒病的病原学、流行病学、临床症状、诊断及治疗;第二部分探讨了猪细小病毒病的防控策略,旨在为猪细小病毒病的有效防控提供一些参考措施。

猪细小病毒的诊断及防控

猪细小病毒病是由猪细小病毒感染引起的传染病。该病毒严重影响母猪的繁殖能力,导致胎儿感染,可能造成胎儿死亡、流产、木乃伊胎等严重后果。感染后的仔猪主要表现为肠道炎性腹泻和皮肤炎症。猪细小病毒病具有一定的季节性发病特征,同时可能与其他病毒发生交叉感染。

猪细小病毒病诊断与治疗方法

自1966年发现猪细小病毒病以来,许多国家和地区都出现了此病毒的踪迹。我国最早检测到该病毒的时间为1982年,并在北京、上海、吉林和山西等地对此病毒进行了分离诊断。现阶段,随着生猪养殖业不断扩大规模,同时频繁进行调运和贩卖,使得猪细小病毒呈现出高发态势。生猪一旦感染此病毒,不仅会造成新生仔猪死亡,还会严重影响母猪的生产性能,导致初产母猪流产、死胎和产畸形胎,严重影响生猪养殖业效益。因此,对猪细小病毒病的诊断和防制方法展开研究,具有极为重要的现实意义。1病原猪细小病毒病由猪细小病毒引发,该病毒属于细小病毒科。猪细小病毒通常生长在猪身体中比较旺盛的细胞内,这种病毒能够杀死人工培养的细胞,被杀死的细胞一般表现为不断膨胀,形状为圆球形,破裂后许多碎片黏附在一处,外观呈“破布条状”。猪细小病毒对环境有着较强的抵抗力,对酒精、乙醚的抵抗力也很强,对高温的抵抗力相对较弱。

猪细小病毒病的诊断与防控措施

猪细小病毒病是由猪细小病毒感染引起的一种繁殖障碍性传染病,以母猪流产、死胎、木乃伊胎和畸形胎为主要特征。母猪自身无明显病症,死亡率低,但对母猪繁殖性能有较大影响,容易给养猪场带来较大的经济损失。该文介绍了猪细小病毒病的流行病学特征与临床症状,总结了行之有效的防控措施,以降低猪细小病毒病的发病率,提升猪场的养殖效益。

猪细小病毒病的诊断与治疗进展

猪细小病毒病是一种由猪细小病毒(porcine par-vovirus,PPV)引起的母猪繁殖障碍传染病,该病毒主要影响母猪妊娠前期胎儿发育,表现为妊娠母猪流产、胚胎死亡及木乃伊胎等,母猪本身并无明显临床症状,但会对母猪的生产性能造成严重影响,不利于养殖场生猪养殖效益的提升。相关研究表明,猪细小病毒还能引起猪肠炎、皮炎、病毒血症等疾病,由此可以看出。

猪细小病毒病的诊断和防制措施

猪细小病毒病是一种传染性极强的病毒病,可引起仔猪的严重死亡和母猪的繁殖障碍,增加养殖成本,引起经济损失。在全球养猪业中,猪细小病毒病已经造成了持续的损失,需要重视防控。病毒在猪体内繁殖期间,导致猪出现发热、腹泻、呼吸困难等症状。所以,为了控制猪细小病毒病的传播,养殖户需要定期对猪舍进行杀菌消毒,保持环境卫生。对猪群进行有效的检测和隔离。如果发现有病猪,需要立即进行隔离和治疗,确保在短时间内控制病情。本文结合实际工作经验,探讨了猪细小病毒病的诊断与防制措施,希望更好地防控该种疾病的发生流行有一定帮助。

猪细小病毒病的诊断与综合防控

猪细小病毒病是生猪养殖过程中常见繁殖障碍性疾病,此病在国内多个区域都有报道,已经对部分生猪养殖企业造成了严重的经济损失,在一定程度上阻碍了养殖业经济的进一步发展为此,积极学习与引进饲养技术,加快疾病防制策略的优化速度,已经成为养殖户呕待解决的重点工作之一,也是促进未来生猪养殖业健康可持续发展的重要保障。

猪细小病毒S-1A株对细胞的适应性及其培养条件的优化

将猪细小病毒S-1A株在不同的细胞中培养,测定病毒含量,以确定适合猪细小病毒S-1A株增殖的细胞。结果表明:猪细小病毒S-1A株能在猪肾传代细胞系(PK-15)、猪肾原代细胞(PK)、猪睾丸细胞(ST)和仔猪肾细胞(IBRS-2)中生长增殖,不能在幼仓鼠肾细胞系(BHK-21)、绿猴肾细胞(Vero)和鸡胚成纤维细胞(CEF)中增殖;当ST细胞生长至2/3单层时,将猪细小病毒S-1A株种毒液100倍或1000倍稀释后接种ST细胞,37℃培养96~144 h,获得的病毒载量最高。

用ELISA检测猪细小病毒(PPV)血清抗体

采用差速离心、透析、聚乙二醇 (PEG)浓缩方法纯化猪细小病毒 (PPVDK7113)制备抗原。用纯化的PPV抗原包被聚苯乙烯微量反应板 ,建立了检测PPV血清抗体的间接ELISA。抗原最佳包被浓度为6.3μg/ml,被检血清最佳稀释度为1∶200。用建立的ELISA检测山东、东北、广东等地的426份血清 ,结果阳性率为36.2%。与华中农大病毒室提供的猪细小病毒乳胶凝集试验试剂盒相比 ,其结果符合率为98.6 %。通过阻断试验、交叉试验 ,说明本方法在特异性上达到了较为满意的结果 ,且易于操作 ,适用于血清学定性诊断。

猪细小病毒6型ORF 2基因的截短表达及多克隆抗体制备

【目的】原核截短表达猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6,PPV6)ORF 2基因,并制备PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白多克隆抗体,为后续研究该蛋白的生物学功能提供材料。【方法】以PPV6分离毒株基因组为模板,PCR扩增获得ORF 2截短基因片段,将其克隆至原核表达载体pET30a(+)中构建重组质粒pET30a-PPV6-ORF2。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化后重组蛋白。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,采用Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)和间接ELISA鉴定免疫兔血清特异性。【结果】成功构建了pET30a-PPV6-ORF2重组表达载体,原核截短表达了PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白;SDS-PAGE结果显示,重组PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白大小约为40 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,该蛋白可与PPV6阳性猪血清发生特异性结合,具有良好的反应原性;Western blotting间接与ELISA结果显示,纯化后免疫兔血清与PPV6全病毒蛋白发生特异性反应,抗体效价为1∶25600;IFA鉴定结果表明,PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白兔源多克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本研究成功原核截短表达了PPV6 ORF 2基因并制备了兔抗PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白多克隆抗体,为PPV6血清学检测方法的建立和PPV6 VP1蛋白的进一步研究提供了参考。