猪细小病毒病弱毒疫苗的保存期试验

将2批猪细小病毒病弱毒疫苗分别在2—8℃保存11个月、12个月、13个月,-20℃保存22个月、24个月、26个月,进行物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、安全试验及免疫效力试验,探讨不同保存条件和保存期对疫苗的影响。结果表明:物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验均符合《中国兽药典》的要求。安全试验每批次疫苗接种乳鼠全部健活;以10头份/头的剂量接种PPV HI抗体阴性猪,接种后定期采集血样和鼻肛分泌物进行病毒分离,结果均为阴性。疫苗在2—8℃保存至13个月,-20℃保存至26个月TCID_(50)均≥10^(6.25)笛/头份;接种PPV HI抗体阴性豚鼠抗体全部转为阳性;疫苗免疫PPV HI抗体阴性猪,免疫后1个月、7个月分别用PPV强毒攻击获得100%保护。

猪细小病毒N株弱毒疫苗区域试验

用三批PPV-N株弱毒疫苗分别在三个规模化猪场进行了较大范围的区域试验,共免疫后备母猪32930头,观察其安全性和免疫效力。结果表明,三批苗均能使豚鼠产生良好的抗体反应。猪只注苗后食欲、体温均正常,无任何不良临床反应。平均每胎产健活仔10.96头,而死胎仅为0.52头,说明PPV-N株弱毒疫苗是预防猪细小病毒感染安全、有效的弱毒疫苗。

猪细小病毒病冻干疫苗的实验室检测

本文对3批猪细小病毒病冻干疫苗进行实验室检验,结果显示疫苗物理性状良好,无细菌和支原体污染;疫苗接种乳鼠和以10倍的免疫剂量接种怀孕母猪无不良临床反应,母猪不排毒,不产生病毒血症,疫苗的病毒含量均≥105.0;接种豚鼠后21d均产生抗体反应。表明疫苗具有良好的安全性和免疫原性。

猪细小病毒病冻干疫苗的保存期试验

为研究制定猪细小病毒病冻干疫苗的保存期,将3批疫苗分别在4℃保存3、6、9和12个月,在-20℃保存6、12、18和24个月,并进行物理性状、无菌检验、安全检验和效力检验,结果证实疫苗在4℃至少可保存12个月,-20℃至少可保存24个月。

猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗保存期试验

猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗现行规定在2～8℃贮存期为7个月.为了探究该疫苗能否在2～8℃贮存1年仍符合<中华人民共和国兽用生物制品质量标准>中猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗质量标准(以下简称质量标准),本试验将3批猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗在2～8℃贮存至8、10、12、14个月,然后按质量标准抽样做物理性状检验、无菌检验、安全检验和效力检验.结果表明,猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗在2～8℃保存1年后,各项检测均符合质量标准.

不同剂型的猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗比较分析

为了探究猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗水包油包水型与油包水剂型的差异,将研制的油包水剂型疫苗按质量标准做物理性状检验、无菌检验、安全检验和效力检验。结果表明:两者在粘度和免疫效果等方面存在较大差异。

猪细小病毒病灭活疫苗佐剂筛选及配苗乳化工艺研究

为了筛选制备猪细小病毒病灭活疫苗(L株,悬浮培养)的佐剂,用注射用白油和法国赛比克公司生产的MontanideTMISA 206 VG佐剂(简称206佐剂)分别配制灭活疫苗,通过对两种疫苗的配苗乳化工艺、疫苗性状、无菌检验、安全检验、效力检验和免疫期等方面进行比较。结果显示:与注射用白油配制的疫苗相比,使用206佐剂配苗乳化工艺相对简单;制备疫苗剂型为水包油包水型,易注射,吸收良好;局部和全身均无不良反应,安全性良好;免疫后第7天猪细小病毒206佐剂疫苗免疫猪产生HI抗体效价显著高于白油佐剂疫苗,免疫后第60天猪细小病毒206佐剂疫苗免疫猪HI抗体效价达到峰值;免疫期为6个月。综上,确定206佐剂作为制备猪细小病毒病灭活疫苗的佐剂。

猪细小病毒病灭活疫苗纯化浓缩技术研究

为了研究采用中空纤维柱对猪细小病毒液进行浓缩是否可行,同时研究浓缩纯化后的疫苗安全性是否受到影响,采用0.45μm的中空纤维柱去除细胞碎片,然后用100 ku中空纤维浓缩纯化系统对猪细小病毒原液进行20倍浓缩纯化洗滤及重悬(最终相当于2倍浓缩),用病毒原液和2倍浓缩液分别配制疫苗,对两种疫苗的安全检验、效力检验进行比较。结果显示:上述两种疫苗免疫猪后,效力检验结果均符合规定,但2倍浓缩液配制的疫苗安全性明显优于原液制备的疫苗。说明采用中空纤维浓缩纯化系统对猪细小病毒进行浓缩工艺是可行的,且浓缩纯化后疫苗安全性明显提高。

猪细小病毒病灭活疫苗

猪细小病毒病是由细小病毒引起的一种传染病,对养猪业威胁很大,为此,我厂研制出猪细小病毒灭活疫苗。 本品系用猪细小病毒接种胎猪睾丸细胞培养,收获细胞培养物,经灭活后,加入氢氧化铝胶制成。 [性状]本品静置后,上层为淡粉色澄明液体。

IL-2与猪细小病毒VP_2基因双表达载体的构建及免疫原性的研究

将白细胞介素-2基因和猪细小病毒VP2基因主要抗原区克隆至pCI-neo真核表达载体中,构建了pCIneo-IL2-VP2重组质粒,用脂质体将其转染到PK-15细胞中,利用免疫荧光方法检测在体外表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCIneo-IL2-VP2重组质粒、对照组pCI-neo和猪细小病毒活疫苗通过肌肉注射进行免疫,检测免疫小鼠的淋巴细胞转化功能,特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果显示,pCIneo-IL2-VP2在体外能够诱导PK-15细胞表达VP2蛋白,小鼠注射pCIneo-IL2-VP2质粒1周后能够诱导机体产生抗体,4周时达到峰值,与活疫苗对照组产生的抗体滴度、诱导T淋巴细胞增殖和诱导强的细胞毒性基本一致。试验表明,构建的pCIneo-IL2-VP2能够有效诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。

蜂胶黄酮作为PPV灭活疫苗佐剂活性的研究

为研究蜂胶黄酮不同使用方法对豚鼠体液免疫和细胞免疫的影响,选取99只豚鼠用于试验研究,其中24只用于检验PPV疫苗的安全性,其余75只随机分成5组,分别为蜂胶黄酮佐剂PPV疫苗处理组(PFA)、油佐剂(OA) PPV疫苗+口服蜂胶黄酮处理组(OA-PFApo)、油佐剂(OA) PPV疫苗+肌注蜂胶黄酮处理组(OA-PFAim)、油佐剂PPV疫苗处理组(OA)和生理盐水对照组(CK)。结果表明:与油佐剂PPV疫苗组相比,蜂胶黄酮可以提高豚鼠细胞免疫和早期体液免疫; OA-PFAim组豚鼠体液免疫和细胞免疫均显著增强,而OA-PFApo组豚鼠早期体液免疫效果显著增强。综上,蜂胶黄酮可以直接作为一种PPV疫苗佐剂使用。

猪细小病毒病弱毒疫苗免疫效力评价及临床免疫试验

为制定猪细小病毒病弱毒疫苗效力检验的标准,用3批猪细小病毒病弱毒疫苗进行接种猪与接种豚鼠的平行试验;同时进行临床免疫试验。3批疫苗接种豚鼠和猪后定期进行PPVHI抗体检测;猪于免疫后攻毒,并进行病毒分离。免疫母猪在怀孕早期进行强毒攻击,40d扑杀进行病毒分离。用3批疫苗免疫后备母猪统计产仔成绩。结果显示,豚鼠接种后21d、猪接种后7d全部产生抗体反应。免疫攻毒的猪均未从血浆和内脏中分离到病毒,而从对照猪分离到病毒;怀孕母猪强毒攻击后扑杀,胎儿病毒分离均为阴性,而对照猪胎儿病毒分离为阳性;统计数据表明免疫猪的产仔成绩比未免疫猪高,平均每窝多产活仔1.85头,少产死胎木乃伊胎0.65头。结果表明,当免疫豚鼠PPV HI≥64时,免疫猪能抵抗PPV强毒攻击,两者呈正相关;免疫母猪的攻毒试验表明免疫母猪能抵抗PPV经胎盘感染;临床免疫试验证明疫苗具有良好的免疫原性和安全性。

蜂胶对PPV灭活疫苗细胞免疫效果的影响

为了研究蜂胶作为佐剂对猪细小病毒（PPV）灭活疫苗细胞免疫效果的影响,试验将20头25-30日龄健康仔猪随机均分为4组,1-3组分别颈部肌肉注射2 m L蜂胶、铝胶和油佐剂猪细小病毒灭活疫苗,第4组为空白对照组注射2 m L生理盐水,2周后以相同剂量进行第2次免疫。分别于首免后第7,14,35天颈静脉采血5 m L,采用MTT法测定外周血淋巴细胞增殖变化,ELISA法检测淋巴细胞上清液IL-2、IFN-γ（Th1型）和IL-6（Th2型）细胞因子含量。结果表明：蜂胶佐剂可以促进淋巴细胞增殖和提高各细胞因子含量,效果优于油佐剂和铝胶佐剂。说明蜂胶提高细胞免疫的效果较好,可以作为猪细小病毒灭活疫苗佐剂使用。