微聚焦超声作用猪肌肉组织的形态分析

使用离体猪肌肉组织评估微聚焦超声仪器热损伤区域的深度及范围,以及热损伤区域分布的精确性与一致性,同时观测不同治疗头作用下微聚焦超声热损伤区域的形态特征。将新鲜离体猪肌肉组织切割成60mm×40mm×20mm的组织块,分别使用MFUS M4.5、MFUS M3.0、D4.5、D3.0治疗头在标记区域发射超声能量,使用手术刀片沿标记线切开肌肉组织,观察微聚焦超声热损伤区域形态,并测量其距肌肉组织表面的距离。部分离体猪肌肉组织纵切面热损伤区域排列比较整齐,呈一条水平直线,部分猪肌肉组织纵切面热损伤区域排列呈白色圆柱状垂直于组织表面。MFUS M4.5、MFUS M3.0、D4.5、D3.0的焦平面距离分别为4.520±0.596mm、3.216±0.231mm、4.520±0.542mm、3.273±0.176mm。结论:使用离体猪肌肉组织可以清晰地观测微聚焦超声的焦域形态,显示出较好的一致性,微聚焦超声的焦平面距离较预设的距离较为接近,均在参数表中预设焦平面距离范围内。但由于猪肌肉组织的材质特性不能精准的观测完整的焦域形态,因此需进一步探索更合适的材料来进行微聚焦超声的研究。

猪肌肉生长抑制素基因 5′调控区T→A突变与生长性状的关系分析

生长速度是猪育种中选择的主要目标性状之一 ,鉴定影响生长速度的QTL或基因具有重要的实践意义和理论价值。对猪肌肉生长抑制素基因 (myostatin ,MSTN) 5′调控区TA突变与生长性状的关系进行了分析。突变所产生的基因型的判定采用PCR RFLP方法进行。猪生长性状的测定指标包括 6 0日龄体重 (bodyweightat 6 0d ,BW6 0 )、前期平均日增重 (averagedailygainofstageone ,ADG1)、后期平均日增重 (averagedailygainofstagetwo ,ADG2 )和全期平均日增重 (averagedailygainofwholestage ,ADG) ,所采用的记录数分别来自 16 5 ,2 76 ,2 75和 2 75头无亲缘关系个体。采用SAS软件包的GLM程序对MSTN基因型与猪生长性状的关系进行分析。结果表明 ,MSTN基因型对猪BW6 0 ,ADG1和ADG2的效应不显著 (P >0 1) ,对ADG2的效应在剔除基因型与品种的互作效应以后几乎达到显著水平(P =0 0 5 2 2 ) ,突变等位基因的携带者 (基因型为TA)

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定猪肌肉中13种喹诺酮药物残留

建立了超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）同时测定猪肌肉中13种喹诺酮类药物残留的方法.样品用Na2 EDTA-Mcllvaine缓冲溶液及磷酸盐缓冲液超声提取,HLB柱固相萃取,在电喷雾正离子模式下,以多反应监测（MRM）方式采集数据进行定性与定量分析.在5～200 μg/kg浓度范围内线性良好,相关系数均大于0.990;所检测的13种药物在5.0、50.0、100.0 μg/kg 3个浓度水平添加,回收率在64.55％～117.62％之间,日内变异系数小于14.28％,日间变异系数小于12.81％,检测限均为1.0 μg/kg,定量限均为5.0 μg/kg.本方法简便快速、灵敏可靠,适用于猪肌肉中喹诺酮类药物多残留的同时快速定性与定量测定.

气相色谱-质谱法检测猪肌肉中8种性激素的残留

【目的】建立己烯雌酚、甲睾酮、炔诺酮、17α-乙炔雌二醇、雌二醇、6α-甲基-17α-羟基孕酮、苯甲酸雌二醇和乙酸氯地孕酮8种性激素在猪肌肉中残留的气相色谱-质谱(GC-MS)检测和确证方法。【方法】猪肌肉样品经过初提,去脂肪,固相萃取小柱净化,衍生化,最后用GC-MS检测和确证。【结果】此法在浓度2.5～50μg·kg-1保持良好的线性,相关系数大于0.97,在2.5、10、50μg·kg-1的添加水平上,8种性激素各组分的回收率(%)、批内变异系数(%)、批间变异系数(%)的范围分别为:己烯雌酚78.5～148、6.3～12和8.9～10,甲睾酮70.8～109、4.1～11和6.6～7.5,炔诺酮69.8～87.2、4.0～10和6.7～8.8,17α-乙炔雌二醇67.7～120、4.2～12和9.3～10,雌二醇82.8～103、0.4～10和6.8～11,6α-甲基-17α-羟基孕酮70.3～99.2、2.7～9.3和5.9～7.8,苯甲酸雌二醇73.0～104、5.4～12和9.7～12,乙酸氯地孕酮72.9～91.8、3.3～9.2和8.0～8.6。检测限和定量限(μg·kg-1)分别为:己烯雌酚0.99和3.30;甲睾酮1.05和3.50;炔诺酮1.19和3.97;17α-乙炔雌二醇0.94和3.13;雌二醇1.45和4.83;6α-甲基-17α-羟基孕酮1.56和5.20;苯甲酸雌二醇1.92和6.40;乙酸氯地孕酮2.41和8.03。【结论】所建立的检测方法具有简便、准确、灵敏、适用性强及有机溶剂污染小等特点。

碱解增敏同步荧光测猪肌肉及肾中头孢噻呋残留

基于头孢噻呋碱性条件降解产物荧光强度更强,吐温-80能提高其降解产物荧光强度,建立测定猪肌肉及肾中头孢噻呋残留的同步荧光分光光度法。优化了降解条件(加热时间、氢氧化钠浓度与体积),讨论了缓冲溶液、表面活性剂种类及用量对降解产物荧光强度的影响。结果发现:4 m L 2.0 mol/L氢氧化钠溶液,加热150 min,加3 m L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(p H 4.2)和6 m L吐温-80溶液(0.023 3 mol/L),在1 cm荧光比色皿中,于发射波长λem 415 nm^550 nm内,△λ为85 nm条件下扫描测定,440.0 nm处读出荧光强度。应用加乙腈沉淀蛋白的方法对动物性食品进行预处理。在0.625μg/m L^62.5μg/m L范围内,头孢噻呋浓度与降解产物荧光强度线性关系良好,相关系数为0.999 3,检出限为270μg/kg。加标水平在144μg/kg^2 160μg/kg范围内,回收率为85.09%~87.83%,RSD为0.93%~1.54%(n=3)。建立的新方法可用于动物食品中头孢噻呋残留量检测。

猪肌肉组织中碱性磷酸酶的纯化及特性研究

猪肌肉组织中碱性磷酸酶经预冷的正丁醇提取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-52纤维素离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析得到碱性磷酸酶。纯化倍数为57.34,比活力为28.77U/mg。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)分析可得该酶的分子质量为66kDa。该酶催化底物对硝基苯磷酸二钠(p-NPP)的最适pH值为9.7,最适温度为30℃,Mg2+和Ca2+对其有激活作用,Zn2+和EDTA对其有抑制作用。

冷藏期间猪肌肉中肌苷酸沉积规律研究

为研究瘦肉型猪种及其杂交猪肌肉中肌苷酸及其代谢物在4℃冷藏条件下的降解沉积变化,本试验选择引进瘦肉型猪种及其杂交商品猪,采用高效液相色谱技术测定其背最长肌肌苷酸及其代谢产物含量。结果表明,杜洛克猪、长白猪、大约克猪及其三元杂交猪背最长肌中肌苷酸、肌苷和次黄嘌呤的降解沉积规律一致。肌苷酸含量在冷藏第2 d达到最高值,比第1 d增加0.4%~15.32%,然后开始下降;冷藏至第4 d时,肌苷酸含量明显降低,比第2 d时降低23.81%~39.06%;冷藏至第5~6 d时,肌肉中肌苷酸含量持续下降,但降幅减缓,肌苷酸含量保持在1.0 mg/g左右。而肌肉中肌苷和次黄嘌呤含量则随冷藏时间延长呈增长趋势。

不同理论模型下猪肌肉组织的光学特性参数

利用单积分球技术测定了在He Ne激光漫照射和准直照射下猪肌肉组织的反射率和透射率 ,并分别利用Kubelka Munk理论和InverseAdding doubling方法获得了离体猪肌肉组织的光学特性参数。计算表明 ,两组实验结果与应用漫射理论和MonteCarlo方法的部分结论所获得块状猪肌肉组织的光学特性参数基本一致。这种测量技术也适用于人体组织的光学特性参数测量 ,从而可以为确定激光临床应用中的光剂量提供理论依据。

高效液相色谱法测定猪肌肉组织中磺胺类药物的研究

目的:为了解动物性食品中兽药残留水平,探讨其污染来源,评价其膳食安全性,因此建立猪肌肉组织中磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉残留量的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法:经处理过的样品用乙腈提取两次,将乙腈过无水硫酸钠层后挥干乙腈,正己烷洗涤净化,经过净化后进行高效液相色谱仪测定(C18柱),本方法以甲醇、水为流动相梯度洗脱,柱温35℃,在波长275 nm处测定。结果:在3个加标水平进行加标回收实验,回收率磺胺嘧啶(SD)为81.7%～94.1%,磺胺甲恶唑(SMZ)为80.0%～94.5%,磺胺对甲氧嘧啶(SMD)为80.7%～102.9%,磺胺喹恶啉(SQX)为80.3%～93.6%。线性范围均在1～200μg/m l,检出限为0.01 mg/kg,定量限为0.05 mg/kg。结论:高效液相色谱(HPLC)测定猪肉中磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉的残留是一种灵敏度较高、检测限较低、简单易行的方法,易于在基层推广应用。

凝固剂对热改性SPI与猪肌肉盐溶蛋白共凝胶作用的影响

本文研究通过单因素实验和正交实验研究凝固剂葡萄糖酸-δ内酯(GDL)、CaCl2、MgCl2和复合凝固剂对改性大豆分离蛋白(SPI)与猪盐溶蛋白(SSPP)共凝胶的影响。结果表明,GDL对蛋白质共凝胶具有破坏作用,而CaCl2、MgCl2对共凝胶均有促进作用。蛋白质混合凝胶形成的最佳条件为:加热时间20min、CaCl2与MgCl2分别为0.3%、温度95℃、m(SSPP):m(SPI)=7:3。

猪肌肉中铁含量的测定及加热和盐类对其含量的影响

本研究主要对猪背最长肌中的总铁量、血红素铁和非血红素铁含量进行了测定,并对加热及盐类对其影响进行了研究.结果表明,猪背最长肌中总铁量为11.59μg/g,非血红素铁和血红素铁含量分别为3.25g/g和8.34μg/g.将肉样在85℃下分别加热30分、60分和120分,肉中的非血红素铁含量分别增加7.69%、22.46%和52.62%.非血红素铁含量的增加可能是由于血红素中的叶啉环的氧化断裂释放出亚铁所致,且这一作用与加热时间几乎呈线性关系.比外,添加亚硝酸钠对加热过程中非血红素铁的释放具有轻微的抑制作用,但效果不显著;加热过程中添加氯化钠对肉中非血红素铁含量的变化没有影响.这两种盐都是肉品加工中常用的辅料.本研究可为由于加热导致的肉中可利用铁的变化及营养效果的评定提供一定的理论依据.

猪肌肉肌内脂肪测定方法的比较

采用4种方法对多种类型猪肉肌内脂肪含量进行测定,其中,鲜样浸提法与近红外光谱法(鲜样)的相关系数为0.989,与索氏抽提法(干样)的相关系数为0.978;而索氏抽提法与近红外光谱法的相关系数为0.981,且大理石纹评分法(观察法)与其他的相关系数均小于0.9。通过4种方法的比较分析表明,索氏抽提法测定结果显著低于鲜样浸提法与近红外光谱法,而鲜样浸提法与近红外光谱法所测结果之间无显著差异,大理石纹评分法与其他方法均存在显著差异,只可作为辅助方法。鲜样浸提法和近红外光谱法在不同品种间进行测试分析显示两者之间无显著差异。因此,认为鲜样浸提法仍然是最为准确有效的测定猪肉肌内脂肪的经典方法,而近红外光谱法具有简便快捷准确的优点,可以作为快速检测方法。

猪肌肉颜色测定方法与结果表述的研究

探讨评分法和仪器法2种肉色测定方法的相关性,以确定适合于表述评判正常肉与异常肉的特征值。依据《NY/T 821—2004猪肌肉品质测定技术规范》,应用评分法和仪器法2种肉色测定方法,对2014年10月至2017年6月采集的627头猪肉样品进行肉色测定,并对测定结果进行分析。结果表明,评分法快捷方便,但影响因素较多;仪器法测定的L、a、b值能反映出肉样的色彩空间,但需要专业知识方能理解;评分法和仪器法2种方法并行,采用色差计法测得的L值来表述肉色的测定结果更为客观准确适用。评分值与L值的对应关系是:评分值≤1. 5分对应的L值≥60,为PSE肉色;评分值1. 5～2. 5分对应的L值为53～59,趋近于PSE肉色;评分值3. 0～4. 0分对应的L值为37～52,为正常肉色;评分值4. 5～5. 5分对应的L值为31～36,趋近于DFD肉色;评分值6. 0分对应的L值≤30,为DFD肉色。

用Cre/LoxP和CRISPR基因工程技术构建猪肌肉生长抑制素双等位基因敲除细胞系

肌肉生长抑制素(myostatin,Mstn)基因失活可引起哺乳动物的肌肉增生,但其调控机制尚不清楚,且缺乏可靠的试验材料验证Mstn相关分子通路的变化。本研究所用PK3108细胞系是在野生型PK15细胞系的基础上成功靶向敲除一条等位基因,在其靶位点敲入标记基因,敲除了204bp的外显子3序列,LoxP锚定在其标记基因两侧。利用Cre/LoxP重组酶删除系统删除插入PK3108Mstn靶位点的标记,借助流式细胞仪和荧光蛋白甄别得到无标记的过渡型细胞系PK3108-2。将Cas9/sgRNA表达载体和供体DNA共转染PK3108-2,借助G418抗性筛选和倒置荧光显微镜挑选出仅带阳性标记的克隆L18,对其基因组进行PCR产物凝胶电泳与PCR产物测序,证明克隆L18在预设位点发生同源重组;对其蛋白质进行Western印迹实验表明,Mstn被成功地敲除失活。综上结果证明,本研究实现了双等位基因的精准敲除,构建了Mstn双敲除梯度回复表达细胞系。本研究为揭示Mstn的作用机制提供理想的实验材料,也为双等位基因的敲除提供了可借鉴的技术路线。

超高效液相色谱-串联质谱法检测猪肌肉组织中烯丙孕素残留

建立了测定猪肌肉组织中烯丙孕素残留的超高效液相色谱-串联质谱方法。试样经乙腈和乙酸乙酯提取,低温冷冻去除脂类。采用C18反相色谱柱进行分离,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,电喷雾离子源正离子模式下多反应监测模式检测,基质匹配外标法定量。结果表明,烯丙孕素在1~50ng/mL浓度范围内线性良好,相关系数大于0.99;该方法在猪肌肉组织中检测限(S/N=3)和定量限(S/N=10)分别为0.3μg/kg和1.0μg/kg。加标回收率68.5%~87.9%,日内变异系数1.1%~6.0%,日间变异系数5.5%~10.7%。方法快速、准确、灵敏度高,能满足猪肌肉组织中烯丙孕素残留定性定量分析。

Trolox对猪肌肉干细胞增殖及分化的影响

【目的】探究抗氧化剂-水溶性维生素E的类似物(Trolox)通过调控活性氧对猪肌肉干细胞增殖及分化过程产生的影响,为进一步优化培养肉种子细胞在体外增殖及分化过程提供研究基础。【方法】首先在猪肌肉干细胞增殖过程中,添加不同浓度(0、50、100和200μmol·L^(-1))的Trolox培养3 d,利用血细胞计数板进行细胞计数,统计细胞增殖倍数,同时利用CCK8技术检测不同浓度的Trolox对细胞增殖的影响;利用RT-qPCR技术检测不同浓度Trolox处理后表征干性的PAX7表达水平,Western Blotting技术检测PAX7蛋白的表达水平;通过CellROX荧光染料对细胞内活性氧进行染色并通过高通量高内涵活细胞共聚焦成像系统检测Trolox对活性氧的调控作用;进一步在猪肌肉干细胞体外成肌分化进程中添加Trolox处理,利用RT-qPCR技术检测分化早期标志基因MYOG、CAV-3及终末分化标志基因肌球蛋白重链(MyHC)的表达水平,并利用Western Blotting技术检测MyHC蛋白的表达,利用免疫荧光技术对MyHC进行染色并统计MyHC阳性细胞比例。【结果】细胞增殖倍数统计显示,50和100μmol·L^(-1)的Trolox处理组猪肌肉干细胞增殖倍数显著高于对照组(P<0.05);CCK8测得50和100μmol·L^(-1) Trolox处理组第3天的吸光值显著高于对照组(P<0.05);100和200μmol·L^(-1)的Trolox显著上调了PAX7的表达(P<0.05),对PAX7蛋白的表达有上调趋势,但无显著差异(P>0.05);添加Trolox后,细胞内活性氧水平被极显著降低(P<0.001);在分化进程中添加Trolox后,预分化阶段的MYOG和CAV-3及终末分化阶段的MyHC均显著上调(P<0.05),而Western blotting结果显示MyHC蛋白的表达无显著变化(P>0.05);免疫荧光结果显示MyHC阳性细胞比例有增多的趋势,但无显著差异(P>0.05)。【结论】Trolox通过降低细胞内的活性氧,促进猪肌肉干细胞的增殖以及分化进程。

化学发光酶免疫分析(CLEIA)法测定猪肌肉组织中的氯霉素含量

[目的]建立高度灵敏的直接竞争化学发光酶免疫分析(CLEIA)方法,用于检测猪肌肉组织中的氯霉素残留。[方法]用卵清蛋白与氯霉素偶联物作为包被抗原,标准品或样品中氯霉素作为竞争抗原建立直接竞争CLEIA方法。[结果]所建立方法的检测限为0.018ng/ml,而并列的ELISA方法的检测限为0.177ng/ml。猪肌肉组织中氯霉素添加水平为0.1～5.0ng/ml时,CLEIA法的回收率为87%～118%,ELISA法的回收率为81%～107%。CLEIA法的批内和批间变异系数分别为3.22%～5.58%和4.95%～8.86%。[结论]CLEIA方法快速、简单、灵敏度高,适用于极低剂量氯霉素残留的快速检测。

猪肌肉和肾脏组织中重金属镉含量相关性分析

镉是一种蓝白色金属,其在自然界中含量甚微,在地壳中平均含量为0.15ppm。虽然重金属镉在环境中的浓度很低,但由于其不容易净化,所以可以通过食物链的富积而使污染达到较高水平。镉可以通过食物链富积,转变为持久性有毒物质,其进入人体后可以生成毒性更强的化合物。