猪肠道冠状病毒与入侵受体氨基肽酶N的相互作用

猪肠道冠状病毒是目前危害养猪产业的重要病原。目前已发现能够感染猪肠道的致病性冠状病毒有4种:猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒和猪肠道甲型冠状病毒。冠状病毒感染宿主的第一步是识别宿主细胞膜受体分子并与之结合,随后启动入侵及膜融合进而使病毒基因组进入宿主细胞内部。因此,冠状病毒受体是决定其宿主范围及组织嗜性的关键因素。确定冠状病毒受体及病毒与受体的结合机制对预防新发病毒及开发冠状病毒治疗性药物具有重要意义。猪传染性胃肠炎病毒利用猪氨基肽酶N(aminopeptidase N,APN)作为感染宿主的功能性受体,并利用唾液酸作为辅助结合因子。猪APN最初也被鉴定为猪流行性腹泻病毒的功能性受体,但近年的研究结果与前面的报道存在较大的差异,产生了较大的争议。最近的研究认为,猪丁型冠状病毒的功能性受体也是APN,并且猪丁型冠状病毒能够利用多个物种的APN作为功能性受体,这与其跨物种传播具有密切关系。最新发现的猪肠道甲型冠状病毒则不使用APN作为其入侵受体。本文综述了前面3种猪肠道病毒感染宿主细胞的受体及结合机制的研究进展,并比较分析了猪APN及唾液酸在不同猪肠道冠状病毒入侵宿主过程中结合方式的异同,为进一步研究新发猪肠道冠状病毒受体提供参考。

干扰素-L3在抗猪肠道冠状病毒中的应用研究进展

猪肠道冠状病毒包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV),是造成新生仔猪致死性水样腹泻的主要原因,可引起重大的经济和公共卫生负担。因此,研发新的抗猪肠道冠状病毒制剂十分必要。虽然几种已发现的猪肠道冠状病毒细胞受体不同,但均主要感染肠道上皮细胞。Ⅲ型干扰素(IFN-L)可选择性作用于上皮细胞,如呼吸道以及胃肠道等,在上皮细胞抗感染中发挥重要作用。文章综述干扰素-L3(IFN-L3)在猪肠道冠状病毒防治中的优势及其在临床应用中的相关理论和治疗策略,旨在为广谱抗猪肠道冠状病毒治疗剂的应用研究提供参考。

猪肠道冠状病毒检测方法的研究进展

猪肠道冠状病毒(swine enteric coronavirus,SeCoV)是规模化猪场仔猪病毒性腹泻的主要病原,给全世界的养猪业造成了巨大的经济损失。因此,建立准确、安全、快速、高效的检测SeCoV的方法,有助于及时发现SeCoV并采取措施防控猪肠道冠状病毒病。本文归纳总结了近年检测SeCoV的方法,包括常规病原学检测技术、分子生物学检测技术、血清学检测技术以及新型分子检测技术等,以期为有效诊断与防控猪肠道冠状病毒病提供技术支持。

猪肠道冠状病毒感染机制的研究进展

猪肠道冠状病毒(swine enteric coronavirus,SeCoV)是引起猪病毒性腹泻的重要病原,在世界范围内广泛流行,给全球养猪业带来了危害。本文综述了4种主要的猪肠道冠状病毒感染机制的研究,即传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV),包括通过受体APN侵入细胞并诱导宿主细胞凋亡、逃逸宿主的天然免疫,以及与宿主细胞内质网应激系统相互作用的机制,以便为猪肠道冠状病毒研究及相关疾病防控提供参考。

肠小体在猪肠道冠状病毒感染中的研究进展

猪肠道冠状病毒是引起仔猪腹泻的重要致病因素,主要感染小肠绒毛上皮细胞,给养猪业造成了巨大的经济损失。由于缺乏能模拟胃肠道高度复杂生理特性的体外研究模型,猪肠道冠状病毒感染与宿主肠上皮之间相互作用的研究也受到了极大的限制。随着干细胞技术的快速发展,一种能模拟肠道复杂的细胞类型及空间结构的体外模型——肠小体引起了人们的广泛关注。与传统的细胞系相比,肠小体不仅能模拟肠的结构和功能,同时还保留宿主的遗传特性,有望成为研究宿主-肠道病原相互作用的一种理想模型。本文就猪肠道冠状病毒以及肠小体在肠道病原研究中的应用进行综述,以期为猪肠道冠状病毒的基础研究提供新的思路与见解。

猪肠道α冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立

为建立猪肠道α冠状病毒(SeACoV)荧光定量检测方法,本研究采用RT-PCR方法扩增SeACoV N基因保守区序列,将其克隆至p EASY-Blunt载体,构建重组质粒p EASY-Blunt-PA-N作为标准阳性质粒,以其为模板建立SeACoV的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验验证。结果显示,建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法 Ct值与标准品模板在9.47×101拷贝/μL～9.47×107拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.996,斜率为-3.91。本实验建立的方法对PEDV、TGEV、PDCo V、PRRSV等猪常见腹泻病样品检测无扩增,表明特异性良好;敏感性试验结果显示,该方法检测下限可达到9.47×101拷贝/μL;重复性试验结果显示,组内变异系数在0.82%～1.01%,组间变异系数在1.20%～1.69%,重复性较好。采用本研究建立的方法对广西和云南等地70份临床样品进行检测,结果显示除阳性对照外,临床样品均为阴性,表明该病毒尚未传播至广东以外的省份。本实验首次建立了SeACoV N基因SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,为SeACoV快速检测和病毒感染预防提供技术手段。

猪腹泻类冠状病毒病的防控

猪肠道冠状病毒(PECs)主要引起哺乳仔猪严重腹泻、呕吐和脱水,死亡率高达100%,号称仔猪的“头号杀手”,给我国和世界养猪业造成了巨大的经济损失。为此,总结PECs的致病性、临床特征和防控措施,为改进PECs的诊断、预防和控制提供重要参考.

猪流行性腹泻病毒与新发腹泻病毒混合感染分析

为了分析猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪肠道α冠状病毒(PEAV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)在临床中的混合感染情况,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法将已经验证为PEDV阳性的样本进行PDCoV和PEAV检测。结果表明,PDCoV和PEDV混合感染比例为6.28%,191份PEDV阳性样本中,PDCoV阳性为12份,PEAV阳性为1份,PDCoV、PEAV和PEDV共感染的比例为0.52%。结果表明目前临床生产中PEDV仍然是引起仔猪腹泻的主要病毒性传染源,为临床生产中仔猪腹泻的防控工作提供理论依据和技术支撑。

厦门地区规模猪场八种致猪腹泻病病毒感染调查

为了解厦门辖区内规模化猪场多种致猪腹泻病病毒的流行情况,采用四重荧光反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法对采自53家规模化猪场的265份猪腹泻粪便进行猪肠道α冠状病毒(porcine enteric alphacoronavirus,PEAV)、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)、猪凸隆病毒(porcine torovirus,PToV)、猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)、猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)核酸检测。结果显示:从265份腹泻粪便样品中均未检出TGEV和PEAV;PKV、PTV、PoRV、PToV、PDCoV、PEDV的样品阳性率依次为67.92%、65.28%、36.60%、27.55%、6.42%、4.91%,对应的场阳性率依次为86.79%、79.25%、58.49%、41.51%、18.87%、5.66%;84.91%的猪场存在2种及以上病毒的混合感染。结果表明:目前厦门地区致猪腹泻病的主要病毒是PKV、PTV、PoRV、PToV,且混合感染现象较为普遍。

PDCoV和PEAV二重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪肠道α冠状病毒(PEAV)是两种新发现的猪传染性冠状病毒,临床上均以腹泻症状为主,症状相似,临床上难以快速诊断。为建立一种快速、准确区分PDCoV和PEAV的二重RT-PCR方法,本研究根据PDCoV和PEAV N基因序列,分别设计2对特异性引物,以阳性质粒为模板,对二重RT-PCR反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性试验。结果显示,所建立的方法能够扩增出PDCoV和PEAV的特异性片段,大小分别为690 bp和208 bp,且对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)无扩增条带;对PDCoV和PEAV的最低检测量分别为5.13×102copies/μL、4.73×101copies/μL。对60份临床腹泻样本病料进行检测,结果PDCoV的检出率为21.6%,未检测出PEAV。本研究所建立的二重RT-PCR方法可用于临床流行病学监测,为快速诊断PDCoV和PEAV提供理论依据和技术支持。