猪支原体肺炎活疫苗（168株）气溶胶免疫后呼吸道sIgA分泌及抗原存留规律

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae ,Mhp)引起的猪的一种慢性呼吸道疾病,严重影响养猪业发展,活疫苗气溶胶免疫是防治该病的新措施。为研究猪肺炎支原体活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,疫苗株在免疫猪肺内的占位存留规律,选用3周龄不吃初乳猪27头,随机分为3组,G1气溶胶免疫组12头,G2肺内免疫组12头,同时设立阴性对照3头。分别于免疫后第2 h、7 d、14 d及28 d进行鼻拭子Mhp sIgA检测以及血清抗体检测。另外在上述时间点分别宰杀G1和G2组各3头,对照组在实验组免疫后第28 d宰杀,采集肺泡灌洗液,分别进行Mhp sIgA检测及Mhp疫苗株含量检测。结果显示:(1)所有试验猪至实验结束,Mhp血清抗体未出现转阳现象;(2)鼻拭子sIgA水平G1组在免疫后第14 d与对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05);G2组在免疫后第7 d和14 d与相应的对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(3)G1组肺泡灌洗液中的 sIgA在免疫后14 d部分转阳(阳性率33.33%),28 d全部转阳(阳性率100%);G2组在免疫14 d时已全部转阳(阳性率100%),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(4)气溶胶免疫组肺泡灌洗液内Mhp疫苗株浓度在免疫后第2 h、7 d、14 d和28 d分别是相应肺内免疫组的0.37倍、1.01倍、0.88倍以及0.52倍。猪支原体肺炎活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,和肺内免疫一样可以诱导免疫猪的局部黏膜免疫以及具有同等的占位效应,且经气溶胶免疫的疫苗株在免疫仔猪体内的增殖水平可能与其诱导的黏膜免疫水平相关。

不同水性及水包油型佐剂对猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫增强作用

旨在为猪支原体肺炎灭活疫苗研发水性的或水包油型佐剂,降低疫苗的副作用。利用小鼠为模型动物评价几种不同佐剂配合猪支原体肺炎灭活疫苗免疫动物时对细胞免疫和体液免疫应答的增强作用。将不同佐剂与灭活疫苗配合肌肉注射免疫小鼠,检测脾淋巴细胞对猪肺炎支原体抗原的增殖应答情况及特异性的血清IgG抗体水平。试验分两批次进行,共评价11种佐剂。结果表明,卡波姆974+免疫刺激复合物基质混合物佐剂和壳聚糖+左旋咪唑混合物佐剂强烈地诱导产生高水平细胞免疫和体液免疫应答(P<0.01);卡波姆974+左旋咪唑混合物佐剂、卡波姆974+左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂和ISA 11R VG佐剂次之(P<0.05);β-葡聚糖+左旋咪唑混合物佐剂、DEAE-dextran+左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂和β-葡聚糖+左旋咪唑+黄芪多糖混合物佐剂在细胞免疫应答方面作用显著(P<0.01),但体液免疫应答作用稍弱;而GEL 01ST佐剂在体液免疫应答方面作用显著(P<0.01),细胞免疫应答作用稍弱。通过分析认为卡波姆974+免疫刺激复合物基质混合物佐剂、壳聚糖+左旋咪唑混合物佐剂的效果最好,可同时显著增加细胞及体液免疫应答,本试验结果将为猪支原体肺炎灭活疫苗的佐剂研发提供数据基础。

猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗不同免疫程序的免疫效果比较分析

为了评估不同免疫策略对猪场免疫效果和经济效益的影响,以确定最佳的疫苗免疫程序,本试验将处于产前1个月的四胎次健康三元母猪随机分为2个组,A组(联合免疫组)母猪于产前27 d联合免疫猪圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗(圆柯欣+柯喘宁+稳柯健),其所产仔猪于21日龄联合免疫圆柯欣、柯喘宁和稳柯健;B组(对照组)母猪于产前34和27 d分别免疫稳柯健、猪圆环病毒疫苗和猪肺炎支原体疫苗二联疫苗(圆-支二联疫苗),其所产仔猪于14日龄免疫圆-支二联疫苗,28日龄免疫稳柯健。统计和分析免疫各组临床指标、生产性能和持续性抗体水平。结果显示,免疫疫苗后,2个组的母猪采食情况均正常;2个组的仔猪整体精神状态良好,哺乳情况正常,均未出现咳嗽和喘气等呼吸道疾病。在试验期间内,2个组的母猪的窝产健仔数和仔猪出生健仔均重并无差别。A组和B组的出生至23日龄死淘率、出生至50日龄死淘率分别为3.77%、5.11%和4.07%、5.43%,A组略优于B组。抗体监测结果显示,A组母猪的CSFV和PCV2抗体水平较B组无显著差异(P>0.05);A组仔猪的CSFV抗体阳性率与B组无明显差异(P>0.05),而PCV2抗体水平在免疫早期阶段(21日龄)明显高于B组(P<0.05)。结果表明,猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗可以联合免疫,且免疫后相互之间不干扰。该联合免疫策略在确保免疫效果的同时,简化了疫苗免疫程序,为确定最佳的疫苗免疫程序提供了有价值的临床应用参考。

猪支原体肺炎活疫苗(168株)滴鼻免疫保护效果的研究

本研究通过滴鼻免疫新途径免疫猪支原体肺炎活疫苗168株,与肺内免疫组及对照组进行比较,来确定滴鼻免疫猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫保护力。将20只猪随机分为肺内免疫组、滴鼻免疫组、健康对照组和攻毒对照组。定期观察和检测各组猪免疫后的临床症状。结果表明:滴鼻免疫组免疫后,猪群体温正常,无免疫引起的局部或全身不良反应,免疫途径安全可行;滴鼻免疫组和肺内免疫组与健康对照组相比,SIgA水平显著升高,差异极显著(P<0.01),但滴鼻免疫组与肺内免疫组相比,差异不显著。流式细胞仪检测显示CD4+数值未发生显著性变化。肺脏剖检评分显示滴鼻免疫组的肺脏的病变水平与攻毒对照组相比呈极显著降低(P<0.01),保护率达到60%,相对低于肺内免疫组100%的保护率。猪支原体肺炎活疫苗(168株)通过滴鼻免疫方式,可以产生较好的免疫保护力。

重组蛋白CTB-P97R1对猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫效果的评价

为提高滴鼻免疫条件下猪支原体肺炎活疫苗的免疫效果,本研究设计引物扩增猪肺炎支原体P97R1基因,融合至霍乱毒素B亚单位(CTB)基因下游,构建了重组质粒p ET-CTB-P97R1。重组菌经IPTG诱导表达、分离纯化得到r CTB-P97R1重组蛋白。利用体外神经节苷脂(GM1)结合试验检测r CTB-P97R1的佐剂活性。随后将r CTB-P97R1与活疫苗混合后滴鼻免疫小鼠,免疫后采血和收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),分别检测其中的特异性Ig G抗体和s Ig A抗体的水平评价免疫效果。结果显示,r CTB-P97R1可以特异性结合GM1,具有生物学活性。小鼠免疫后的血清Ig G抗体显著高于活疫苗对照组(p<0.01),同时产生了高水平的P97R1特异性Ig G抗体(p<0.01);小鼠BALF中的s Ig A抗体也显著高于活疫苗对照组(p<0.05)。结果表明,r CTB-P97R1能够显著增强经滴鼻免疫的猪支原体肺炎活疫苗的免疫效力,同时可提升P97R1的免疫应答,有望作为经黏膜免疫的猪支原体肺炎活疫苗的新型佐剂。

猪支原体肺炎活疫苗(168株)肺内免疫机制研究

为研究猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫机制,通过肺内接种免疫5～10日龄仔猪,并于免疫后不同时间点检测血清中IgG抗体效价、全血中淋巴细胞转化效率、呼吸道局部的IFN-γ浓度和特异性SIgA滴度,于免疫后28 d剖杀采集呼吸道上皮组织,通过扫描电镜法与原位杂交检测法观察疫苗株在呼吸道的存留以及对纤毛的影响情况。结果发现,免疫后猪血液中淋巴细胞转化增强1.52～2.01倍,支气管表面IFN-γ浓度和特异性SIgA滴度持续增加,但血清抗体一直未检测到。扫描电镜与原位杂交检测结果发现疫苗株能有效地黏附在支气管纤毛上皮细胞上,但对纤毛的影响较小。由此表明,猪支原体肺炎活疫苗(168株)通过肺内免疫可有效激活全身细胞免疫及呼吸道局部的黏膜免疫与细胞免疫反应,而且还可以通过黏附支气管纤毛上皮细胞产生占位效应而对上皮组织不产生损伤。

猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫效力研究

研究使用健康易感仔猪对3批猪支原体肺炎活疫苗(168株)分别进行了免疫效力试验、免疫期试验、临床效力试验、同类制品的免疫效力比较试验和免疫期比较试验,以及5批疫苗免疫商品猪的临床试验。结果表明:猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫仔猪60 d后,免疫组有80%以上的保护率,免疫后7个月,试验组仍有50%以上的保护率;同类制品免疫效力和免疫期比较试验结果表明两种猪支原体活疫苗差异不明显。临床观察和病理剖检结果表明免疫保护率在85%以上。以上结果都说明猪支原体肺炎活疫苗(168株)具有很好的免疫效力。

猪支原体肺炎活疫苗(168株)的安全性研究

用健康易感仔猪进行同群感染试验和连续五代返强试验对猪肺炎支原体活疫苗(168株)进行安全性试验,同时也进行了该活疫苗单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗免疫商品猪的临床试验。结果发现,猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫猪后,免疫猪和同群感染猪均未观察到典型的临床症状和病理变化;连续五代返强试验,试验猪均未观察到典型的临床症状和病理变化,说明该疫苗株未出现返强。单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗的临床试验也未观察到不良反应。这说明受试批次猪支原体肺炎活疫苗(168株)具有良好的安全性。

猪支原体肺炎活疫苗经肌肉注射的免疫效果评价

猪支原体肺炎活疫苗(168株)是一种以肺内注射途径免疫的弱毒活疫苗。为了拓展猪支原体肺炎活疫苗的免疫途径,评估猪支原体肺炎活疫苗(168株)配合佐剂以肌肉注射方式免疫猪群后的攻毒保护效果,选取20头7日龄猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)阴性仔猪,将其随机平均分成4组,分别为健康对照组、感染对照组、肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组。在免疫后采集血样并检测其中的Mhp IgG抗体,在首次免疫后42 d人工感染Mhp组织毒(JS株),攻毒28 d后评估肺脏的病变情况并测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中的Mhp含量。结果显示:免疫后肌肉注射免疫组动物产生了明显的Mhp特异性血清IgG抗体,而肺内注射免疫组动物在攻毒前未见明显的血清抗体;肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组的攻毒保护率分别平均为88.89%和75.93%,且组间无显著性差异;感染对照组的BALF中Mhp单位含量极显著高于肌肉注射免疫组和肺内注射免疫组(P<0.01),2个免疫组间无显著性差异。结果表明:猪支原体活疫苗配合佐剂后经肌肉注射免疫可产生较好的免疫攻毒保护效果。本研究为猪支原体肺炎活疫苗(168株)实施肌肉注射免疫提供了临床数据支撑。

猪支原体肺炎活疫苗与灭活疫苗联合免疫效果评价

为探寻一种更加合理高效的猪支原体肺炎(MPS)免疫方式,本研究使用MPS弱毒疫苗进行基础免疫后14 d再使用灭活疫苗进行加强免疫,通过人工感染猪肺炎支原体来评价其免疫效果。同时将这种免疫程序在规模化猪场进行应用,通过计算一定时期内的日增重来评价其免疫效果。结果显示:联合免疫在保证黏膜免疫效果的同时并未降低体液免疫水平;更为重要的是,联合免疫不但具备较高攻毒保护率,而且在攻毒后剖杀时其肺泡灌洗液中抗原含量远低于其他免疫方式。以上结果表明,联合免疫可以产生较好的免疫协同作用,从而提高了机体的综合免疫保护能力。田间试验结果发现:联合免疫组猪群从21日龄至80日龄平均增重27.31 kg,比活疫苗免疫组猪群多增重3.02 kg,比灭活疫苗免疫组猪群多增重3.73 kg;其平均日增重可达0.46 kg/d。本研究为防治猪支原体肺炎提供了新的思路。

雾化对猪支原体肺炎活疫苗活力的影响

为研究经喷雾器雾化对活疫苗微生物学活性的影响,用变色单位(CCU)法分别对经过不同压力雾化前后的猪支原体肺炎活疫苗活力进行测定,结果表明,喷雾器在雾化过程中的切割力能显著降低疫苗的活力。喷雾器喷射压力越大,对疫苗活力下降的影响越大。

皂树皂苷QS21增强猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫小鼠效果评价

为提高猪支原体肺炎活疫苗的滴鼻免疫效果,以猪支原体肺炎(168株)活疫苗为抗原,以QS21为免疫佐剂混合后滴鼻免疫小鼠,ELISA法检测免疫效果,包括血清和支气管肺泡灌洗液中抗原特异性抗体水平,并测定了Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-4和Th17型细胞因子IL-17的分泌情况。结果表明,QS21能激活黏膜和全身性的体液免疫,升高血清和支气管肺泡灌洗液中IgG,IgG1、IgG2a抗体含量,并能提高支气管肺泡灌洗液中黏膜免疫抗体s IgA的含量。QS21还能显著增加支气管肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ和IL-17的分泌,激活Th1、Th2和Th17型细胞免疫应答。以上结果表明QS21能有效激活免疫系统,提示QS21可作为猪肺炎支原体活疫苗的候选黏膜佐剂。

猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与猪伪狂犬活疫苗混合后对其体外效价的影响

为了解猪支原体肺炎活疫苗与猪伪狂犬活疫苗混合对其效价的影响,本研究从市面上采购了15家公司的19批猪伪狂犬活疫苗,分别用广东永顺生物制药股份有限公司的猪用活疫苗稀释液和不同厂家的猪伪狂犬活疫苗专用稀释液同时稀释永顺公司的RM48支原体和相应厂家的猪伪狂犬活疫苗,探究这两种疫苗混合后在25℃放置2小时对RM48支原体效价和伪狂犬效价的影响。结果表明:(1)永顺公司RM48支原体疫苗与不同厂家的伪狂犬疫苗混合后,RM48支原体效价有差异,与其中5个厂家的伪狂犬疫苗混合后,无论是用永顺公司的稀释液还是用伪狂犬疫苗相应厂家的稀释液稀释,对RM48支原体的效价均无明显影响;与其中4个厂家的伪狂犬疫苗混合后,用永顺公司的稀释液稀释效价优于伪狂犬疫苗相应厂家的稀释液;与其中5个厂家的伪狂犬疫苗混合后,用伪狂犬疫苗相应厂家的稀释液稀释效价优于永顺公司的稀释液;与公司7的伪狂犬疫苗混合只能用永顺公司的稀释液稀释,若用公司7的伪狂犬疫苗对应的稀释液稀释对永顺公司RM48支原体影响非常大,支原体的活菌数将降低1000倍。(2)永顺公司RM48支原体疫苗与14批不同厂家的伪狂犬疫苗混合后,无论是用永顺公司的稀释液还是用伪狂犬疫苗相应厂家的稀释液稀释,对伪狂犬疫苗的效价均无明显影响。因此,RM48支原体疫苗与不同厂家猪伪狂犬活疫苗混合后,体外效价结果显示主要对RM48支原体的效价有影响,故需谨慎选择猪伪狂犬活疫苗及稀释液。

猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗与猪瘟活疫苗混合免疫效果评价

为评价猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗(以下简称圆支二联苗)与猪瘟活疫苗混合免疫效果,本研究利用圆支二联苗作为稀释剂稀释猪瘟(CSFV)活疫苗,稀释后的混合疫苗在室温放置0、1 h、2 h取样测定CSFV含量,结果显示放置2 h CSFV含量未下降,表明圆支二联苗作为稀释剂不影响CSFV含量。用圆支二联苗对仔猪首次免疫,首免后14 d用稀释后的混合疫苗二免,分别在二免后21 d和28 d利用猪圆环病毒2型(PCV2)和猪肺炎支原体(Mhp)攻毒,结果显示圆支二联苗和CSFV活疫苗混合使用的免疫效果与单独使用圆支二联苗的免疫效果相当,针对PCV2的攻毒保护率均为80%,针对Mhp攻毒,混合疫苗免疫的仔猪肺炎病变减少率分别为73.1%和75.0%。此外,分别在混合疫苗和CSFV活疫苗免疫仔猪后不同时间采血,检测血清中CSFV抗体水平,结果显示混合疫苗免疫一次与CSFV活疫苗免疫一次后CSFV抗体水平相当。以上结果表明圆支二联苗可以作为稀释剂稀释CSFV活疫苗,一次性注射免疫,各疫苗免疫效力均不受影响。本研究为临床免疫程序优化及相关疫病的防制提供了实验依据。

猪肺炎支原体灭活疫苗的实验室效力研究

为了探究自主研制的猪肺炎支原体灭活疫苗的实验室免疫效力,为临床应用提供科学依据,试验分别用2.0 mL/头、1.0 mL/头、0.5 mL/头和0.25 mL/头4种剂量的试验疫苗两次免疫7~14日龄健康仔猪,通过测定免疫期间猪只生长情况、抗体水平变化情况及肺脏病变指数等,以确定该疫苗的最小免疫剂量及其安全性。结果表明,该疫苗四种剂量的试验攻毒保护率分别为77.9%、70.5%、65.3%和49.5%,且所有仔猪均未出现不良反应。因此,该疫苗的最小免疫剂量为0.5 mL/头,推荐使用剂量定为l.0 mL/头。

猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估

试验旨在评估猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫的效果。试验选取7日龄健康仔猪500头,分为A组(联合免疫组)和B组(单苗免疫组)。A组在21日龄,每头仔猪免疫1 mL猪圆环病毒2型基因工程疫苗、2 mL猪肺炎支原体灭活疫苗和1头份猪瘟活疫苗,在55日龄每头仔猪免疫1头份猪瘟活疫苗。B组猪按照试验猪场现有的程序免疫。在三种疫苗联合免疫后的第四周、第八周采血,检测血清中猪瘟病毒抗体和猪圆环病毒2型抗体。联合免疫组猪圆环病毒抗体和猪瘟抗体的水平与单苗免疫组相当。结果表明,猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗,可以联合一起,同时免疫。

猪支原体肺炎活疫苗与猪伪狂犬活疫苗混合喷鼻试验

简化免疫程序,方便养猪生产,是众多养猪人的需求,通过设计猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与伪狂犬活疫苗相互影响试验、混合使用对于伪狂犬免疫的影响试验、混合使用对于猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)的免疫影响试验、猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与灭活疫苗临床效果对比试验等4个试验,试验结果表明:猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与伪狂犬活疫苗是可以混合喷鼻使用的;猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)比猪支原体肺炎灭活疫苗产品的临床应用效果更明显。对于简化免疫程序推进,提供有力的数据支持。

猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)冻融后稳定性研究

为了探究猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)-70℃冻融后性状是否改变,本试验研究将GD0503株与白油佐剂以不同水油比、与含有不同比例硬脂酸铝的白油佐剂乳化的疫苗,以及GD0503株不同抗原含量与白油佐剂乳化的疫苗,分别置-70℃冻融1次和冻融3次进行稳定性检测;同时也选取了不同公司不同种类的油佐剂疫苗10种,与猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)分别置-70℃冻融1次进行稳定性检测。结果表明∶(1)GD0503株与白油佐剂以不同水油比(1∶1.5、1∶2和1∶3)乳化的疫苗、与含有不同比例硬脂酸铝(0、1.0%、1.2%和2.0%)的白油佐剂乳化的疫苗和不同抗原含量与白油佐剂1∶2乳化的疫苗-70℃冻融1次和冻融3次管底均无明显水相析出,不破乳;(2)不同公司的10种油佐剂疫苗在-70℃冻融1次后有7种发生破乳,猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)和另外3种疫苗性状保持不变。上述结果证实,我们制备的猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)在-70℃保存后性状保持不变(不破乳)。

猪支原体肺炎灭活疫苗的临床应用效果评价

为了评估一针型水性佐剂猪支原体肺炎灭活疫苗(HN0613株)的临床应用效果,本研究从疫苗安全性、免疫效力和生长性能等方面进行评价。安全性评价结果显示,仔猪免疫后的体温、精神和饮食均正常,注射部位未见红肿、结痂和化脓等炎症反应,表明该疫苗安全性良好。用该疫苗免疫一次进行免疫攻毒效果评价,结果表明研制的疫苗效果确实,攻毒保护效果优于进口疫苗。通过比较免疫组与空白对照组断奶至出栏时平均日增重,评价疫苗对猪群生长性能的影响,结果表明该疫苗能够显著提升猪群的生长性能。综上所述,说明研制的猪支原体肺炎灭活疫苗在实际生产条件中具有良好的安全性,免疫一次即可达到较好的免疫保护效果。

恩施山区猪支原体肺炎活疫苗防控试验观察

为了有效防控恩施山区猪支原体肺炎,采用猪支原体肺炎活疫苗对5~10日龄猪进行肺内注射免疫,同时设立药物治疗对照组.试验结果表明,采用支原体肺炎活疫苗能有效控制该病的流行与发生,达到免疫无疫.