镉胁迫对猪肾PK-15细胞活性氧和抗氧化酶活性的影响

目的:探明氯化镉(Cd Cl_2)对猪肾PK-15细胞活性氧(ROS)生成和抗氧化酶活的影响。方法:用不同浓度Cd Cl_2(2、4、6、8μmol/L)处理PK-15细胞24 h,观察细胞的形态学变化,并用MTT法检测细胞活性;用不同浓度Cd Cl_2或不同浓度Cd Cl_2+NAC(500μmol/L)处理PK-15细胞24 h,观察对细胞形态和活性氧(ROS)生成的影响;收集不同浓度Cd Cl_2处理24 h的细胞,用试剂盒检测总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性,以及还原型谷胱甘肽(GSH)的含量变化。结果:Cd Cl_2处理PK-15细胞24 h,与对照组相比,细胞活性显著降低且呈剂量-效应关系(P<0.05,P<0.01);随着Cd Cl_2浓度的升高,细胞逐渐皱缩、变圆,ROS荧光强度逐渐升高;Cd Cl_2+NAC处理组与Cd Cl_2处理组相比,细胞皱缩变圆程度明显降低且ROS荧光强度明显减弱;随着Cd Cl_2浓度增加,T-SOD活性及GSH含量显著提高(P<0.05),CAT活性极显著下降(P<0.01)。结论:镉胁迫PK-15细胞是通过氧化应激机制介导肾脏细胞损伤的。

双酚A对PK-15猪肾细胞DNA损伤和细胞凋亡的影响

双酚A(Bisphenol A,BPA)是一种环境内分泌干扰物,用于生产聚碳酸酯和环氧酯塑料,并被广泛用于一些日常用品中。为了探究BPA对肾脏细胞的毒性作用机制,将PK-15猪肾细胞暴露于浓度为10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)、10^(-6) mol/L的BPA中,处理24 h后同对照组(未经BPA处理的猪肾细胞)一起进行单细胞凝胶电泳和Hoechst细胞凋亡检测。结果表明,与对照组相比,PK-15猪肾细胞彗星细胞率、彗星细胞尾长、尾部DNA百分含量和尾矩均随着BPA浓度的升高呈剂量依赖性升高(P<0.01);PK-15猪肾细胞的细胞核随着BPA浓度的升高萎缩或凝聚加剧;细胞凋亡率也呈剂量依赖性升高(P<0.01),提示BPA在PK-15猪肾细胞DNA损伤和细胞凋亡中可能起着重要作用,具有肾毒性。研究结果可为BPA对动物慢性肾病的有害影响研究奠定基础,同时为未来研究提供思路。

转EGFP-attB基因PK15细胞核型分析方法的建立

以转EGFP-attB基因PK15细胞（猪肾细胞15）为试验材料,研究不同秋水仙素浓度、低渗时间对染色体标本制备的影响。结果表明,使用秋水仙素浓度为0.04~0.08μg/mL、低渗时间为15~20 min时所制备的染色体标本分裂相分散好,可以做核型分析用,为下一步做染色体荧光原位杂交检测研究转EGFPattB基因在染色体上的整合位点奠定了基础。