猪胆粉中重金属污染特征及健康风险评价

目的:检测猪胆粉中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)、锌(Zn)、铬(Cr)、镍(Ni)等元素的含量,并进行污染等级及人体健康风险分析。方法:采用电感耦合等离子体质谱法对猪胆粉中8种重金属含量进行测定。结果:17批次样品中,8种重金属元素均有检出,其中Cu、Cr、Ni超标较为严重,超标率分别达到94.1%、88.2%、35.3%。单项污染指数从大到小排序为:Ni>Cr>Cu>Zn>Hg>As>Pb>Cd,说明猪胆粉药材主要受到Ni、Cr、Cu3种元素的污染,猪胆粉受8种重金属污染的等级均达到了警戒级及以上。但8种重金属的HI与HQ平均值均小于1,即不具有非致癌健康风险。各元素的Risk均小于1×10^(-4),猪胆粉药材整体上不具备致癌风险。结论:各批次猪胆粉药材均存在不同程度的重金属污染,但健康风险较低,其中Cu、Hg等元素污染还需关注。

HPLC-ELSD法对猪胆粉中猪去氧胆酸的含量测定研究

目的建立猪胆粉及其制品中猪去氧胆酸的含量测定方法。方法以KromasilC18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱为固定相,柱温25℃,以乙腈0.1%乙酸水溶液(50∶50)为流动相,流速1.0mL·min-1;蒸发光散射检测器检测,漂移管温度40℃,以氮气为载气,压力2.0bar。结果猪去氧胆酸在5.4μg～27.0μg范围内线性关系良好,r=0.9994,加样回收率为97.0%,RSD=2.7%(n=5)。结论该方法简便、准确、重复性好。

猪胆粉抗炎作用研究

为研究猪胆粉抗炎作用及其抗炎机制,采用小鼠耳肿胀法、小鼠足肿胀法、小鼠棉球肉芽肿法急性和慢性炎症模型,观察猪胆粉抗炎作用,通过测定小鼠足趾炎性渗出液中组胺含量,小鼠气囊炎渗出液中白三烯B_4(leukotriene B_4,LTB_4)、前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)含量探究猪胆粉抗炎机制。结果显示:猪胆粉高剂量组(400mg/kg)对二甲苯致小鼠耳肿胀、蛋清致小鼠足肿胀、棉球致小鼠肉芽肿有显著抑制作用(P<0.05),对小鼠足趾炎性渗出物中组胺含量、小鼠气囊炎渗出液中PGE_2和LTB_4的浓度有极显著的降低作用(P<0.01)。中剂量组(200mg/kg)对二甲苯致小鼠耳肿胀、蛋清致小鼠足肿胀、棉球致小鼠肉芽肿有极显著抑制作用(P<0.01),对小鼠足趾炎性渗出物中组胺含量、小鼠气囊炎渗出液中PGE_2和LTB_4的浓度有极显著的降低作用(P<0.01)。低剂量组(100mg/kg)效果不明显(P>0.05)。结果表明,猪胆粉具有显著抗炎作用,其作用机制可能与降低组胺分泌及影响花生四烯酸代谢有关。

猪胆粉HPLC指纹特征研究

目的:建立猪胆粉HPLC指纹特征图谱。方法:应用Lichrospher C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.001 mol/L KH2PO4溶液为流动相,梯度洗脱(0～20 min,乙腈30%→30%;20～40 min,乙腈30%→40%;40～70min,乙腈40%→50%),流速:1.0 ml/min;柱温30℃;DAD检测器,检测波长为210 nm。结果:通过分析10批样品,确定了15个共有峰,建立了猪胆粉的HPLC指纹特征图谱。结论:该方法简便易行,结果可靠,可作为猪胆粉质量评价的依据之一。

2010年版中国药典中猪胆粉真伪检查项的优化

目的建议补充提高中国药典中猪胆粉(检查)牛、羊胆项。方法以十八烷基键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以0.05%醋酸铵溶液(用冰醋酸调pH至4.0)为流动相B,梯度洗脱;流速为1mL·min-1,用蒸发光散射检测器检测。结果准确检查区分猪、牛、羊、鸡、鸭胆粉。结论本法操作简便,结果可靠,可更好地控制猪胆粉的掺伪及误用。

RP-HPLC测定猪胆粉薄荷脑软膏中猪去氧胆酸的含量

目的：建立猪胆粉薄荷脑软膏中猪去氧胆酸的含量测定方法。方法：采用RP-HPLC法，以ZorbaxSBC18为色谱柱，流动相为甲醇-0．1％甲酸溶液（80：20），流速为0．5mL·min^-1，采用蒸发光散射检测器，漂移管温度为90℃，氮气流速为1．6L·min^-1。结果：猪去氧胆酸线性范围为0．7068～10．602μg，r=0．9993。猪去氧胆酸的平均回收率为97．61％，RSD为2．4％。结论：本方法定量准确，重复性好，可用于猪胆粉薄荷脑软膏的质量控制。

超高效液相色谱-串联质谱检测猪胆粉中黄曲霉毒素的2种前处理方法比较研究

以中医药传统药物猪胆粉作为研究对象,采用UPLC-MS/MS(超高效液相色谱-串联质谱)作为测定方法,分别通过免疫亲和柱法及QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)法进行样品前处理,通过考察方法的稳定性、重复性、回收率、检测限,对两种前处理方法进行评价。结果表明两种前处理方法所制样品中杂质对四种黄曲霉毒素峰均无干扰,能专属的测定黄曲霉毒素,免疫亲和柱法处理效果更佳,杂质较少。两种方法对黄曲霉毒素G族回收率结果无显著性差异,对黄曲霉毒素B族则QuEChERS法回收率更高。重复性、检测限对比结果,免疫亲和柱法优于QuEChERS法。因此两种前处理方法各有优劣,但整体而言,从操作简便,节约成本的角度来讲,QuEChERS法更优。此研究可为快速高效测定中药中的黄曲霉毒素提供思路,准确快速检验国药,对于“三农”中家畜猪的养殖,充分利用家畜副产品具有重要意义。

熊胆粉和猪胆粉干预脂肪肝大鼠的实验研究

目的:探讨熊胆粉和猪胆粉干预高脂饮食引起脂肪肝大鼠的差异,为替代使用提供实验依据。方法:32只SD大鼠随机分为四组(每组8例):空白对照组、高脂饮食模型组、熊胆粉干预组和猪胆粉干预组,分别记录体重和肝脏重量的变化,HE染色法检测肝脏组织的形态变化,并检测每组血清的谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和总胆固醇四个生化指标分析对比肝功能的变化情况。结果:熊胆粉和猪胆粉对高脂饮食引起的大鼠体重和肝脏重量的非正常升高均有下降趋势,但熊胆粉有统计学意义;HE染色观察熊胆粉和猪胆粉对脂肪肝大鼠肝损伤病理状态的影响,发现熊胆粉能有效改善肝组织的损伤情况,而猪胆粉对脂肪肝引起的肝损伤变化没有作用;肝功能生化指标的检测结果发现,熊胆粉能有效降低脂肪肝引起的谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和总胆固醇指标的升高,而猪胆粉只对乳酸脱氢酶有影响。结论:对脂肪肝大鼠的干预效果,熊胆粉优于猪胆粉。

HPLC-ELSD法测定猪胆粉中的甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸的含量

目的:建立HPLC-ELSD法测定猪胆粉中甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸的含量测定方法。方法:猪胆粉甲醇提取液采用Welch Ultimate Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸溶液(40∶60)为流动相,流速为1.0 ml·min^(-1),检测器为奥泰ELSD 2000ES,漂移管温度为105℃,氮气流速为每分钟2.5 L。结果:甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸分别在0.306~4.590μg(r=0.999 5)、0.280~4.194μg(r=0.999 4)范围内呈现良好的线性关系,其平均回收率分别为99.23%,100.37%,RSD分别为2.0%,1.8%(n=9)。结论:该方法结果准确,灵敏度高,重复性好,可用于猪胆粉的质量控制。

猪胆粉中鹅去氧胆酸的分离纯化与检测

猪胆粉为猪科动物猪胆汁的干燥品,收载于《中国药典》一部2010年版[1],具有清热、润燥、解毒、止咳平喘功效,其主要成分为鹅去氧胆酸[2]。鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)又称3α,7α-二羟基-5-β-胆烷酸,是熊去氧胆酸(UDCA)的7β差向异构体,具有降低胆汁内胆固醇饱和度的作用,主要用于治疗胆结石症。

高效液相色谱法同时测定猪胆粉中4种结合型胆酸含量及其特征图谱研究

目的建立HPLC法同时测定猪胆粉中4种结合型胆酸含量的方法并研究其特征图谱。方法采用Thermo Ultimate 3000高效液相色谱仪,Ultimate 3000可变波长检测器,Acclaim 120 C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm);流速1.0 mL·min^-1;检测波长200 nm;柱温25℃;进样量10μL。流动相为乙腈-0.03 mol·L^-1磷酸二氢钠(磷酸调pH=4.4),梯度洗脱。结果牛磺猪去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸钠盐在0.01~0.5 mg·mL^-1内与峰面积线性关系良好,方法回收率在95%~105%。使用该方法分析12批样品,确定了7个共有峰,从而建立了猪胆粉中结合型胆酸的HPLC特征图谱。结论该方法简便合理,可作为猪胆粉的质量评价的依据之一。

复方珍珠膏中猪胆粉和冰片的质量控制研究

目的建立复方珍珠膏中猪胆粉和冰片的质量控制方法。方法 HPLC:色谱柱为Acclaim 120 C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.03 mol·L^(-1)磷酸二氢钠,梯度洗脱;检测波长200 nm;体积流量1.0 mL·min^(-1);进样量10μL;柱温25℃。GC:FDI检测器;色谱柱为Agilent-DB-Wax GC(0.32 mm×30 m,0.25μm);载气为高纯氮气,流速1 mL·min^(-1);氢气流速40 mL·min^(-1);空气流速300 mL·min^(-1);尾吹流量300 mL·min^(-1);进样口温度180℃;柱温140℃,保持时间20 min;检测器温度250℃;分流比50∶1;进样量1μL。结果 HPLC中,牛磺猪去氧胆酸在0.01～0.2 mg·m^L^(-1)内与峰面积线性关系良好(r=0.9991),方法的回收率在95%～105%,RSD <5%(n=3);GC中,龙脑在0.02～0.6 mg·m^L^(-1)内与峰面积线性关系良好(r=0.9990),方法的回收率在95%～105%,RSD<5%(n=3)。结论建立的方法简便合理,可用于复方珍珠膏中猪胆粉和冰片的质量控制。

HPLC法测定猪胆粉中的牛磺猪去氧胆酸和甘氨猪去氧胆酸

目的建立HPLC-UV法同时测定猪胆粉中牛磺猪去氧胆酸和甘氨猪去氧胆酸的含有量。方法猪胆粉甲醇提取液采用Kromasil C_（18）色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）分析;流动相乙腈-0.03 mol/L磷酸二氢钠,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;检测波长200 nm。结果牛磺猪去氧胆酸和甘氨猪去氧胆酸分别在0.087 7~4.384 9μg（r=1.000 0）、0.257 8~8.594 6μg（r=1.000 0）范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率在95.0%~105.0%之间,RSD均小于3.0%。结论该方法简单、可靠,适用于猪胆粉的质量控制。

猪胆粉中牛磺猪去氧胆酸测定方法的改进

目的:改进猪胆粉药材牛磺猪去氧胆酸的色谱条件,解决原方法不能使被检测成分完全分离的问题。方法:将原方法由甲醇-0.03 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(70∶30)(用磷酸调节pH值为4.4)改为乙腈-0.03 mol·L^-1磷酸二氢钠,梯度洗脱;体积流量1.0 mL·min^-1;柱温30℃;检测波长200 nm。结果:牛磺猪去氧胆酸在0.5097~10.1940μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率在98.6%~102.8%间,RSD均小于1.70%。在45 min内达到基线分离,该方法可以准确对猪胆粉中牛磺猪去氧胆酸进行定性定量。结论:该方法改善了原方法不能达到分离被测成分的问题,检测结果稳定、可靠,重现性好,适用于猪胆粉的质量控制,可为2015版《中国药典》中猪胆粉药材测定方法的改进提供参考。

冻干猪胆粉的HPLC指纹图谱和含量测定方法的研究

筛选HPLC色谱条件,用于冻干猪胆粉的HPLC指纹图谱测定及冻干猪胆粉中牛磺猪去氧胆酸含量的测定,并与5批非冻干技术制备的市售猪胆粉进行对比。应用Shim-pack GIST-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.03 mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(磷酸调节pH=4.3)为流动相,梯度洗脱(0.01~20.00 min,29%~40%A;20.01~30.00 min,29%~29%A),流速1.0 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长200 nm。采用上述色谱条件测定10批冻干猪胆粉,通过“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”建立冻干猪胆粉对照指纹图谱,确定11个共有峰,供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算,规定5分钟后的色谱峰相似度不得低于0.95。10批冻干猪胆粉的指纹图谱相似度均大于0.995;5批市售猪胆粉中只有1批的相似度大于0.95。10批冻干猪胆粉中牛磺猪去氧胆酸的平均含量为5.56%±6.33%,5批市售猪胆粉中牛磺猪去氧胆酸的平均含量为0.99%±132.32%,仅有一批符合规定。冷冻干燥法制备的猪胆粉质量优于5批市售产品,冻干技术可用于生产优质猪胆粉。

猪胆粉微生物限度检查方法学验证

目的:建立猪胆粉微生物限度检查方法,并对方法进行验证。方法:采用《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅢC微生物限度检查法对猪胆粉进行微生物限度检查。结果:用pH7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制备样品,可采用培养基稀释法(1:10供试液,0.1ml/皿)进行细菌计数;采用1:10供试液的常规法进行霉菌及酵母菌计数和控制菌检查。结论:该方法消除了样品的抑菌性,可用于该品种的微生物限度检查法。

磁珠特降胶囊中猪胆汁与猪胆粉换算比例的研究

目的：确定磁珠特降胶囊中猪胆汁与猪胆粉的换算比例。方法通过初步实验、确定实验、补充实验研究猪胆汁与猪胆粉的换算比例。结果猪胆汁相对密度范围在：1.0525~1.0538,平均固体得率：11.9%。结论一个猪苦胆平均含有胆汁重量为52.5 g,猪胆汁固体含量为12%（m/m）,即每8.3 g猪胆汁相对于1g猪胆粉。

碱解法与醇提法对猪胆粉中胆酸提取的比较研究

目的 ：提高猪胆粉（Pulvis Fellis Suis）中胆酸的提取效率。方法 ：分别对猪胆粉应用乙醇回流和热碱水解的方法处理猪胆粉,然后酸化、醇溶、干燥得到胆酸提取物,通过改进的胆酸含量测定方法跟踪检测中间环节和终产品中胆酸含量。结果：醇提法得到的胆酸提取物收率为15.02%~50.20%,其胆酸含量为0.62%~3.96%,60%醇提值相对较高,折成纯胆酸提取率为1.99%;碱解法提取物收率37.80%,胆酸含量17.92%,折成纯胆酸提取率为6.77%。结论：碱解法比醇提法更利于胆酸的富集。

脑立清丸中猪胆粉的专属性检查研究

目的:2015版《中国药典》标明脑立清丸中猪胆粉不应有牛、羊胆的鉴别特征。本研究通过对脑立清丸水解前后与牛、羊胆进行薄层鉴别对比,试图建立脑立清丸中不应有牛、羊胆的快速检查方法。结果:本实验对十二个厂家的粉末进行牛、羊胆试验,结果无一家生产企业有牛、羊胆的特征,说明十二家企业原料中均未掺有牛、羊胆现象。结论:薄层鉴别法更加简便,快捷,经济,解决了现行质量标准不能控制以牛、羊胆代替猪胆加工猪胆粉的问题。