褪黑素对猪胎盘滋养层细胞增殖及功能的影响

旨在研究褪黑素对猪胎盘滋养层细胞(porcine placental trophoblast cells,pTr)增殖和功能的影响。不同浓度褪黑素(0、10 nmol/L、100 nmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L)处理pTr细胞48 h后,通过测定细胞数、VEGF、EGF、E2、P4分泌水平及相关基因mRNA表达水平,分析褪黑素对pTr细胞增殖及功能的影响。结果显示,处理48 h时,10μmol/L的褪黑素显著促进pTr增殖(P<0.05),并显著提高VEGF、EGF、E2和P4分泌水平(P<0.05)。与空白对照组相比,10μmol/L褪黑素显著上调MT1、CDK4、SLC2A1、VEGF及EGFR的表达(P<0.05),并极显著上调VEGFR2、EGF、ESR1和PGR的表达(P<0.01)。综上所述,10μmol/L的褪黑素能显著促进pTr增殖,其可能通过与MT1结合直接,或通过上调CDK4、SLC2A1基因表达间接促进pTr细胞的增殖;此外,褪黑素还可能通过上调pTr中生长因子及其受体、类固醇激素受体等基因表达,以及促进生长因子、生殖激素合成和分泌改善猪胎盘功能。

羊和猪胎盘肽的提取

利用超滤法从羊和猪的胎盘中提取胎盘肽,用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE电泳法对其进行初步定性鉴定。成功分离显示出了羊的胎盘肽,其分子质量小于5 ku,与人胎盘肽的分子质量范围完全符合。猪的6 ku的蛋白带很明显,但低于5 ku的蛋白带不是很明显。

猪胎盘脂多糖的分离纯化及其对脾淋巴细胞的诱导作用

健康猪胎盘经酶解,提取,氯仿-正丁醇除杂蛋白与5'-磷酸二酯酶除核酸,再经透析,乙醇沉淀,DEAE-Dextran-Gel A-25层析制得纯品猪胎盘脂多糖(简称P-脂多糖)。分析结果表明,P-脂多糖是一种类酸性粘多糖与脂质的共价结合物,分子量约为75kD,分子中含11种单糖组成,其中半乳糖含量最高,其次为岩藻糖,氨基已糖和已糖醛酸。体外实验发现P-脂多糖能明显诱导小鼠淋巴细胞的增殖,强烈地促进淋巴细胞的DNA合成,刺激指数约为9.3,最适刺激浓度50～60μg/mL,最适刺激时间48小时,同时能明显促进淋巴细胞的蛋白质合成。实验还证实,P-脂多糖对脾淋巴细胞的增殖诱导作用并不是通过依赖于白间素-2(IL-2)途径,而是通过增强淋巴细胞IgM的表达,表明P-脂多糖是一种促B-淋巴细胞分裂剂。

猪胎盘蛋白的分离鉴定

目的分离鉴定猪胎盘蛋白。方法十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)切胶处理猪胎盘提取物后,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行分离鉴定。结果 SDS-PAGE电泳中7条条带最清晰(对应蛋白含有量较高),分子量分别为77.27、68.21、57.85、53.57、46.44、37.16、15.00 k D,分别归属于葡萄糖调节蛋白78、热休克蛋白8、蛋白质二硫键异构酶A3前体蛋白、脯氨酰4-羟化酶β多肽、β细胞骨架肌动蛋白片段、醛糖还原酶、β血红蛋白亚基。结论所首次鉴定出的7个蛋白是猪胎盘增强细胞活力、提高免疫力、抗氧化活性的物质基础,可为相关研究奠定基础。

猪胎盘冻干粉对小鼠免疫功能的促进作用

为探究猪胎盘冻干粉对小鼠免疫功能的影响,将110只6~8周龄的昆明小鼠随机分为空白对照、阳性对照、高剂量实验组、低剂量实验组,采用经口灌胃给药法,连续给药35 d后,测定各组小鼠的胸腺、脾脏等免疫脏器指数、腹腔巨噬细胞的吞噬百分率,和Con A刺激后外周血T淋巴细胞转化率。结果显示:猪胎盘冻干粉高剂量组显著提升小鼠脾脏指数(P<0.05),但对胸腺指数影响不明显(P>0.05);冻干粉所有剂量组的腹腔巨噬细胞吞噬活性及外周血T淋巴母细胞转化率均显著提高(P<0.05),其中雄性组效果更明显,表明猪胎盘冻干粉具有增强小鼠机体免疫功能的作用。

猪胎盘中生物活性肽的制备及含量测定

为测定猪胎盘中胎盘肽含量及其分子质量的大小,试验采用Tricine-SDS-PAGE电泳法和考马斯亮蓝G-250法,分别对6付刚娩出的新鲜猪胎盘的胎盘肽分子质量和含量进行测定,以各重复组测定结果的平均数代表每付胎盘中胎盘肽的含量和相对分子质量。结果表明,6组猪胎盘中胎盘肽分子质量分别为14.219ku、13.801ku、12.012ku、12.357ku、11.326ku及10.197ku,其平均水平为12.31ku±1.51ku;胎盘肽的含量分别为0.67mg/g±0.07mg/g、0.82mg/g±0.03mg/g、0.81mg/g±0.02mg/g、0.70mg/g±0.11mg/g、0.79mg/g±0.03mg/g及0.84mg/g±0.04mg/g,其平均含量为0.77mg/g±0.03mg/g。

亮氨酸对猪胎盘滋养层细胞增殖及氨基酸转运的影响

为研究亮氨酸(Leu)对猪胎盘滋养层细胞(pTr)增殖、凋亡以及氨基酸转运载体表达的影响及其机制,本试验用不同浓度Leu(0、1、10 mmol/L)分别处理pTr细胞24 h和48 h后,使用荧光定量PCR技术检测pTr细胞增殖和凋亡相关基因、氨基酸转运载体以及mTOR信号通路关键蛋白等的mRNA表达水平。结果表明:Leu处理pTr细胞24 h后,1 mmol/L试验组的SNAT1(P<0.01)、4E-BP1 (P<0.05)和eIF4G(P<0.05)的mRNA相对表达量低于对照组;Leu处理pTr细胞48 h后,1 mmol/L试验组LAT1(P<0.05)、4E-BP1(P<0.01)的mRNA相对表达量低于对照组,10 mmol/L试验组CDK4(P<0.05)、4E-BP1 (P <0.01)、SNAT1 (P <0.01)、SNAT2 (P <0.01)、LAT1 (P <0.01)以及rBAT (P <0.05)的mRNA相对表达量也低于对照组;Leu处理pTr细胞24 h和48 h后,10 mmol/L组mTORC1的mRNA相对表达量较对照组和1 mmol/L组均极显著提高(P<0.01)。可见,10 mmol/L Leu会抑制pTr细胞的增殖活力,并可能通过mTOR信号通路的介导,降低了pTr细胞氨基酸转运载体的表达。

猪胎盘粉对哺乳母猪繁殖性能、血清免疫和生殖激素指标及乳成分影响

本试验旨在研究猪胎盘粉对哺乳母猪繁殖性能、血清免疫和生殖激素指标及乳成分的影响。选取36头预产期、体重、胎次相近的经产大×长二元母猪,随机分为4个组,每组9个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础饲粮中添加1%、3%、5%的猪胎盘粉。试验于妊娠104 d开始,至产后21 d结束。结果表明:1)试验Ⅲ组泌乳力、仔猪断奶个体均重和仔猪断奶窝重均极显著高于对照组(P<0.01),试验Ⅱ、Ⅲ组仔猪平均日增重显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),试验Ⅲ组母猪体重损失显著低于对照组(P<0.05)。2)母猪分娩后第3天,试验Ⅱ组血清白细胞介素-6(IL-6)含量显著或极显著高于对照组和试验Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05或P<0.01),试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清免疫球蛋白A(IgA)含量显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅰ组血清免疫球蛋白M(IgM)含量极显著高于对照组、试验Ⅲ组(P<0.01),试验Ⅱ、Ⅲ组血清催乳素(PRL)含量显著高于对照组(P<0.05)。母猪分娩后第15天,试验Ⅰ、Ⅱ组血清IgA含量显著或极显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05或P<0.01),试验Ⅱ组血清免疫球蛋白G(IgG)含量显著或极显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05或P<0.01);试验Ⅰ组血清IgM含量极显著高于对照组(P<0.01)。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清PRL含量极显著高于对照组(P<0.01)。3)试验Ⅲ组乳脂率显著高于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05),试验Ⅱ、Ⅲ组乳糖率显著或极显著高于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05或P<0.01)。由此可见,饲粮中添加猪胎盘粉能改善哺乳母猪繁殖性能、血清免疫和生殖激素指标及乳品质。在本试验条件下,猪胎盘粉的适宜添加量为3%。

猪胎盘结构与功能的营养调控策略

胎盘是联系哺乳动物母体和胎儿的纽带,维持着母体妊娠及调控胎儿的生长发育。掌握猪胎盘的结构和发育特征是精准调控其营养的前提。本文介绍了猪胎盘结构与功能的营养调控策略。

猪胎盘替代紫河车防治老年性痴呆的实验研究

目的观察猪胎盘替代紫河车用于防治老年性痴呆的效果。方法将70只昆明种小鼠分为空白组、模型组、阳性对照组、紫河车低剂量组、紫河车高剂量组、猪胎盘低剂量组、猪胎盘高剂量组,每组10只。以D-半乳糖皮下注射法制备老年痴呆动物模型,空白组不给任何药物,模型组以生理盐水代替受试药,阳性对照组灌胃给予脑复康,紫河车低剂量组、高剂量组分别灌胃给予紫河车28g/kg、4g/kg,猪胎盘低剂量组、高剂量组分别灌胃给予猪胎盘4g/kg、8g/kg。给药6周后,分别运用行为学实验避暗法、跳台法,测定两药对小鼠造模后学习记忆的影响,并测定脑中乙酰胆碱酯酶和单胺类神经递质的含量。结果猪胎盘和紫河车抗老年痴呆作用无统计学差异(P<0.05),在避暗潜伏期试验中,猪胎盘高剂量组的效果明显好于紫河车高剂量组(P<0.01)。两者对单胺类神经递质的影响相近。结论猪胎盘有可能替代紫河车用于防治老年痴呆。

猪胎盘PPARγ编码序列的克隆、序列分析和表达

过氧化物酶增殖物激活受体r(peroxisome proliferator-activated receptor type gamma,PPARγ)对人和小鼠的胎盘形成起重要作用,但在猪胎盘中其编码序列和作用还不明确。为了掌握母猪胎盘PPARγ剪辑方式和准确的编码序列,分析其结构与功能的关系,应用高保真PCR技术从4个不同妊娠时期的7份胎盘样品(61个胎囊)克隆出了一致性的PPARγ目的片段(KM382175),其编码序列和预测蛋白序列与人、鼠、牛、羊的具有较高的相似性;同时发现胎盘PPARγ蛋白与猪卵巢来源和猪皮下脂肪来源PPARγ蛋白在配体结合区分别存在1个和2个氨基酸残基差异。构建pET28α(+)-PPARγ表达质粒,重组蛋白应用兔抗PPARγ和鼠抗His单克隆抗体2种抗体Western blot双重检测阳性。研究表明,妊娠期猪胎盘PPARγ剪辑方式一致(1 428bp),稳定的PPARγ结构对正常生理功能的维持具有重要意义,但配体结合区氨基酸的改变可能意味着组织差异性的存在;本研究同时实现了PPARγ的原核表达,将为进一步研究PPARγ对胎盘的作用及其与母猪产仔性能的关联性提供基础理论指导。

猪胎盘水提物对D-半乳糖诱导衰老小鼠抗氧化及学习记忆调节作用的影响

目的:研究猪胎盘水提物(PPE)对小鼠的抗氧化及学习记忆调节作用。方法:将经D-半乳糖诱导成功的32只衰老小鼠随机分成PPE高、低剂量组、阳性对照组、模型组,分别以PPE 30,20 mg·kg^(-1)·d^(-1)、维生素E 20 mg·kg^(-1)·d^(-1)、0.9%Na Cl溶液20 m L·kg^(-1)·d^(-1)经皮给药,另取8只正常小鼠作为正常对照(0.9%Na Cl溶液20 m L·kg^(-1)·d^(-1)),连续给药6周。给药后每周称量小鼠体重。停药前1周开始采用Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力。第6周末处死小鼠,取腹部皮肤及眼球取血,测量超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量,并观察病理切片。结果:与正常组相比,模型组小鼠水迷宫找到平台所需时间明显延长,小鼠在平台象限内停留时间、停留时间百分比、穿越平台次数均显著降低(P<0.05)。模型组小鼠体重、SOD含量、MDA含量、Hyp含量较正常组均有显著差异(P<0.01,P<0.05),皮肤表皮层不规则,真皮层皱缩,胶原纤维排列紊乱无序。经过PPE治疗后,高、低剂量组小鼠水迷宫找到平台时间明显缩短,小鼠在平台象限内停留时间、停留时间百分比、穿越平台次数均增高;高、低剂量组的体重、SOD含量、Hyp含量均明显上升(P<0.01,P<0.05),MDA含量明显下降(P<0.01,P<0.05);PPE高、低剂量组小鼠的皮肤结构较完整,表皮层规则,真皮层厚度增加,胶原纤维排列整齐。结论:猪胎盘水提物具有抗氧化及改善小鼠记忆力的作用。

酶法水解猪胎盘制备抗氧化肽的工艺优化

采用酶法水解制备猪胎盘抗氧化多肽,比较了胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶和风味复合蛋白酶的酶解效果,确定胃蛋白酶为最佳工艺酶。利用正交设计,研究了酶与底物比、酶解温度及pH对酶解产物还原力和水解度的影响。结果表明:产物还原力最好的酶解工艺条件为酶与底物比13%、酶解温度30℃、pH 2.5。

实施健康养殖技术 提升甲鱼品质效益

万年县海艳特种水产养殖公司创新性地使用生猪养殖废弃物——"猪胎盘"喂养甲鱼,不仅提高了甲鱼品质和养殖效益,有利环境友好,也促进了该县水产业和生猪生产的发展,经济、生态、社会效益齐丰收。

畜牧摘讯

木豆(Cajanus flavns Ds.)属豆科,原产地成为印度,现广植于各热带地,为耐早作物之一,且极易生长,过去一般栽种作为绿肥,种子可食或制豆腐,又可作为糕点之(食舀),也是种猪、断乳仔猪理想的蛋白质饲料(嫩枝叶可作牲畜饲料,用途相当广泛,产量也不低),适于华中、华南、西南各地栽种。

Porcine placental peptides improve neuroblast proliferation and differentiation via enhancement of TrkB and BDNF levels in D-glatacose-induced mouse aging model

Aging affects the nervous system as well as other organs.In our study,we aimed to study the pharmacological effects and mechanism of porcine placental peptides(PPP)in aging process,and to observe the changes of neuroblast proliferation and differentiation as well as partial gene expression in hippocampus of D-galactose-induced aged mouse.Based on the analysis of experimental results,it was confirmed that PPP significantly improved neurobalst proliferation and differentiation in the mouse hippocampal DG by ki-67 and DCX immunohistochemistry.This result showed that PPP had anti-aging effects on D-galactoseinduced aging mouse model.Moreover,we observed up-regulated expressions of BDNF and TrkB proteins and down-regulated expressions of Caspase 3,8,and 9 proteins in the PPP-treated mouse hippocampus.Therefore,our results showed that PPP obviously improved neuroblast proliferation and differentiation,and its anti-aging effect might berelated to down-regulation of apoptosis-related proteins,including Caspase 3,8,and 9,via BDNF/TrkB pathway.Our findings provided valuable evidence for its applications in the health and medicine sectors.