猪naive-like胚胎干细胞向神经细胞体外诱导分化

目的:将猪naive-like胚胎干细胞体外定向诱导分化为神经细胞,为猪多能干细胞诱导神经分化方法的建立提供参考。方法:利用小分子化合物β-巯基乙醇、B-27、肝素等组成的神经诱导培养液,采用直接分化法,分化得到神经样细胞,对其进行神经特异性基因表达鉴定,同时检测分化后的细胞是否已经丧失多能性。结果:分化所得到的神经细胞具有明显的神经细胞结构特征,RT-PCR和免疫荧光结果显示分化后的神经细胞表达多种神经细胞特异性基因,qPCR结果显示分化后多能因子的表达显著降低,神经特异性基因表达显著升高,免疫荧光结果经统计分析后显示,低分子量神经微丝蛋白(light neurofilament protein,NF-L)阳性细胞率可达79%。结论:成功实现了体外直接诱导猪naive-like胚胎干细胞向神经细胞分化,为神经系统疾病修复与治疗研究奠定了基础。

家畜iPS技术研究与应用

对建立猪和牛的胚胎干细胞系(Embryonic stem cells,ESCs)的条件进行了摸索和优化,建立了良好的胚胎培养体系、内细胞团分离方法和饲养层的选择;另外分别建立猪和牛的诱导性多能性干细胞系(induced pluripotent stem cells,i PS),并分别对其进行了鉴定;对目前的培养体系进行了优化提高了i PS的效率和发育潜能;尝试以i PS为供体细胞进行核移植,以期获得i PS来源的动物种群。