荧光相图法研究猪胰腺α-淀粉酶在脲和盐酸胍溶液中的去折叠过程

用荧光相图法分别研究了脲和盐酸胍诱导的猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程。实验结果表明,当脲作为变性剂时,无论变性体系中有无还原剂2-巯基乙醇存在,猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程均只出现一个部分折叠中间体,符合“三态模型”;当盐酸胍作为变性剂时,若变性体系中存在还原剂2-巯基乙醇,猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程符合“三态模型”,而若变性体系中不存在还原剂2-巯基乙醇,猪胰腺α-淀粉酶的去折叠过程会出现两个部分折叠中间态,此过程符合“四态模型”。

红茶和绿茶多酚对猪胰腺α-淀粉酶抑制效果的动力学研究

目的:研究红茶和绿茶抑制剂对猪胰腺α-淀粉酶催化水解淀粉的抑制效果和特异性。方法:实验在25℃和pH6.9条件下进行。混合0.7 mL不同浓度的淀粉和0.2 mL红绿茶(7.5 g/L),添加0.1 mLPPA(0.04 g/L),进行5 min孵化反应。通过SmartSpec Plus Spectrophotometer不间断540 nm波长下,测量PPA催化生成的麦芽糖的吸光度增加值。通过动力曲线的直线段斜率获得反应速度,动力学参数(Vmax和Ks)由Lineweaver-Burk图求出,抑制类型通过统计学分析确定。结果:无抑制剂和红茶抑制剂的最大反应速度(Vmax)之间的差异具有统计学意义(P<0.05),无抑制剂和绿茶抑制剂的酶-底物解离常数(Ks)之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。红茶抑制剂解离常数(Ki)值高于绿茶(P<0.05)。结论:红茶抑制为非竞争抑制型,绿茶抑制为竞争抑制型。红茶抑制剂既能与自由酶活化中心位点结合,也能与酶-底物上的位点结合,而绿茶抑制剂仅能与活化中心位点结合。

山莓果实不同极性萃取物降血糖作用研究

目的:研究山莓果实不同极性萃取部位的降血糖作用,筛选出最佳活性部位,为其降血糖活性成分研究及综合开发利用提供实验数据和科学依据。方法:采用超声提取法得到山莓果实乙醇粗提物,后用不同极性的溶剂进行萃取,得到4个不同极性萃取部位(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水层);采用α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶抑制模型评价不同极性萃取物降血糖活性。结果:在降血糖作用中,正丁醇层对α-葡萄糖苷酶活性、猪胰腺α-淀粉酶活性抑制效果最好,其IC_(50)分别为(0.186±0.00503)mg/mL、(2.269±0.04876)mg/mL。结论:山莓果实4个萃取部位均具有一定降血糖作用,降血糖作用的最佳极性部位为正丁醇层。