猪脑心肌炎病毒病的诊断与综合防治

猪脑心肌炎是一种由脑心肌炎病毒引起的猪类传染病,该病可以感染不同年龄的猪,在不同的养殖场与不同养殖模式下,发病概率与致死率也存在差异性,仔猪感染后危害严重。临床主要特征为心肌炎、脑炎。该病毒的宿主为灵长类动物、野生动物与啮齿类动物。该病死亡率较低,但对仔猪的生长发育影响较大,造成猪群养殖周期延长,若不及时采取防控措施,易造成继发感染,对该病的诊断与防治工作增加难度。因此,饲养管理人员应全面掌握该病的流行动态,采取有针对性的防控措施。

天麻猪脑酒的酿造工艺研究

以黑米为主要原料,添加天麻、猪脑共同发酵,制成营养丰富、保健性强的天麻猪脑酒。探讨了产品的发酵工艺条件和配方。

猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定

从规模化猪场疑似病例组织病料中分离到5株脑心肌炎病毒（EMCV），对其中的2株（EMCV BJC3和EMCV HB1）进行了系统鉴定。结果表明，病毒粒子大小约为27nm，呈圆形；2株病毒均不耐酸，对氯仿不敏感，对胰蛋白酶敏感性有所不同，60℃加热1h可被灭活，二价阳离子对病毒没有明显的保护作用。用EMCV多克隆抗体作间接免疫荧光，分离毒株感染的BHK-21细胞的胞浆中可见特异性荧光。对分离毒株进行了VP1和3D基因的扩增和序列测定，结果表明，2个毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为99．49％，氨基酸序列的同源性为98．46％，与GenBank中EMCV毒株的核苷酸序列同源性介于81．61％～99．59％，氨基酸序列同源性在95．5％以上；3D基因扩增片段序列与其它毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100％。基于VP1基因的系统进化树表明，2株分离毒均位于进化树的主干上，变异度不大。由此表明，EMCV感染已在我国猪场存在。

猪脑心肌炎病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

利用纯化的猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,获得了2株稳定分泌抗EMCV VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为10B和11D。经ELISA测定,2株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1∶1 600和1∶800,接种小鼠的腹水效价分别为1∶2.56×106和1∶1.28×106。2株单抗的亚类均为IgG2a,均能特异性识别重组VP1蛋白,但它们识别VP1蛋白的不同表位。间接免疫荧光和免疫组织化学试验证实,2株单抗具有良好的特异性,均能够识别EMCV。

猪脑中提取高纯度神经节苷脂

应用凝胶层析和离心液相层析法，从猪脑中提取高纯度神经节苷脂（Ｇｌｓ）．按脂结合唾液酸（ＬＢＳＡ）计为３０．１％，经硅胶薄层层析，５８０ｎｍ扫描结果表明含５种Ｇｌｓ，即：ＧＭｌ为１９．５％，ＧＤ３为１３．８％，ＧＤｌａ为２７．８％，ＧＤｌｂ为１４．２％和ＧＴｌｂ为１９．３％。

猪脑乙酰胆碱酯酶的分离纯化和性质研究

通过离心、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和Superdex-200层析等步骤,从猪脑中获得电泳纯乙酰胆碱酯酶,该酶比活力和纯化倍数分别为2.05 U/mg和26.97,酶活回收率为11.95%;该酶分子质量为257.30 kD,亚基为66.94 kD;以碘化硫代乙酰胆碱为底物时,酶的最适反应温度为37 ℃,最适pH值为7.4,且在40 ℃以下,pH 6.0～8.0有较好的稳定性;最适底物浓度为4.0 mmol/L,Km为0.94 mmol/L。Ba2+和Zn2+对该酶有强烈的抑制作用,而低浓度Mg2+对该酶有激活作用。

复方猪脑肽节苷脂减轻宫内缺氧后新生小鼠脑损伤并促进小脑肽4(CBLN4)表达

目的研究复方猪脑肽节苷脂(CPCGI)对宫内缺氧后新生小鼠脑损伤及小脑肽4(CBLN4)表达的影响。方法15只健康成年昆明鼠孕鼠随机分为3组:对照组3只,模型组和CPCGI处理组各6只。自孕14 d开始,CPCGI处理组和模型组的孕鼠置入动物缺氧箱内,制作宫内缺氧动物模型。待孕鼠分娩后,CPCGI处理组和模型组的新生小鼠经腹腔分别注射CPCGI(1 mL/kg)和PBS治疗,对照组不进行任何处理。产后40 d开始,采用小鼠跳台实验检测其记忆能力。小鼠跳台测试结束后,取出小鼠的脑组织,免疫荧光组织化学染色法检测小鼠大脑皮质神经元特异性烯醇化酶(NSE)、白细胞介素1β(IL-1β)、CBLN4和突触素(SYN)的表达;Western blot法检测海马组织CBLN4蛋白表达。结果与对照组比较,缺氧导致新生小鼠学习记忆能力明显下降,CPCGI能明显改善鼠的记忆力。缺氧后新生小鼠脑NSE、CBLN4和SYN表达明显减少,IL-1β表达明显增多;CPCGI处理组NSE、CBLN4和SYN表达明显高于模型组,IL-1β表达明显低于模型组。结论CPCGI可减轻缺氧后新生小鼠神经元的损伤,可能与减弱IL-1β的表达,促进突触的重建相关。

我国不同地区猪脑心肌炎和细小病毒流行病学调查

猪脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）属于小RNA病毒科、心病毒属成员,能引起猪以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染病[1-3]。EMCV感染的妊娠母猪则以流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍为主要特征,其他猪多呈隐性感染状态[4-6]。目前,多个国家和地区不时的报道了该病发生和流行[6-8]。猪细小病毒（Porcineparvovirus PPV）是引起猪繁殖障碍的一个非常重要的病原体之一。

猪脑组织总神经节苷脂提取纯化工艺的研究

本文较详细地研究论述了神经节苷脂（Ｇｌｓ）的提取纯化工艺。从猪脑组织中用萃取法获得Ｇｌｓ后，用多孔型弱碱性离子交换树脂３３５和强碱性离子交换树脂７１７对其进行分离纯化，并对工艺过程及产品品质进行了分析和比较研究，实验证明：３３５离子交换层析分离Ｇｌｓ，得率６５．９ｍｇ／１００ｇ湿组织，纯度８０．３％；７１７离子交换层析分离Ｇｌｓ，得率７７．４ｍｇ／１００ｇ湿组织，纯度７６．９％；从工艺过程及产品品质而言，采用多孔型弱碱性离子交换树脂分离提取Ｇｌｓ，具有一定的经济价值。

猪脑蛋白水解物注射液的多种氨基酸含量分析

本文介绍用反相高压液相色谱法分析猪脑蛋白水解物注射液中的游离氨基酸及其含量。游离氨基酸通过邻苯二甲醛和3-巯基丙酸为衍生化试剂柱前衍生，扩展的ODS柱(pH值2～11)分离，340nm紫外检测器检测，多种氨基酸均得到较好的分离，定量结果准确度较高。 在许多领域尤其是药物中，氨基酸分析的重要性日益增加。虽然大部分氨基酸很难直接进行检测，需要经过化学衍生化后再用荧光和紫外检测器进行……

猪脑水解液的制备及其生物学活性研究

研究了猪脑水解液的制备及其生物学作用。结果表明:猪脑水解液含有17种氨基酸,其中包括8种必需氨基酸,总氨基酸含量为10493.9mg/L。实验组小鼠服用本品6天后,避暗试验和跳台试验的错误率明显下降(P<0.01),实验组大鼠服用28天后其脑重和雌性大鼠实验组血红蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),雌性实验组大鼠在游泳30min后,血乳酸含量明显低于对照组(P<0.05)。提示猪脑水解液不但对脑营养价值高。

猪脑心肌炎疫苗研究进展

近年来,猪脑心肌炎在一些国家和地区暴发,不仅给养猪业造成了巨大的经济损失,而且还威胁到人类的生命健康,以疫苗免疫为主要手段的防控措施日渐得到广泛关注。高效安全的猪脑心肌炎新型疫苗一直是科研人员关注的焦点,大量的新型疫苗由此而生。目前,亚单位疫苗、核酸疫苗、基因缺失疫苗以及载体疫苗被公众认为是可以考虑作为替代传统疫苗的新型疫苗,论文介绍了当前猪脑心肌炎疫苗的应用现状和新型疫苗的开发研究进展。

猪脑心肌炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二重RT-PCR检测方法的建立

根据猪脑心肌炎病毒(EMCV)3D基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因序列设计合成了两对特异性引物,经过PCR反应条件的优化,建立了EMCV和PRRSV二重RT-PCR方法,其PCR产物大小分别为286 bp和390 bp,并具有EMCV和PRRSV特征序列。该方法对EMCV和PRRSV的最低检测量分别为10×TC ID50和1×TC ID50;而对乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒的PCR检测结果均为阴性;20份临床发病仔猪样品检测结果为PRRSV阳性者15份,EMCV阳性者3份,证明我国存在EMCV感染。该方法敏感、特异,可用于EMCV和PRRSV感染的检测。

TaqMan实时荧光RT-PCR检测猪脑心肌炎病毒方法的建立与应用

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)基因组保守区域,设计并合成了特异性引物和TaqMan探针,建立了EMCV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法。通过常规RT-PCR方法扩增EMCV保守序列并将其连入pMD19-T载体,制备阳性标准质粒,优化反应条件,以10倍梯度稀释的标准品绘制标准曲线,EMCV标准曲线的相关系数为0.999。结果显示,该方法检测灵敏度达到10拷贝/μL,对猪捷申病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒检测结果均为阴性。方法重复性好,批内和批间变异系数均小于2%。检测采集自上海供港猪场、进境美国种猪、加拿大、法国种猪的血清样本145份,EMCV核酸的检出率国内猪场53.6%,美国猪检出率为27.6%,加拿大猪检出率为20%,法国猪检出率为26.7%。EMCV实时荧光RT-PCR方法的建立为该病的快速诊断和流行病学调查提供了有效手段。

猪脑硫氧还蛋白还原酶基因片断的序列分析

目的 :在猪脑细胞中分离并克隆硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因片段 ,以人脑TR基因片段为参照比较分析 ,探讨选择猪作为研究TR基因功能实验动物模型的可能性。方法 :(1)进行逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR) ,获得TR基因cDNA ;(2 )插入pGEM T载体 ,转化至大肠杆菌 ;(3)筛选并鉴定阳性克隆 ,纯化重组子并测序 ;(4 )将测序结果与人脑TR基因序列比较。结果 :(1)获得了一个 6 0 6bp大小的猪脑细胞TR基因片段 ,含有 196个氨基酸。(2 )猪脑TR基因片段序列与基因库中的人脑TR基因序列有 88%同源性 ;(3)猪脑TR氨基酸序列中有 18个氨基酸与人脑TR不同 ,同源性为 90 %。结论 :猪与人TR基因的同源性较大 ,选择猪作为研究TR功能的实验动物有一定的可能性。

猪脑中提取胆甾醇的工艺研究

目的:研究从猪脑中提取胆甾醇的制备工艺。方法:采用正交试验法,以胆甾醇得率为指标对丙酮用量、提取时间、提取次数进行提取条件筛选,并采用化学反应法对产品进行定性鉴别。结果:优选工艺条件确定为提取3次,提取时间1 h,丙酮用量为5倍。定性鉴别显色稳定、特征明显。结论:本工艺条件温和、操作简便、重现性好,适合工业化生产。

伪狂犬病猪脑组织MDA和SOD活性的变化

对感染伪狂犬病病毒 ( PRV)猪脑组织的 MDA含量和 SOD活性进行了检测。结果显示 ,猪感染 PRV后脑组织 MDA含量普遍升高 ,顶叶、额叶、小脑、扣带回和海马与对照组比较 ,差异显著 ( P<0 .0 5) ;SOD活性与对照组相比额叶升高 ( P<0 .0 5) ,而扣带回、海马显著降低 ( P<0 .0 5)。结果提示 ,自由基介入了

猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定

猪脑心肌炎是由脑心肌炎病毒(EMCV)引起猪的以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要临床特征的急性传染病。本试验从河北地区的发病猪场的疑似病料中,分离到1株致BHK-21细胞病变的病毒,命名为BD2,用RT-PCR扩增EMCV的3D基因,进行琼脂糖凝胶电泳,结果出现清晰的条带。初步鉴定该分离株为猪脑心肌炎病毒。

猪脑提取物对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的保护作用

目的观察猪脑提取物对痴呆大鼠学习记忆的影响,并探讨其作用机制。方法海马CA1区微量注射喹啉酸造成Alzheimer病(AD)大鼠。将大鼠随机分成假损伤组、对照组、猪脑提取物组、猪脑提取物预防给药组及阳性药脑活素组。肌肉注射给药,连续给药30d。采用Y-迷宫和被动回避性跳台法测定大鼠的学习记忆水平;分光光度法测定大脑皮质MDA的含量,及海马的NO的含量和NOS的活性。结果与对照组大鼠相比,给予猪脑提取物第10,20,30天后,大鼠迷宫、跳台的错误次数明显减少;给药30d后,大鼠大脑皮质MDA,海马NO含量和NOS活性明显降低。结论猪脑提取物可提高痴呆大鼠学习记忆能力,其作用机制与其降低大鼠脑内的MDA、NO、NOS有关。