一例猪蓝耳病病毒与圆环病毒共感染诊断与防治

该文介绍福建省平和县某生猪规模养殖场发生一起以妊娠母猪流产、断乳仔猪出现明显的呼吸道症状为主要特征的疾病,且出现不同程度死亡,根据发病情况、临床症状、剖检病变和实验室检查,最终确诊为猪蓝耳病病毒与猪圆环病毒共感染,并提出了相应的综合防治措施,病情得到有效控制。

猪蓝耳病病毒与猪流行性腹泻病毒混合感染的诊断

2022年4月湖南省常德某猪场仔猪出现腹泻症状,为确定其发病原因,采用流行病学调查、临床剖检、RT-PCR检测、序列分析等方法进行综合诊断。结果表明,该猪场4头仔猪感染猪蓝耳病病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),其中3头仔猪为PRRSV与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)混合感染。该发病猪场的疫苗免疫效果欠佳,需采取针对性的综合防治措施。

高致病性猪蓝耳病病毒GS/LZh/07株的分离、鉴定及其非结构蛋白Nsp2基因特性分析

将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,发现所扩增到的Nsp2基因有90个核苷酸的缺失。序列比对结果表明:该分离病毒Nsp2基因与经典毒株PRRSV-ch-1a核苷酸同源性为83.0%,氨基酸同源性为72.7%;与高致病性变异毒株NX和SD核苷酸同源性为95.5%,氨基酸同源性为90.9%,可见该毒来源于2006-2007年流行毒株,说明高致病性猪蓝耳病变异病毒已经在甘肃省存在。该毒株的成功分离为高致病性猪蓝耳病流行病学调查分析提供数据,也为预防控制该病积累了资料。Nsp2的特性分析为揭示高致病性猪蓝耳病PRRSV在甘肃省的流行特点提供参考。

美洲型猪蓝耳病病毒高致病性变异株RT-LAMP检测方法的建立

设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好,检测猪瘟、伪狂犬病和细小病毒等均未出现交叉反应。结果表明,建立的美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株RT-LAMP检测方法具有特异、灵敏、高效和简便的特点,在我国猪蓝耳病快速检测领域将有广阔的应用前景。

我国高致病性猪蓝耳病病毒的演化分析

自2006年以来,我国大面积暴发高致病性猪蓝耳病,但目前对其病原HP-PRRSV的起源还不得而知。本试验通过对多株HP-PRRSV进行全长基因组分析,发现HP-PRRSV中存在4处缺失,而且这4处缺失是逐步形成的,在中间过渡类型的毒株中存在着缺失1处、2处、3处的毒株。此外,中间过渡类型毒株中的一些氨基酸基序也是逐步变化的。本试验初步阐明了我国HP-PRRSV的起源是CH-1a-like PRRSV,在中间过渡的毒株中能够发现逐步演变的轨迹。

近十七年来我国猪蓝耳病病毒研究文献评析

评析了2004—2020年中国知网收录的5377篇关于猪蓝耳病病毒文献的发表时间、期刊分布、研究机构、作者发文量、研究内容及对象等。结果表明,受2006年猪蓝耳病在国内的大范围暴发影响,2007年相关文献激增,其余年份发文量整体呈稳定状态;发表文献数大于60篇的期刊有15家,发文量占收集文献总数的31.69%;排名前10位的研究机构有9所大学,1所科研院所;大多数作者的发文量在6~8篇,发文量大于12篇的作者仅占极少数;研究内容和对象分别以疫苗和美洲型高致病性猪蓝耳病病毒为主。

猪蓝耳病病毒变异株TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR鉴别诊断方法的建立

根据GenBank收录的PRRSV基因序列,设计一对引物F、R和一条TaqMan荧光探针P,建立了猪蓝耳病病毒荧光RT-PCR检测方法。该方法敏感性比常规的RT-PCR高100倍,对PRRSV细胞培养物的检测下限可以达到2个TCID50,能特异检测出蓝耳病病毒,并且可以鉴别诊断PRRSV变异株和经典株,同时根据灵敏度试验建立的标准曲线,能够对PRRSV RNA进行相对定量。

浅谈猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪蓝耳病病毒的致病机理

目前的猪病由原来的单一病原转变为多因子协同作用,给我国的养猪业造成很大的损失,严重影响养猪业的发展。猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪蓝耳病病毒混合感染成为许多猪场面对的难题,而了解病毒的致病机理对于疾病防制有着积极的指导作用,从而为开展猪病防制工作提供帮助。

猪蓝耳病病毒在白纹伊蚊体内增殖可能性研究

为验证白纹伊蚊是否为猪蓝耳病病毒(PRRSV)的生物性传播媒介,本研究选取PRRSV GY株细胞培养物与等量新鲜猪血混合,给予白纹伊蚊自由吸食,采集不同时间段及不同世代蚊虫样本,提取病毒RNA,采用PRRSV N基因特异性引物进行RT-PCR检测,同时超薄切片和电子显微镜观察,结果显示:(1)白纹伊蚊吸染PRRSV后0h、6h、12h、18h和24h成蚊样本可以检测出PRRSV N基因特异性片段(大小为240bp),而在30h、36h、42h、48h、120h和168h后成蚊样本均未能检测出该片段;(2)吸染PRRSV后成蚊的蚊卵在其孵育24h、48h、96h和168h幼虫/蛹虫及其24h与72h成蚊,均未检测出PRRSV N基因特异性片段;(3)吸染PRRSV后的12h、24h、48h和120d成蚊样本中均未能观察到PRRSV病毒粒子。这些结果表明,PRRSV不在白纹伊蚊体内进行增殖和世代传递,白纹伊蚊只是PRRSV的一种机械性携带媒介。

高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV)的分子生物学研究进展

本文简述高致病性猪蓝耳病目前的发病情况,病毒分子结构特征和遗传变异分析,以及今后对该病的诊断和防治做一简要阐述。

一例猪蓝耳病病毒与产硫球链菌混合感染的报道

为了确认某养猪合作社仔猪发病的病原,采用PCR检测方法及细菌分离鉴定的方法进行病原鉴定。结果为猪蓝耳病病毒与产硫球链菌混合感染,加大了猪蓝耳病病毒造成的危害。在畜牧兽医上的报道少之又少,属于罕见菌。建议对于此类罕见菌,猪场不必要进行免疫接种,应该在饲养管理上提高重视程度,做好日常消毒工作,同时选择敏感抗生素进行治疗。

一例由猪蓝耳病病毒引起的呼吸道疾病的诊治报告

本文介绍了一例由蓝耳病病毒引起的猪呼吸系统疾病的案例,通过了解猪群的发病状况及疫苗免疫背景,检测猪群伪狂犬gE抗体、猪瘟抗体、蓝耳病抗体,综合分析三种疾病的感染情况,做出诊断,制定了防控措施,控制了病情,减少了经济损失。

北美洲型猪蓝耳病病毒高频重组热点的分布

猪蓝耳病,即猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS),是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)引起的一种重要传染病,临床上主要表现为妊娠母猪的繁殖障碍、各种年龄阶段猪的呼吸道症状和死亡。该病在世界各养猪国家流行,给养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV可分为两个基因型,即欧洲型PRRSV和北美洲型PRRSV,又称为PRRSV-1和PRRSV-2,二者基因组的核苷酸同源性约为60%。PRRSV-2流行区主要为北美洲和亚洲,GenBank中超过80%的PRRSV-2基因组序列来自中国和美国。

某规模猪场控制猪蓝耳病病毒与圆环病毒混合感染的经验及具体方案

本文以猪蓝耳病病毒与圆环病毒混合感染的某规模猪场为实验对象,采用疫苗和联合用药的方法控制蓝耳病的流行,收到了满意效果。

桂林市高致病性猪蓝耳病病毒流行株Nsp2基因片段的遗传变异分析

为了解桂林市高致病性猪蓝耳病病毒流行毒株的遗传变异情况及分子流行病学背景，筛选我市保存的2份PRRSV阳性病料进行Nsp2基因序列的测定与分析。结果表明，该研究中的两个基因片段的核苷酸序列同源性为96．2％，两者间推导的氨基酸序列同源性为95．3％，与14个参考毒株比较，核苷酸同源性达到81．9％-98．1％，推导的氨基酸序列同源性达到76．2％-97．5％。与传统毒株相比较，在第481位和第532—560位不连续缺失30个氨基酸，与国内其他变异毒株的缺失情况一致。从遗传进化方面分析，我市目前流行的高致病性猪蓝耳病毒株与JXA1及TJ等毒株具有相似来源。

猪混合感染圆环病毒Ⅱ型与蓝耳病病毒的诊断及防治

猪感染猪圆环病毒后,免疫系统受损,形成免疫抑制,导致免疫缺陷,在临床上常引发其它病原体混合感染。某猪场发生了圆环病毒Ⅱ型与蓝耳病病毒混合感染的病例,经临床诊断和病毒核酸检测,采取相应的隔离、治疗、保健、消毒等防治措施,取得了良好的防治效果。

猪瘟和猪蓝耳病病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）和猪蓝耳病病毒（Porcine respiratory and reproductivesyndrome virus,PRRSV）多重RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据GenBank中登录的CSFV和PRRSV疫苗株基因组序列,分别设计针对CSFV和PRRSV的两对引物,建立多重RT-PCR检测方法,并进行敏感性及特异性验证。用建立的多重RT-PCR法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料,并与市售RT-PCR试剂盒的检测结果进行比较;检测病料的部分PCR产物测序后,与9株具有代表性的CSFV毒株和10株具有代表性的PRRSV毒株进行核苷酸序列同源性比对。结果以CSFV和PRRSV混合引物扩增,分别可扩增出286和664 bp的特异性条带。建立的多重RT-PCR检测方法可检出100倍稀释的病毒RNA;该方法可检出CSFV、PRRSV及CSFV与PRRSV混合病毒,而猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Trans-missible gastro-enteritis virus,TGEV）、猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）、猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）和猪伪狂犬病病毒（Porcine pseudorabies virus,PRV）的检测结果均为阴性;该方法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料的结果与市售RT-PCR试剂盒比较,灵敏度达100%;选取的两份CSFV扩增片段与9株具有代表性的CSFV毒株的核苷酸序列同源性在92.3%~98.2%之间,扩增的PRRSV与10株具有代表性的PRRSV毒株的核苷酸序列同源性在94.1%~97.9%之间。结论成功建立了CSFV和PRRSV多重RT-PCR检测方法,为猪瘟和猪蓝耳病的早期诊断及流行病学调查奠定了基础。

猪蓝耳病病毒RT-LAMP快速可视化检测方法的建立

为建立能快速检测猪蓝耳病病毒(PRRSV)的检测方法,本研究根据基因库中PRRSV非结构蛋白NSP2基因的保守序列,设计了一套特异性环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了PRRSV的RT-LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达10 copies RNA,高于常规PCR方法 10倍;全部反应可以在50 min内完成;可通过肉眼观察钙黄绿素(calcein)颜色变化直接判定结果;对其它常见病原体的检测结果均为阴性,同时应用实时浊度仪对反应体系浊度及浊度的变化速率进行实时测量,结果相一致。结果表明建立的RT-LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可用于PRRSV感染的快速检测。

我国五省区部分猪场高致病性猪蓝耳病毒感染情况检测与分析

对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析。结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平均74.6%。屠宰场的检出率平均44%,混合感染主要以二重感染为主,且发病场较屠宰场严重。对获得的13株HP-PRRSV ORF5进行测序分析,发现序列长度均为603 bp,未见缺失或插入,仅在9 aa^29 aa存在点突变;序列比较发现,与普通株标准序列VR-2332株核苷酸同源性达85.9%~87.2%;与高致病性毒株的同源性JXA1-06核苷酸同源性达96.0%~99.0%。而其推导氨基酸序列与普通型、高致病性毒株的同源性分别为87.1%~88.1%和97.5%~98.0%。从遗传进化以及变异情况看,获得的PRRSV ORF5序列均为与JXA1类似的高致病性PRRSV序列,与JXA1和HB-1同属美洲型中的一个亚群。

种公猪精液中猪瘟和蓝耳病病毒混合感染的快速检测

参考GenBank公布的猪蓝耳病病毒(PRRSV)VL 2332株、LV株以及猪瘟兔化弱毒(CSFV)C株的基因序列,各设计合成了一对引物,建立了在相同PCR扩增条件下能同时检测PRRSV和CSFV的RT-PCR方法.对2003～2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的17个大中型猪场送检的186份种公猪精液进行了检测,结果18份呈PRRSV阳性,24份呈CSFV阳性,其中有11份为PRRSV和CSFV的混合感染,约占送检精液样品的5.91%.试验结果表明,所建立的RT-PCR方法可用于精液中这2种野毒感染的快速鉴定和分子流行病学调查.