脱细胞猪角膜基质深板层移植治疗感染性角膜炎的疗效观察

目的:评价脱细胞猪角膜基质深板层移植治疗感染性角膜炎的有效性、安全性。方法:前瞻性研究。收集2017-02/2020-10在我院经药物保守治疗无效的感染性角膜炎患者17例17眼,应用脱细胞猪角膜基质进行深板层角膜移植手术。术后随访6 mo,观察BCVA、角膜上皮愈合情况、角膜透明情况,并记录有无感染复发以及植片排斥。结果:所有患者中均顺利完成深板层角膜移植手术,均未发生术中并发症,无失访病例,术后角膜感染均得到有效控制。术后BCVA均较术前改善(P<0.05)。17眼中16眼术后1 mo上皮完全覆盖角膜植片,仅1眼上皮未完全愈合,为病毒性角膜炎的反复发作。术后1.5 mo所有患者上皮均完全愈合。术后1 mo角膜水肿开始改善,其中1眼角膜植片轻度混浊,16眼中重度混浊;术后3-6 mo角膜透明度稳定,至术后6 mo时4眼完全透明,6眼轻度混浊,6眼中度混浊,1眼重度混浊。随访过程中,无感染复发,有1眼发生眼压升高现象,经治疗后眼压恢复正常。结论:脱细胞猪角膜基质深板层移植治疗感染性角膜炎,不仅能有效控制感染,缓解患者角膜刺激症状,恢复角膜的解剖与功能,而且能维持良好的透明性,提高患者视力,可作为替代同种异体人角膜。

脱细胞猪角膜基质体外支持角膜上皮和基质细胞的生长(英文)

目的：探讨脱细胞猪角膜基质体外能否支持兔角膜细胞的生长。方法：体外培养兔角膜上皮细胞和基质细胞,并接种到制备的脱细胞猪角膜基质上,倒置相差显微镜和组织学观察细胞生长情况。结果：上皮细胞能在脱细胞猪角膜基质上贴附生长,10d时可形成2～3层的复层结构。基质细胞在脱细胞猪角膜基质上贴附生长后可向材料深层迁徙。结论：制备的脱细胞猪角膜基质体外可支持兔角膜上皮细胞和基质细胞的生长。

脱细胞猪角膜基质体外支持皮肤细胞生长的实验研究

目的探讨脱细胞猪角膜基质体外是否支持皮肤细胞的生长。方法制备脱细胞猪角膜基质(前期实验已完成)。体外培养人皮肤表皮细胞和成纤维细胞,取第3代人皮肤成纤维细胞接种在脱细胞猪角膜基质的中间基质面,培养3d后,将材料翻转,取第3代人皮肤表皮细胞接种在材料的上皮面上,再培养10d后,取细胞-支架复合体制作石蜡切片,HE染色后光镜下观察。结果组织学观察显示皮肤的表皮细胞和成纤维细胞体外均可在脱细胞猪角膜基质上黏附生长。接种10d后,皮肤表皮细胞在材料表面形成复层结构,可见角化的细胞。接种13d可见成纤维细胞存活并在支架层间生长。结论脱细胞猪角膜基质有良好的细胞相容性,在体外能支持皮肤细胞的生长和增生。

脱细胞猪角膜基质支架的制备及其生物相容性

背景:研究发现多种生物材料可制备角膜基质支架且具有良好的生物相容性,而关于脱细胞猪角膜基质支架的制备和生物相容性研究不多。目的:制备脱细胞猪角膜基质支架,探讨其与人角膜基质细胞的生物相容性。方法:制备脱细胞猪角膜基质支架及其浸提液。取生长状态良好的人角膜基质细胞,分别以脱细胞猪角膜基质支架浸提液(实验组)、完全培养基培养(对照组)培养,培养后1,2,3 d,采用MTT法检测人角膜基质细胞的增殖;将人角膜基质细胞直接接种于脱细胞猪角膜基质支架上,接种1,3,7 d,采用免疫化学法测定人角膜基质细胞在支架内的生长情况。结果与结论:(1)随着时间的增加,实验组与对照组人角膜基质细胞数量不断增加,两组不同时间点的吸光度值比较差异无显著性意义;(2)人角膜基质细胞在脱细胞猪角膜基质支架上生长良好,细胞整联蛋白β1、波形蛋白、乙醛脱氢酶3A1呈阳性表达,CD34、CDK2和K-Ras蛋白也呈阳性表达;(3)结果表明,脱细胞猪角膜基质支架无细胞毒性,与人角膜基质细胞具有良好的生物相容性。

复合自体脂肪干细胞的脱细胞猪角膜基质移植治疗兔角膜碱烧伤

目的:研究复合脂肪干细胞的脱细胞猪角膜基质对碱烧伤角膜的治疗效果。方法:制备晾干的脱细胞猪角膜基质,取第3代体外培养的兔自体脂肪干细胞,体外种植到脱细胞猪角膜基质上,培养3d后用于板层角膜移植。结果:板层角膜移植2mo后,术眼角膜基本恢复透明,未发生排斥反应,新生血管较少,3mo后新生血管基本消退。结论:复合自体脂肪干细胞的脱细胞猪角膜基质对兔碱烧伤角膜具有良好的修复能力。

小鼠胚胎干细胞条件培养液培养的人角膜内皮细胞在脱细胞猪角膜基质上单层细胞片的构建

背景 目前角膜供体来源短缺,且体外培养的人角膜内皮细胞（HCECs）难以再生和扩增,为临床上角膜移植的开展带来了很大困难,组织工程角膜的构建仍是研究的主要课题.前期研究已证实,小鼠胚胎干细胞条件培养基（ESC-CM）能够促进体外HCECs的增生,脱细胞猪角膜基质（APCS）是较好的支架材料,但ESC-CM培养的HCECs是否能在APCS上融合成单层细胞鲜见研究. 目的 研究ESC-CM培养的HCECs在APCS上是否能够形成单层细胞. 方法 用小鼠ESC-CM培养液培养小鼠ES-E14细胞,收集培养上清液,离心后按体积比1∶3与人角膜内皮细胞培养液（CEM）混合,制备体积分数25％ ESC-CM液.取穿透角膜移植术后剩余的供体人角巩膜缘组织,采用组织块培养法用ESC-CM对HCECs进行培养和传代,采用逆转录PCR法检测HCECs中Ⅷ型胶原蛋白（ColⅧ）与神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达以鉴定细胞.取猪角膜,利用磷脂酶A2和碳酸氢盐溶液脱细胞法制备APCS,将第2代HCECs混合液按照800/mm2的密度种植于灭菌的APCS上进行培养,于倒置相差显微镜下观察细胞形态,采用苏木精-伊红染色法观察培养细胞的组织结构;采用免疫荧光法检测构建的HCECs单细胞片中闭锁小带蛋白-1（ZO-1）和Na＋-K＋-ATP酶的表达. 结果 体外培养的HCECs呈典型的六角形,内皮特异性标志物ColⅧ和NSE mRNA表达阳性.脱细胞APCS呈白色透明状,苏木精-伊红染色显示APCS中无角膜细胞,但角膜胶原纤维排列规则.第2代HCECs复水后可在APCS上生长并贴附,培养后7d融合成单层细胞片,细胞片上HCECs的细胞密度为（2 694± 143）/mm2.构建的HCECs片中内皮细胞泵功能相关蛋白ZO-1和Na＋-K＋-ATP酶均呈阳性表达,呈红色荧光. 结论 25％ESC-CM可促进HCECs的生长并维持细胞的正常形态,APCS可为HCECs片的构建提供支架和较好的生存微环境.在APCS形成的HCECs单细胞片可表达HCECs泵功能,是角膜移植的良好供体.

脱细胞猪角膜基质作为植片的深板层角膜移植治疗感染性角膜溃疡的临床观察

目的比较脱细胞猪角膜基质与新鲜角膜组织作为植片的深板层角膜移植手术治疗感染性角膜溃疡的临床疗效。设计回顾性病例系列。研究对象2015年11月～2016年9月在北京佑安医院就诊的10例病变深度未累及后弹力层的感染性角膜溃疡患者。方法回顾性分析气泡辅助下的深板层角膜移植手术资料,其中使用脱细胞猪角膜基质材料和新鲜角膜组织材料治疗的患者各5例。比较两组患者术后1年最佳矫正视力(LogMAR)、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况。主要指标术后1年患者的最佳矫正视力(LogMAR)、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况。结果在随访期间,两组所有植片均保持透明,植片生存率为100%。术后1年,脱细胞角膜基质组和新鲜角膜组的视力分别为0.53±0.21和0.33±0.06(P=0.184),眼压分别为(8.00±2.00)mmHg和(10.33±0.58)mmHg(P=0.124),球镜度分别为(-4.50±4.21)D和(-1.25±0.75)D(P=0.258),角膜平均曲率分别为(47.59±5.40)D和(44.51±1.87)D(P=0.403),散光度分别为(-5.52±1.97)D和(-5.14±1.66)D(P=0.812),内皮细胞数分别为(1272.67±387.63)个/mm^2和(1550.33±232.69)个/mm2(P=0.347),角膜厚度分别为(439.33±67.86)μm和(534.00±14.42)μm(P=0.077),眼轴长度分别为(23.53±0.91)mm和(23.55±1.56)mm(P=0.981)。角膜共聚焦显微镜显示,脱细胞猪角膜基质组的角膜上皮细胞可以完全覆盖植片,基底细胞和翼状细胞形态和密度与新鲜角膜组织接近,但在基底细胞下方可见高反光的沉着物,基质层细胞的密度明显低于新鲜角膜组织,并且在内皮细胞与深基质层之间仍可见脱细胞纤维排列。结论脱细胞猪角膜基质具有良好的生物相容性,当缺乏新鲜角膜材料时,用于替代治疗感染性角膜溃疡可以取得满意的效果。

一种新型脱细胞猪角膜基质载体支架的制备及其鉴定研究

为了获得基于异种角膜材料的理想组织工程角膜载体支架,首次建立了脱氧胆酸钠(SD)和原钒酸钠(SO)联合处理的技术方法,利用新鲜猪角膜进行了脱细胞角膜基质(aPCS)的制备及其鉴定研究。用角膜板层刀从新鲜猪角膜中切下厚度450μm的角膜片,分别选用SD联合SO、十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100的去细胞处理方法制备出SD-aPCS、SDS-aPCS和Triton-aPCS共3种支架,利用外观照相、分光光度计、石蜡切片苏木紫-伊红(HE)染色、冰冻切片DAPI和阿利新蓝染色检测了其理化性质和组织结构;对SD-aPCS进行扫描和透射电镜鉴定后,进而利用噻唑蓝(MTT)、石蜡切片HE染色、冰冻切片DiI荧光观察以及免疫荧光细胞化学染色评估了其对非转染人角膜基质(ntH CS)细胞的毒性与生物相容性。检测结果发现,3种aPCS的细胞脱除干净且在干重和含水量上没有显著差异;其中,SD-aPCS的透明性与糖胺聚糖(GAG)含量最高、SDS-aPCS次之、Triton-aPCS最低;除Triton-aPCS的组织结构出现了明显的紊乱外,SD-aPCS和SDS-aPCS的组织结构均排列规则。在电镜下,SD-aPCS的前弹力层表面平整、无裂痕,板层结构和胶原纤维超微结构正常;此外,SD-aPCS浸提液对ntH CS细胞没有毒性作用,注射接种到SD-aPCS支架内的ntH CS细胞与支架嵌合紧密,随体外培养时间的延长而逐渐伸展和迁移,且细胞仍保持有其固有标志蛋白—波形蛋白,细胞连接蛋白—间隙连接蛋白-43和整联蛋白,以及膜运输蛋白—钠钾泵的阳性表达。由此可见,利用SD联合SO的方法所制备SD-aPCS具有理想的理化性质、组织结构和生物相容性,可作为一种理想的载体支架用于组织工程角膜的体外构建及其相关应用研究。

猪脱细胞角膜基质人板层角膜移植术后植片上皮化的临床观察

目的:观察猪脱细胞角膜基质进行人板层角膜移植术后角膜植片上皮化的临床过程。方法:收集2017年1月至2018年1月在佛山市第二人民医院经药物治疗无效的感染性角膜炎患者5例。采用脱细胞角膜基质(商品名:艾欣瞳)行板层移植术,以对侧眼为对照。术后3 d,7 d,1个月,3个月,6个月对患者进行随访,在裂隙灯显微镜下观察移植后植片上皮化完成过程。术后1,3,6个月共聚焦显微镜观察植片上角膜上皮细胞密度及上皮下神经纤维修复情况。结果:脱细胞角膜基质板层角膜移植术后3 d开始出现上皮化,术后10d上皮化逐步完成,但角膜上皮排列疏松,荧光素染色仍有点状染色。激光扫描共聚焦显微镜检查结果显示:术后1,3,6个月角膜上皮细胞排列规则、紧密,与对侧眼比较角膜上皮细胞密度差异无统计学意义(P>0.05)。结论:应用脱细胞角膜基质行板层角膜移植术后植片上皮化过程能够顺利完成。

种植人骨髓间充质干细胞的猪角膜板层移植治疗兔角膜损伤的初步研究

目的研究种植人骨髓间充质干细胞(MSCs)的猪角膜基质治疗兔角膜损伤的可能性。方法用全骨髓贴壁法分离纯化人MSCs并传代,流式细胞仪检测免疫表型及诱导成脂、成骨分化鉴定。12只新西兰白兔随机分为2组,实验组取第3代MSCs接种于去上皮的猪角膜基质上,培养4 d后移植到广泛损伤的兔角膜上,对照组单纯移植去上皮猪角膜基质。术后2、4、8周,取各实验眼行组织学检查,观察移植的MSCs及猪角膜基质的存活、转归及移植局部的反应。免疫组织化学、免疫荧光染色检测移植后角膜上皮细胞角蛋白12的表达。结果培养获得的MSCs中CD29阳性者占95.97%,CD44阳性者占96.49%,CD90阳性者占92.79%,CD105阳性者占94.66%,CD34阳性者占0.59%,CD45阳性者占0.36%,符合MCSs的免疫表型,并可以诱导成脂及成骨分化。实验组MSCs接种到去上皮猪角膜基质后贴附、生长迅速,术后植片在植床上存活良好,无排斥反应,角膜较对照组透明,新生血管少,而对照组在移植后发生排斥反应。实验组角膜免疫组织化学及免疫荧光染色均检测出CK12阳性细胞。结论种植MSCs的猪角膜基质移植到损伤兔角膜后可以存活,MSCs可以分化为角膜上皮样细胞,具有构建组织工程角膜的潜能。

以猪角膜脱细胞基质为载体培养人脐静脉内皮细胞构建实验性角膜后板层

目的:探讨以异种后弹力膜/基质为载体诱导人脐静脉内皮细胞向角膜内皮细胞分化的可行性及移植术后在活体的生理功能。方法:体外分离培养脐静脉内皮细胞作为诱导移植的种子细胞;取当地质检合格的猪眼球以直径6.2 mm、厚100μm、冷冻脱水进行角膜深板层载体的制备;接种经CM-DiI荧光标记的第2～3代人脐静脉内皮细胞于载体的后弹力层面,体外培养7～10 d行细胞形态、密度、组织学和扫描电镜观察,待细胞与后弹力层面融合形成单层后,用于兔角膜移植。受眼:正常健康新西兰大白兔24只(24眼),实验组(人脐静脉内皮细胞移植组)12眼,对照组(单纯猪角膜深板层移植组)12眼,全角膜范围去除术眼内皮细胞,实施移植手术。结果:人脐静脉内皮细胞在猪后弹力膜/基质载体上贴附生长,形成紧密连接的单层,形态近似六角形,呈铺路石状分布,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。术后8周实验组角膜基本透明,周边角膜略有水肿。对照组单纯猪角膜深板层移植后,移植角膜明显水肿、混浊。结论:以异种角膜后弹力膜/基质为载体培养的人脐静脉内皮细胞,行异种异体移植后,能够在活体上成活,并能维持角膜透明,具有正常角膜内皮细胞的生物学功能。深板层角膜内皮移植术是体外培养血管内皮细胞移植的一种有效术式。

使用猪角膜脱细胞基质的人板层角膜移植治疗真菌性角膜炎的临床观察

目的:观察猪角膜脱细胞基质构建的生物角膜支架用于人角膜板层移植术治疗药物难以控制的浅层真菌性角膜炎的效果。方法:对2015-06/2016-03我院收治的16例16眼真菌性角膜炎患者的临床资料进行回顾性分析。16例真菌性角膜炎进行猪角膜脱细胞基质移植,术后随访6mo。对患者术后视力、角膜植片情况、并发症及复发情况进行分析。结果:术后7~10d植片角膜上皮化。16例病例术后1mo角膜水肿,1mo后角膜水肿消失,角膜逐渐透明。术后1mo有2例出现术眼角膜上皮缺损,药物治疗均恢复。术后出现眼压高3例,给予降眼压治疗后眼压控制。随访期间未出现角膜溶解、感染复发、排斥现象。术后1、3、6mo视力分别为1.27±0.22,1.11±0.13,0.79±0.22,术后视力均较术前明显提高,术后1mo视力与术前相比无统计学差异(P=0.06),术后3、6mo视力与术前相比具有明显统计学差异(P=0.01、0.001);其中术后3mo与术后1mo视力相比无明显提高,结果无统计学差异(P=0.11),而术后6mo视力较术后1、3mo均有明显提高,结果具有显著统计学差异(P<0.001)。结论:猪角膜脱细胞基质移植治疗真菌性角膜炎是安全、有效的方法。

利用猪角膜脱细胞基质行板层角膜移植手术治疗感染性角膜炎的临床研究

目的评价利用猪角膜脱细胞基质行板层角膜移植手术治疗感染性角膜炎的安全性和有效性。方法采用前瞻性系列病例观察研究方法,纳入了2018年5月~2019年4月本院收治的感染性角膜炎15例(15眼),使用猪角膜脱细胞基质行板层角膜移植手术。观察指标主要包括感染控制情况、角膜透明度、新生血管形成、最佳矫正视力(BCVA)及并发症等,随访时间为6个月。结果术后6个月时15例角膜感染均得到控制,感染控制率为100%。术前及术后不同随访时间点间角膜植片透明度评分的总体比较差异有统计学意义(χ^(2)=38.43,P<0.01)。术前及术后不同随访时间点间角膜新生血管评分的总体比较差异有统计学意义(χ^(2)=11.05,P=0.026)。术前、术后1个月、术后2个月、术后3个月和术后6个月的平均视力(logMAR)分别为2.08±0.45、1.92±0.50、1.71±0.51、1.52±0.62、1.13±0.46。术后3个月和术后6个月的平均视力与术前相比,差异均有统计学意义(t=2.954,P=0.012;t=8.093,P<0.01)。术后6个月,前节光学相干层析成像(OCT)显示出良好的层间愈合;共聚焦显微镜检查可探及植片内长入的上皮下神经纤维及基质细胞。术后发生1例角膜上皮愈合延迟,1例角膜移植排斥,1例术后继发性高眼压,2例角膜缝线松脱。结论猪脱细胞基质材料应用于治疗感染性角膜炎患者是安全和有效的。作为替代材料对患者进行角膜移植可有效缓解同种异体角膜供体的匮乏,其远期临床价值还需进一步研究与探讨。

生物工程角膜板层角膜移植在真菌性角膜溃疡患者中的应用

目的探讨生物工程角膜板层角膜移植在真菌性角膜溃疡患者中的有效性及安全性。方法选取44例真菌性角膜溃疡患者为研究对象,根据使用的角膜材料分为生物工程组[采用脱细胞猪角膜基质(APCM)进行板层角膜移植,20例]和人供体组(采用人供体角膜材料进行板层角膜移植,24例)。比较两组术后不同时间角膜植片透明度评分、最佳矫正视力(BCVA)和术后角膜上皮愈合时间、术后并发症及复发率。结果术后1、3、6、12个月,随着时间的延长两组角膜植片透明度评分均逐渐降低,术后1、3、6个月生物工程组角膜植片透明度评分高于人供体组(P<0.05),但术后12个月两组角膜植片透明度评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后3、6、12个月,随着时间的延长两组患眼BCVA均逐渐增加,但生物工程组患眼术后3、6、12个月的BCVA均低于人供体组(P<0.05);两组角膜上皮愈合时间及术后角膜上皮愈合延迟、角膜植片排斥、角膜植片溶解、新生血管长入角膜植片4项并发症发生率和术后复发率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以APCM为材料进行板层角膜移植治疗真菌性角膜溃疡临床效果好,安全性高,可作为生物工程角膜应用于角膜病致盲的治疗。

诱导人脐带间充质干细胞分化为角膜上皮样细胞的研究

背景眼表疾病导致的角膜盲已成为全球致盲性角膜疾病中的主要原因之一。随着组织工程技术的发展和进步，组织工程角膜为眼表疾病的治疗开辟了新的途径。目的观察体外培养的人脐带间充质干细胞（UC—MSCs）移植到兔角膜基质后的分化发育情况，探讨人UC-MSCs分化为角膜上皮细胞以及治疗兔角膜损伤的可行性。方法获取人脐带组织，采用Ⅳ型胶原酶消化法分离纯化人UC—MSCs并传代，取第3代细胞用于扩增和实验。流式细胞仪检测细胞的免疫表型及诱导成骨分化鉴定。24只新西兰大白兔按随机数字表法随机分为2个组，将人UC—MSCs接种于去上皮的猪角膜基质上，培养4d后行实验组兔左眼板层角膜移植；对照组以相同的手术方法单纯移植去上皮猪角膜基质。术后对角膜定期行活体激光共焦显微镜检查，并分别于术后2、4、8周摘除各组实验眼行组织病理学和免疫荧光检查，评价移植到兔角膜基质的人UC-MSCs的存活、分化以及移植局部的反应等；应用免疫荧光技术检测移植后角膜上皮细胞中角蛋白3（CK3）、CKl2以及转运蛋白G超家族成员（ABCG2）的表达。结果消化培养的人UC—MSCs呈圆形，细胞胞体较大，贴壁后细胞呈长梭形。培养获得的人UC—MSCs的细胞表型CD105^＋／CD29^＋／CD44^＋／CD34^-／CD45^-，并可诱导分化为成骨细胞。实验组人ISC—MSCs接种到去上皮猪角膜基质后贴附良好、生长迅速，术后植片在植床上存活良好，种植了人UC-MSCs的去上皮猪角膜移植到兔眼，可见实验组受体角膜较对照组透明，未见明显新生血管，在活体共焦显微镜下可见新生的角膜上皮样细胞，未发生免疫排斥反应。免疫荧光检测可见在重建的角膜上皮层检测到CK3及CKl2的阳性表达，而未见ABCG2的表达。结论将种植了人UC—MSCs的猪角膜基质移植到损伤的兔角膜后，人UC—MSCs可以存活、增生并分化为角膜上皮样细胞，可用于修复甚至重建损伤的角膜表层。

生物工程角膜移植对真菌性角膜溃疡的临床疗效及其对组织形态学的影响

目的探讨生物工程角膜移植对真菌性角膜溃疡的临床疗效及对组织形态学的影响。方法选取2017年10月至2019年5月遂宁市中心医院收治的30例真菌性角膜溃疡患者为研究对象。采用脱细胞猪角膜基质构建的生物角膜对患眼进行角膜板层移植术,以对侧眼为对照。随访12个月,观察移植后移植物上皮化完成情况,利用共聚焦显微镜观察移植物角膜上皮细胞、内皮细胞密度和上皮下神经纤维修复情况。结果术后随访中患者均未再发现孢子和菌丝,术后1年,术眼角膜表面曲线光滑度与对侧眼相当。术后角膜上皮愈合时间为3 d至1周,随时间延长,患者眼部刺激性症状评分、新生血管评分、移植物透明度评分均呈下降趋势。术后3、6、12个月,术眼上皮细胞密度与对侧眼比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。术后3、6、12个月,术眼内皮细胞密度均显著低于对侧眼(均P<0.05)。术后6个月,术眼上皮下神经纤维密度最低(P<0.05),术后12个月,术眼上皮下神经纤维密度逐渐增加,但仍显著低于对侧眼(P<0.05)。结论采用生物工程角膜行板层角膜移植治疗真菌性角膜溃疡的临床效果显著,安全性高,患者预后较好。

生物工程角膜治疗真菌性角膜炎的临床效果

目的观察生物工程角膜治疗真菌性角膜炎的临床效果。方法选取15例(15眼)真菌性角膜炎患者,均使用脱细胞猪角膜基质构建的生物工程角膜施行板层角膜移植手术治疗。观察患者术后早期(术后1个月)恢复情况、术后远期效果及并发症发生情况,比较患者手术前后的视力。结果随访期间,所有患者眼部感染均得到控制,无感染复发,自觉症状均在术后1~2周内逐渐改善。除1例角膜植片在术后2个月发生溶解以外,其余患者的生物角膜维持在基本透明的状态,视力均有不同程度的提高。结论板层角膜移植术中采用生物工程角膜治疗真菌性角膜炎安全、有效。

生物角膜用于人角膜板层移植术后的临床疗效及激光扫描共焦显微镜动态观察

背景近年来由于角膜供体材料的缺乏，异种角膜移植研究逐渐受到研究者的关注，猪角膜脱细胞基质构建的生物角膜支架具有良好的生物相容性并已制备成生物角膜材料，但其用于人眼角膜移植后的临床效果及其组织形态学变化特征尚不清楚。目的观察用生物角膜进行人板层角膜移植术后的临床效果，并利用激光扫描共焦显微镜进行活体动态观察，评估生物角膜作为新型角膜替代材料进行人眼角膜板层移植的可行性。方法采用前瞻性系列病例观察研究方法，于2014年2—8月在河南省立眼科医院纳入药物治疗无效的感染性角膜炎或陈旧性角膜白斑患者15例15眼，包括真菌性角膜炎4例，细菌性角膜炎1例，混合感染性角膜炎9例，陈旧性角膜白斑1例。采用猪角膜脱细胞基质构建的生物角膜行患眼生物角膜板层移植术，以术眼的对侧正常眼作为对照。分别于术后3d、7d、1个月、3个月、6个月、9个月和12个月对术眼进行随访，对植片愈合情况进行评分，随访时间为1年。疗效指标主要包括角膜透明度、新生血管形成、角膜植片有无溶解或感染复发、最佳矫正视力（logMAR）。分别于术后3、6、9和12个月利用激光扫描共焦显微镜对角膜进行动态观察，记录和分析移植后角膜上皮和内皮细胞的形态和密度、角膜基质的形态特征以及角膜上皮下神经纤维的恢复情况。结果术眼术后3d早期出现角膜水肿等炎症反应，术后7d炎症反应消退。术后1个月植片透明，随访期间未出现角膜溶解、感染复发现象。术后6个月时1例患者出现青光眼，术后12个月时1例患者发生排斥反应。术眼术前及术后不同时间点间logMAR、角膜透明度评分、角膜新生血管评分的总体比较差异均有统计学意义（X2=92．63、59．37、10．50，均P〈0．05），其中术后视力、角膜透明度均较术前明显改善，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。激光扫描共焦显微镜检查结果显示，术眼术后受体角膜上皮细胞逐渐覆盖植片，完成正常的上皮化，角膜上皮细胞形态接近对侧正常眼，但角膜内皮细胞体积大于对侧眼，而植片角膜基质中无细胞生长，明显与对侧眼角膜基质不同；术后6个月时8例患者植片内有上皮下神经纤维长入，但神经纤维走形弯曲，密度明显低于对侧正常眼。术后不同时间点角膜上皮细胞密度总体比较差异均无统计学意义（F=1．48，P=0．22）。对侧正常眼、术眼术后3、6、9和12个月角膜内皮细胞密度分别为（2542±119）、（1895±129）、（1869±135）、（1854±101）和（1844±103）个／mm2，术眼术后各个时间点角膜内皮细胞密度均明显低于对侧正常眼，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；术后6、9和12个月角膜上皮下神经纤维密度值分别为（1．26±0．13）、（3．62±0．81）和（5．98±0．44）mm／mm2，均明显高于前1个时间点的测定值，差异均有统计学意义（t′=-8．16、-7．24，均P=0．00）。结论用生物角膜行人眼角膜板层移植术后植片即可长期存活，重建眼表结构，改善患者视力，可替代人角膜供体材料。

非人供体角膜植片的研究进展

角膜移植是治疗终晚期及严重角膜病患者的最终选择。近年来角膜成分移植术逐渐兴起,使角膜移植手术已不再局限于传统的穿透性角膜移植和板层角膜移植。但人供体角膜作为角膜移植术的唯一来源,仍让角膜病患者的处境艰难。世界各地学者为缓解角膜匮乏这一全球性问题,致力于研究非人供体角膜植片的来源及其应用前景。本文对目前非人供体角膜植片的研究进展、适应证、术后并发症等进行综述。