猪链球菌细胞外蛋白因子Ef基因的克隆与原核表达

采用分子克隆手段,将Ef全长基因克隆至表达载体pGEX-6p-1的Ptac启动子下游,电击转入大肠杆菌E.cohi BL21(DE3)中表达。经PCR扩增和蛋白质凝胶电泳鉴定,表明该EF蛋白获得有效表达,为进一步构建猪链球菌Ⅱ生物工程疫苗提供前期载体。

猪链球菌2型四川人源分离株ZYH24细胞外蛋白因子的原核表达及活性分析

目的克隆、表达猪链球菌2型四川人源分离株ZYH24细胞外蛋白因子基因片段,分析蛋白活性。方法根据GenBank S.suis2epf基因序列设计引物,克隆ZYH24株epf基因片段并进行序列分析;构建原核表达质粒pGEX4T-2-epf,在大肠杆菌中诱导带有谷胱苷肽转移酶(GST)标签的融合蛋白EF-GST的表达;亲和层析法纯化融合蛋白EF-GST,用凝血酶切除重组蛋白中的GST,获得纯化的EF抗原;SDS-PAGE和Western blot分析诱导表达及纯化的重组蛋白。结果序列分析表明,获得的epf基因片段长895bp;原核表达的融合蛋白EF-GST分子量约62000,凝血酶处理后的EF抗原分子量约35000,两者均可与制备的EF多克隆抗血清发生特异性反应。结论成功克隆了人源分离株ZYH24epf基因片段,在原核系统实现高效的功能性表达,为开展EF蛋白的相关研究奠定了基础。

猪链球菌2型胞外蛋白因子基因片段的克隆与表达

根据猪链球菌 2型 (Streptococcus suis type 2 )胞外蛋白因子 (extracellular factor protein,EF)基因序列 ,设计和合成 1对引物 ,以猪链球菌 2型江苏 98分离株 HA980 1的基因组 DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增 epf基因 12 0 7～16 75 bp序列 ,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体 p GEX- 6 p- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游 ;将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1 株 ,经 IPTG诱导可表达相对分子质量约为 4 10 0 0的融合蛋白。用 EF抗血清进行的免疫印迹分析表明 ,含有 epf基因 12 0 7～ 16 75 bp序列编码的肽段的融合蛋白不能被 EF抗血清识别。

猪链球菌3种毒力因子多细胞表位靶向DC重组蛋白DC3pep-SDZ的构建及安全性检测

为了研制2、3、9型猪链球菌(SS)通用的重组亚单位疫苗,本研究通过生物信息学软件对SS分泌型核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)、锌转运蛋白(ZnuA)3种毒力因子的蛋白质一级结构、B细胞及辅助T(Th)细胞抗原表位、亲疏水性及抗原性、二级结构进行综合分析后,预测获得了SsnA、DLDH和ZnuA具有亲水性和较好抗原性的B/Th细胞表位,将它们与12聚体树突状细胞靶向肽(DC3pep)序列串联后获得了重组氨基酸序列DC3pep-SDZ。经蛋白质理化分析DC3pep-SDZ分子质量约为44 ku,理论等电点(pI)为4.65,平均亲水性为-0.462,为亲水性蛋白。由生物公司构建重组原核表达载体pET28a-DC3pepSDZ,转化感受态细胞后经IPTG诱导表达后经western blot鉴定重组蛋白以可溶形式表达。表达产物利用亲和层析镍柱纯化,SDS-PAGE结果显示得到44 ku的纯化目的蛋白,纯化浓缩后经BCA蛋白浓度测定试剂盒检测,浓度为5.60 mg/mL。利用不同浓度纯化重组蛋白对2%猪红细胞悬液进行体外溶血试验,并对PK15、IPEC-J2细胞进行毒性试验,检测重组蛋白的生物安全性。体外溶血试验结果显示在5μg/mL~500μg/mL浓度范围内,DC3pep-SDZ蛋白对2%猪红细胞悬液溶血率低于5%;细胞毒性试验结果显示经500μg/mL DC3pep-SDZ蛋白孵育后,PK15与IPEC-J2细胞的相对增殖率(RGR)分别为98.5%和99.6%,与对照组RGR相比均无显著差异。表明,重组蛋白无明显毒性作用。本实验首次构建并表达了重组蛋白DC3pep-SDZ,该蛋白生物安全性良好,为后续分析其免疫保护效果、研发2、3、9型SS重组亚单位疫苗奠定基础。

用生物信息学方法预测2型猪链球菌98HAH33细胞壁结合蛋白

目的为预测已公布基因组序列的2型猪链球菌(SS2)98HAH33株的细胞壁结合蛋白,以研究它们在SS2致病过程中的作用。方法首先从GenBank获取由SS28HAH33基因组推测蛋白质氨基酸序列,然后根据分选酶底物的结构特征,采用"三部分模式"法鉴别分选酶底物;采用手动方法寻找在具有I型信号肽的蛋白质中具有LysM域、WxL域、胆碱结合域、GW域或S层同源域的蛋白质;利用InterProScan和BlastP服务器,对鉴定的蛋白质进行功能分析。结果共预测出9种分选酶底物,2种具有LysM域的蛋白。YP_001201232、YP_001201531和YP_001201656等3种已证实位于SS2菌体表面;其中YP_001201232为已知毒力因子OSF。另外4种蛋白质的功能分析表明,YP_001201484为糖苷酶,YP_001201544为枯草杆菌素样丝氨酸酶,YP_001199825和YP_001199755可能结合H因子,可能为新的毒力因子。YP_001200959、和YP_001201233等2种功能未知。结论提示SS2的多数分选酶底物可能为SS2的毒力因子,与致病过程相关。

猪链球菌2型主要毒力因子研究进展

猪链球菌2型的毒力因子主要包括荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)、溶血素(HLY)以及多种具有毒性作用的蛋白片段。荚膜多糖是猪链球菌2型抵抗巨噬细胞吞噬的重要物质,也是猪链球菌进行分型的标志。溶菌酶释放蛋白和细胞外因子多出现于高致病力的毒株中,MRP和EF阳性菌株一般具有较高的毒力。溶血素具有较强的细胞毒性作用,其对微血管内皮细胞的破坏作用有利于细菌在组织内的扩散。其他多种毒力因子虽也具有致病作用和免疫原性,但还有待于进一步研究。由于猪链球菌2型致病机理复杂,毒株表型多样,尚未发现可区分毒力株、弱毒力株和无毒力株的标志性因子。对猪链球菌2型的毒力因子进行深入研究,对于阐明猪链球菌2型的致病机理,寻找到快速有效的诊断治疗方法以及疫苗的构建都有重要意义。

猪链球菌2型国内分离株毒力相关蛋白的分析

提纯猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (muramini dase releasedprotein ,MRP)和胞外因子 (extracellularfacter,EF) ,制备其抗体供免疫转印之用。另提取猪源链球菌 1 7株国内分离株、1株德国分离株及 1株猪链球菌 2型人分离株的胞壁和胞外蛋白 ,经SDS PAGE ,与HA980 1株的MRP和EF的抗体作免疫转印。 1 1株MRP阳性 ,1 0株EF及EF 阳性 ,MRP及EF的分布存在 4种表型 :MPR+ EF+ (8 1 9) ,MRP+ EF (1 1 9) ,MRP+ EF- (1 1 9) ,MRP- EF- (1 0 1 9)。

检测猪链球菌2型毒力相关蛋白的ELISA法的建立

提纯猪链球菌 2型分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (MRP)和胞外因子 (EF) ,制备其抗体。用此抗体建立了Dot ELISA和间接ELISA检测法。分别以菌株ATCC35 2 46和HA980 1为阴性与阳性对照 ,检测 17株猪源链球菌和 1株猪链球菌 2型人分离株。结果显示 ,两种ELISA的检测结果一致 ,MRP和EF的阳性率均为 61% (11/18)。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子、基质金属蛋白酶-9和赖氨酸去甲基化酶6B在浸润性乳腺癌组织中的表达及其病理诊断价值

目的探讨浸润性乳腺癌组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和赖氨酸去甲基化酶6B(KDM6B)蛋白的表达及其与临床病理特征的关系,并分析3种蛋白的相关性及其在浸润性乳腺癌病理诊断中的价值。方法选择2014年1月至2017年12月河南中医药大学第五临床医学院/郑州人民医院病理科保存的124例浸润性乳腺癌患者的手术切除活检标本为研究对象,另选取同期保存的低级别导管内癌组织标本20例、高级别导管内癌组织标本27例、距离浸润性乳腺癌>1 cm处癌旁组织标本22例作为对照组。采用免疫组织化学法检测乳腺癌旁组织、低级别导管内癌、高级别导管内癌及浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的表达。分析EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的相对表达量与浸润性乳腺癌临床病理特征的关系;采用Spearman法分析浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN、MMP-9、KDM6B蛋白的相关性,受试者操作特征(ROC)曲线评估EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白对浸润性乳腺癌的诊断价值。结果高级别导管内癌和浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量显著高于乳腺癌旁组织和低级别导管内癌组织(P<0.05),KDM6B蛋白的相对表达量显著低于癌旁组织和低级别导管内癌组织(P<0.05);浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量显著高于高级别导管内癌组织(P<0.05),KDM6B蛋白的相对表达量显著低于高级别导管内癌组织(P<0.05);癌旁组织与低级别导管内癌组织中EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。EMMPRIN、KDM6B蛋白相对表达量与浸润性乳腺癌患者的年龄、肿瘤部位和肿瘤直径无关(P>0.05),MMP-9蛋白相对表达量与浸润性乳腺癌患者的年龄和肿瘤部位无关(P>0.05)。EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的相对表达量与浸润性乳腺癌的世界卫生组织(WHO)分级、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),MMP-9蛋白的相对表达量与浸润性乳腺癌的肿瘤直径有关(P<0.05)。浸润性乳腺癌WHO分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中,EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量依次升高,KDM6B蛋白的相对表达量依次降低(P<0.05);浸润性乳腺癌淋巴结有转移组EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量显著高于无淋巴结转移组(P<0.05),KDM6B蛋白的相对表达量显著低于无淋巴结转移组(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期组EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量显著高于Ⅰ~Ⅱ期组(P<0.05),KDM6B蛋白的相对表达量显著低于Ⅰ~Ⅱ期组(P<0.05)。在浸润性乳腺癌肿瘤直径≤2 cm、2~5 cm、>5 cm组中MMP-9蛋白的相对表达量依次升高(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN与MMP-9蛋白的表达呈显著正相关(r=0.990,P=0.000),EMMPRIN与KDM6B蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.606,P=0.000),MMP-9与KDM6B蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.612,P=0.000)。ROC曲线分析显示,EMMPRIN蛋白诊断浸润性乳腺癌的曲线下面积(AUC)为0.875[95%置信区间(CI):0.823~0.926,P<0.05],最佳界值为10.043,敏感度为79.0%,特异度为76.8%;MMP-9蛋白诊断浸润性乳腺癌的AUC为0.863(95%CI:0.808~0.917,P<0.05),最佳界值为10.070,敏感度为74.2%,特异度为76.8%;KDM6B蛋白诊断浸润性乳腺癌的AUC为0.267(95%CI:0.196~0.338,P<0.05),最佳界值为11.003,敏感度为71.0%,特异度为98.6%。结论EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白与浸润性乳腺癌的发生发展有关,检测EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的表达有助于浸润性乳腺癌的病理诊断及其浸润转移的临床判断。

猪链球菌2型毒力因子多重荧光PCR检测方法的建立与应用

本研究通过在扁桃体组织中添加猪链球菌2型菌后提取的DNA为模板，建立了检测猪链球菌2型毒力因子MRP和EF的多重荧光PCR检测方法，并对部分猪扁桃体和肌肉组织进行了检测。结果发现，本方法可以快速检测出组织内的致病性猪链球菌2型，且特异性强，灵敏度达到100CFU。采用本研究建立的方法对北京和江西部分屠宰场猪扁桃体及北京市售猪肉进行检测，没有发现致病性猪链球菌2型感染。本检测方法的建立，有利于快速确定人-猪链球菌感染原的致病性，这为疫情发生后，有针对性地采取紧急防控措施、保护消费者的健康和生命安全奠定了基础。

猪链球菌2型epf基因的原核表达及其蛋白纯化

为了克隆、表达SS2菌株epf基因片段,分析蛋白活性,根据GenBank SS2epf基因序列设计引物,克隆epf基因片段并进行序列分析,构建原核表达质粒pGEX4T-2-epf,在大肠杆菌中诱导带有GST标签的融合蛋白rEF-GST的表达;亲和层析法纯化融合蛋白rEF-GST,用凝血酶切除重组蛋白中的GST,获得纯化的EF抗原。经Western blot鉴定,EF可与SS2多克隆抗血清发生特异性反应。

Ⅱ型猪链球菌制病因子的研究概况

近年来许多研究者对II型猪链球菌致病因子进行了大量研究,其研究结果表明:II型猪链球菌的可能致病因子有荚膜多糖、、溶菌酶释放蛋白和细胞外因子、蛋白质片段、溶血素等,这些致病因子目前还没有确切的被证明,其致病机理也未查明,需作进一步的研究。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在巨噬和泡沫细胞中的表达

目的观察细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在单核向巨噬和泡沫细胞分化过程中的表达变化。方法体外诱导THP-1单核细胞分化为巨噬和泡沫细胞,应用Real-time RT-PCR和Western blot测定EMMPRIN基因和蛋白表达。结果单核细胞分化为巨噬细胞后EMMPRIN mRNA和蛋白表达均显著增加,当进一步分化为泡沫细胞时,EMMPRIN的表达与巨噬细胞比较无显著性差异。结论单核细胞向巨噬细胞的分化诱导EMMPRIN表达,而进一步向泡沫细胞分化对其表达无影响。

人膀胱癌组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达

背景与目的:基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)在恶性肿瘤的发生、浸润和转移中发挥关键作用,肿瘤细胞表达的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)司以诱导间质成纤维细胞合成MMPs,从而促进肿瘤的浸润和转移。本研究拟通过检测EMMPRIN在人膀胱癌组织和正常膀胱粘膜中的表达,探讨EMMPRIN在膀胱癌发生、浸润和转移中的作用。方法:应用免疫组化SP方法检测EMMPRIN在45例膀胱癌组织和9例正常膀胱粘膜中的表达,并与临床病理指标结合起来分析。结果;EMMPRIN蛋白定位于癌细胞的胞膜和胞浆,阳性率为73.3％,正常膀胱粘膜和肿瘤间质均为阴性表达。EMMPRIN在Ⅱ、Ⅲ级和术后复发组的阳性表达率分别为84.0％、84.6％和100％,高于Ⅰ级和无复发组(分别为14.3％和55.6％)(P<0.05);在淋巴结转移组的强阳性表达率(85.7％)高于无淋巴结转移组(23.7％)(P<0.05)。结论:EMMPRIN在人膀胱癌组织中过度表达,与膀胱癌的恶性程度有关,可作为判断膀胱 癌是否具备高侵袭转移潜能的指标。

体外与非体外循环冠状动脉旁路移植术围术期炎症细胞因子与肌钙蛋白的变化及意义

目的 探讨体外与非体外循环下行冠状动脉旁路移植术 (CABG)对患者围术期炎性反应及心肌损伤的影响。方法 6 0例行择期 CABG患者 ,随机分成体外循环下行 CABG组 (CCABG组 ,30例 )和非体外循环下行 CABG组 (OPCABG组 ,30例 ) ,分别于术前和术后 2、8、2 4、4 8h抽取中心静脉血 ,检测白细胞介素 6 (IL 6 )、IL 8、肿瘤坏死因子 α(TNFα)、肌酸激酶同工酶 (CK MB)、肌钙蛋白 I(c Tn I)等 ,并记录术后早期的各项临床指标。结果 CCABG组术后早期 IL 6、IL 8、TNFα、CK MB及 c Tn I均明显高于术前及 OPCABG组 ,OPCABG组患者手术过程中大部分指标无明显变化。结论 与 CCABG组相比 ,OPCABG组患者全身炎性反应及心肌损伤程度均明显减轻。

抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织肝细胞生长因子mRNA及细胞外信号调控蛋白激酶1/2和p38磷酸化的影响

目的:研究中药复方抗纤灵方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)所致肾纤维化大鼠肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因表达和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路的影响,初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法:雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵灌胃给药2周后检测血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氯(blood urea nitrogen,BUN)及梗阻肾羟脯氨酸含量;采用逆转录-多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测HGF mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法检测其受体c-Met蛋白表达及MAPK通路信号分子细胞外信号调控蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)和p38磷酸化情况。结果:与假手术组比较.模型组大鼠Scr、BUN及梗阻肾羟脯氧酸含量均显著增高;肾组织HGF mRNA水平显著下调,c-Met蛋白表达显著上调,且ERK1/2和p38明显磷酸化。中药干预后,BUN及羟脯氨酸含量显著降低,肾组织HGF mRNA水平明显上调,ERK1/2和p38磷酸化被显著抑制。结论:抗纤灵方可通过增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达及抑制肾组织MAPK通路分子ERK1/2和p38磷酸化以改善肾间质纤维化大鼠肾功能,减少其胶原含量。

急性冠状动脉综合征患者血小板表面细胞外基质金属蛋白酶诱导因子、糖蛋白Ⅵ水平与动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

目的:探讨急性冠状动脉(冠脉)综合征患者血小板表面细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)、糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)的水平与动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法:顺序选取138例冠心病患者,分为急性冠脉综合征组86例,稳定性心绞痛组52例,另选40例冠脉造影结果正常者为对照组。采用二次离心法提取血小板,流式细胞仪检测外周血血小板表面EMMPRIN和GPⅥ表达水平。为进一步研究,根据冠脉造影斑块形态特征分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型;并接受64层螺旋计算机断层摄影术(CT)冠脉成像检查,根据冠脉粥样斑块CT值分为软斑块、纤维斑块、钙化斑块,比较不同斑块形态及类型间EMMPRIN及GPⅥ表达水平变化。结果:(1)急性冠脉综合征组、稳定性心绞痛组血小板表面EMMPRIN、GPⅥ表达水平较对照组升高(EMMPRIN MFI:5.82±0.81、3.45±0.48 vs 1.35±0.15)、(GPⅥMFI:16.22±5.27、8.20±2.87 vs 4.14±1.17);且急性冠脉综合征组较稳定性心绞痛组升高明显,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(2)急性冠脉综合征组Ⅱ型斑块者、Ⅲ斑块者血小板表面EMMPRIN、GPⅥ表达水平较I型斑块者升高(EMMPRIN MFI:6.35±1.05、4.09±0.67 vs 2.45±0.27)、(GPⅥMFI:19.50±4.55、10.81±2.33 vs 5.89±1.28);Ⅱ型斑块者较Ⅲ型斑块者也有明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(3)急性冠脉综合征组软斑块者、纤维斑块者血小板表面EMMPRIN、GPⅥ表达水平较钙化斑块者升高(EMMPRIN MFI:6.18±1.01、3.87±0.56 vs 2.43±0.25)、(GPⅥMFI:19.14±4.27、11.08±1.94 vs 5.96±0.99);软斑块者较纤维斑块者也有明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(4)冠心病患者血小板表面EMMPRIN表达水平与斑块类型[95%可信区间(CI):-0.359^-0.206,标准化的回归系数(β):-0.211]呈负相关,与临床类型(95%CI0.893~1.034,β:0.893)呈正相关,血小板表面GPⅥ表达水平与斑块类型(95%CI-1.222^-0.586,β:-0.181)呈负相关,与临床类型(95%CI 3.576~4.164,β:0.960)呈正相关。结论:急性冠脉综合征组患者血小板表面EMMPRIN、GPⅥ表达水平与动脉硬化斑块的稳定性关系密切,两者是严重冠脉病变的相关危险因素,对于动脉硬化早期的诊断可能有一定预测价值。

体外循环中S-100蛋白和神经元特异性烯醇化酶的变化及其与炎性细胞因子的关系

目的 观察体外循环 (CPB)手术期间 S- 10 0蛋白和神经元特异性烯醇化酶 (NSE)的变化 ,探讨其与炎性细胞因子的关系。 方法 于 CPB前、复温即刻、主动脉开放和 CPB后 6、2 4小时采集 5 2例心脏病患者颈内静脉血 ,检测 S- 10 0蛋白和 NSE的浓度 ,并将其与炎性细胞因子白细胞介素 - 6 (IL- 6 )、白细胞介素 - 8(IL- 8)、肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)和诱导型一氧化氮合成酶 (i NOS)的浓度变化进行相关性分析。 结果 CPB开始后即有 S- 10 0和 NSE升高 (P<0 .0 5 ) ,在术后 6小时达到高峰 (P<0 .0 5 ) ,术后 2 4小时均恢复至术前水平 (P>0 .0 5 ) ,二者变化趋势相同 ;S- 10 0蛋白和 NSE的变化与炎性细胞因子及 i NOS浓度的变化有明显的相关性。 结论 CPB期间可出现 S- 10 0和NSE的一过性升高 ,此与炎症反应中释放的炎性细胞因子及 i NOS的过度表达和产生有关 ,而患者多无明显的脑损害临床表现。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与宫颈癌发生发展的关系

背景与目的:细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN,CD147)属于免疫球蛋白家族,在肿瘤细胞中表达增高。EMMPRIN表达增加与肿瘤浸润、转移、耐药以及某些肿瘤细胞的生存相关,但与宫颈癌的关系尚未阐明。本研究旨在确定EMMPRIN是否与宫颈癌发生、发展有关。方法:采用免疫组化法检测21例慢性宫颈炎、22例宫颈上皮内瘤变3级(cervical intraepithelial neoplasia,CIN3)、82例宫颈浸润癌原发灶和22例转移淋巴结中EMMPRIN的表达,并比较EMMPRIN在宫颈病变不同阶段的表达。结果:随着宫颈病变的发展,EMMPRIN过表达阳性率明显升高:宫颈浸润癌中过表达阳性率(52.4%)>CIN3(21.3%)>慢性宫颈炎(0%)(P=0.000)。宫颈原发灶EMMPRIN的过表达与盆腔淋巴结转移呈正相关,有转移组原发灶EMMPRIN过表达为72.7%,无转移组为45.0%,两组间差异有显著性(P=0.026)。在有淋巴结转移的患者中,原发灶和转移灶中EMMPRIN的过表达差异无显著性(72.7%vs54.5%,P=0.210)。EMMPRIN过表达与其他临床病理因素如临床分期、病理类型、组织学分级、脉管浸润、肿瘤大小、浸润深度等无明显相关性。采用Kaplan-Meier方法和Log-Rank检验,单因素分析生存率,宫颈癌EMMPRIN的过表达无任何预后价值,淋巴结转移、深肌层浸润和脉管侵犯提示生存预后差。所有上述因素进入COX比例风险模型多因素分析,采用BackwardLR方法,显示淋巴结转移与患者生存相关(P=0.006;HR=0.380;95%可信区间:0.190～0.763)。结论:EMMPRIN与宫颈癌侵袭转移相关,在宫颈癌的发生、发展中起着重要作用。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子降解途径的初步研究

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG-132对细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,CD147)表达的影响,探讨CD147的降解途径。方法:在SY5Y细胞中分别加入0,1,2.5和5μmol/L不同浓度剂量的蛋白酶体抑制剂MG-132作用24 h后,通过Western Blot和In-cell Western的方法检测CD147的相对含量;免疫荧光双标检测SY5Y细胞中CD147与泛素(ubiquitin)的表达及共定位情况。结果:在一定时间内,随着MG-132浓度的增大,CD147的含量相对增多;与0μmol/L组比较,5μmol/L组的CD147含量在两种实验方法中分别增加了约151.81%±36.26%(P<0.05)和76.43%±18.02%(P<0.05);CD147与泛素在细胞胞体中存在共定位的特征。结论:蛋白酶体抑制剂MG-132可增加CD147的含量;CD147可被泛素化。提示CD147可能通过泛素-蛋白酶体途径进行降解。