2型猪链球菌天津分离株的鉴定及其遗传特征分析

为了解天津市某猪场引起育肥猪神经症状的病原及其特性和遗传特征,本研究采集8份患病猪脑组织样品经细菌分离、形态学观察、gdh基因和cps2J基因的PCR扩增及序列分析,确定8份样品中的分离株均为同一2型猪链球菌(SS2),命名为TJS75。测定其生长曲线、并按照文献方法进行溶血性试验、黏附/侵入试验和对小鼠的致病性试验,分析该SS2分离株特性。结果显示,TJS75菌株经TSB培养6 h~15 h可达对数生长期,对绵羊血红细胞(RBC)具有崩解效果,可黏附并侵入PK-15细胞(黏附率和侵袭率分别为5.16%和7.90%),且感染TJS75株的BALB/c小鼠出现不同程度的行动迟缓、呼吸急促、精神萎靡和神经症状等,经测定其LD50为2.15×107cfu/mL。进一步采用高通量测序,并预测其毒力基因,分析该菌株的遗传特征,结果显示,TJS75菌株基因组全长2368195 bp,GC含量40.88%,含有2299个编码基因,其中有1822、1830和1077个基因分别注释于GO、COG和KEGG数据库,携带的16S r RNA基因序列与国内分离的SS强毒株98HAH33和05ZYH33的亲缘性较近,毒力基因的预测结果显示该菌株携带499种毒力相关基因(编码173种毒力相关因子),依据功能分类,这些毒力基因参与SS2的黏附和侵袭、溶血、促进铁转运、自溶酶的合成、降解胶原酶、唾液酸的合成等。本研究首次分离到携带MRP毒力因子的ST25型SS2,为深入开展SS2 TJS75株的致病机制研究提供了科学依据。

2型猪链球菌pnp基因缺失株与回补株的构建及其生物学特性的研究

为研究2型猪链球菌(SS2) pnp基因的生物学功能,本研究通过基因无痕操作技术构建SS2 05ZYH33pnp基因缺失株Δpnp以及回补株CΔpnp,经PCR和测序鉴定结果表明,正确构建了pnp基因无痕缺失株和回补株。将05ZYH33、Δpnp以及CΔpnp分别在不同温度(28℃、37℃、42℃)培养后测定OD_(600nm)值,绘制各菌株的生长曲线;利用革兰氏染色后经镜检及透射电镜观察各菌株的形态结构;通过滴定微孔平板结晶紫法检测各菌株的生物被膜形成能力;采用接触法分析各菌株的溶血特性;于含不同抗生素的THB平板上培养各菌株,分析各菌株的药物敏感性;于氧化条件与酸性条件下培养各菌株,通过统计存活率评价各菌株的氧化耐受与酸耐受能力。结果显示,缺失株的生长速率明显低于野生株和回补株,且在冷应激条件下的生存能力下降;与野生株和回补株相比,缺失株细胞壁肽聚糖层的结构更加松散、溶血能力下降、生物被膜形成能力下降、对不同类型抗生素的敏感性增强、抗氧化与抗酸能力均下降。上述结果表明pnp基因是SS2的一个重要调节因子,参与调节细菌对外界环境变化的适应能力。本研究为科学防控猪链球菌病以及研发新型抗菌药物奠定基础。

猪链球菌2型在感染兔体内的分布及其致病性研究

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病原体,猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)1954年首次在英国分离鉴定,在我国和其他养猪业发达的国家已多次流行,已成为危害我国养猪业和公共卫生安全的一个重要传染病。本研究用SS2-ZY05719株按10^(9)、10^(8)、10^(6)CFU腹腔注射途径人工感染健康的新西兰兔,3种剂量均可引起发病并死亡,新西兰兔临床症状明显,感染组平均体温升高1℃~2℃。同时分析了SS2在兔体各组织中的分布,结果显示,高剂量感染组出现明显的临床症状且快速死亡,感染剂量与发病程度有正相关性,对各试验组新西兰兔内脏组织进行检测发现,SS2主要集中在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑等组织中,不同组织器官中的细菌载量也存在着一定的差异,本文研究了SS2感染新西兰兔后的临床症状和各组织载菌量,为猪链球菌的防治及致病机理研究提供参考。

猪链球菌2型的主要毒力因子与先天性免疫逃逸机制

猪链球菌(SS)是一种重要的猪病病原体,能引起猪的高热、脑膜炎、败血症、关节炎和神经症状等。该菌有33个血清型,其中猪链球菌2型(SS2)流行最广、致病性最强,且存在感染人的风险,是一种重要的人兽共患病原菌,严重危害养猪业和公共卫生安全。目前已发现百余种SS2毒力因子,包括荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白、溶血素、烯醇化酶、核酸酶、菌毛蛋白、H因子、透明质酸裂解酶、表面蛋白、超氧化物歧化酶和其他代谢和调节因子等。这些毒力因子不仅与致病性密切相关,还在细菌的定殖、入侵、传播和免疫逃逸过程发挥重要作用。先天性免疫应答是病原微生物入侵机体的第一道防线,可以非特异性识别并清除病原微生物。然而,SS2已经进化出多种逃避宿主防御的机制,如逃脱中性粒细胞胞外陷阱、逃逸补体反应、侵袭中枢神经系统、逃逸活性氧的杀伤作用、促进肽聚糖的N-脱乙酰化和逃逸自噬等。目前,SS2的防控多依赖于抗菌药物和疫苗免疫,了解SS2的免疫逃避机制对开发高效的疫苗和靶向药物具有重要意义。

优化培养基组分提高猪链球菌2型NT15B菌株活菌数的研究

【目的】以猪链球菌2型NT15B菌株为研究对象,通过优化发酵培养基组分提高菌株活菌数,降低生产成本,为猪链球菌2型NT15B菌株的高密度培养及猪链球菌病疫苗的大规模生产和推广提供参考。【方法】试验以培养的猪链球菌2型NT15B菌株最高活菌数为筛选指标,通过单因素试验筛选菌株发酵培养基中碳源、氮源(有机氮源和无机氮源)、无机盐金属离子、磷酸缓冲液的最佳组分及浓度,并根据单因素筛选结果选择碳源浓度、有机氮源总浓度、有机氮源比例、磷酸盐缓冲液浓度4个因素各3个水平设计正交试验,并进一步进行多因素的筛选与验证。【结果】猪链球菌2型NT15B菌株发酵培养基最优条件为6.0 g/L蔗糖、1.0 g/L尿素、10 g/L酵母提取物YE7与20 g/L酵母蛋白胨Nucel 887混合氮源,1.0 g/L NaCl、9.58 g/L K_(2)HPO_(4)·3H_(2)O、1.09 g/L KH_(2)PO_(4)、1 mmol/L MgSO_(4)·7H_(2)O、0.3 g/L L-抗坏血酸。采用此最优组合,摇瓶培养猪链球菌2型NT15B活菌数最高达80.83×10^(8)CFU/mL,较优化前提高256.08%。【结论】优化后的培养基能有效提高猪链球菌2型NT15B菌株活菌数,降低了生产成本,为发酵罐水平的优化提供参考。

基于响应面分析的高抗原活性猪链球菌2型疫苗培养基的研制与效果评价研究

试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,SS2疫苗培养基菌液最大活菌数为1.09×10^(9) CFU/mL,是TSB培养基最大活菌数的2.41倍。测定SS2不同时间点的抗原活性发现,在SS2发酵培养过程中当活菌数达到最大值后的1~3 h内细菌的抗原活性最高。小鼠感染试验表明,SS2抗原活性最高时制备的灭活疫苗与商品化灭活疫苗相比具有更高的免疫球蛋白G(IgG)抗体效价和疫苗保护率。研究表明,采用研制得到的高抗原活性SS2疫苗培养基制备的灭活疫苗具有IgG抗体效价高、免疫保护力强的优点。

致脑膜炎猪链球菌2型的分子分型鉴定及其生物学特性

旨在了解猪源致脑膜炎猪链球菌2型的分子分型和致病性及其生物学特性。本研究从患病猪的脑组织中分离到1株猪链球菌PX0923,通过电镜观察、16S rRNA基因测序、多重PCR、PCR-RFLP和多位点序列分析(MLST)等方法对其进行血清型和分子分型鉴定,毒力基因、生物被膜形成能力、耐药基因检测、小鼠感染试验、抗生素和中药药敏试验分析分离株PX0923的致病性和药物敏感性。结果表明,分离菌株PX0923为革兰阳性菌,电镜下可见连续排列成链状的卵圆形菌体;PCR和16S rRNA基因系统发育树分析确定其属于猪链球菌2型;序列分型为ST7,与ST1型猪链球菌聚为一支;携带epf+/mrp+/sly+/gapdh+/fbps+/orf2+/sao+7种毒力基因,呈现α型溶血活性;感染小鼠可导致小鼠肺、脾和肝等多个器官不同程度的病变,出现了小鼠脑膜炎等与病猪类似的临床症状;半数致死量(LD50)为1.08×10^(9)CFU/小鼠,提示PX0923可引起小鼠脑膜炎。分离菌株对庆大霉素、卡那霉素、新霉素、阿米卡星等12种药物耐药,携带耐药基因:aadA1和bla-TEM,对中药全蝎和三七敏感。本研究分离到猪源猪链球菌PX0923为血清2型,MLST分型为ST7,其携带多种毒力基因和耐药基因,感染小鼠可引起脑膜炎等多组织损伤;对多种抗生素和中药全蝎、三七敏感。研究结果为猪链球菌的流行和溯源分析提供了分子生物学基础,对致脑膜炎猪链球菌感染的防控提供参考依据。

猪链球菌2型核糖核酸酶Ⅲ的克隆表达及催化特性分析

为了研究猪链球菌2型(SS2)核糖核酸酶Ⅲ(RNaseⅢ)的催化特性,利用大肠杆菌BL21(DE3)异源表达猪链球菌2型RNaseⅢ(SS-RNaseⅢ)并通过镍柱亲和层析的方法分离纯化。异源表达研究显示,重组蛋白RNaseⅢ大部分为可溶性表达;催化特性研究显示,RNaseⅢ主要依赖Mg^(2+)或Mn^(2+)发挥催化功能,并在不同离子浓度和pH值环境下具有不同的催化活性;底物特异性研究显示,RNaseⅢ特异性切割长度为30 bp的双链RNA,同时对内源性的rnc mRNA和5S rRNA具有良好的特异性。上述结果表明,相较于其他细菌RNaseⅢ,SS-RNaseⅢ具有独特的催化特性,为深入理解RNaseⅢ如何介导SS2致病机制奠定了基础。

广东省东莞市屠宰场猪群猪链球菌2型感染及环境污染状况调查

为了解屠宰环节猪群猪链球菌2型感染及环境污染情况,评估屠宰环节猪链球菌2型传播风险,在广东省东莞市所有的10个生猪屠宰场采集570份猪扁桃体、1200份环境拭子样品,以及120份猪胴体和120份猪内脏表面拭子样品,采用荧光PCR方法进行猪链球菌2型核酸检测。结果显示:猪扁桃体样品的猪链球菌2型阳性率为0.88%;屠宰环境拭子样品的阳性率为3.17%,其中待宰区为3.50%,屠宰区为8.50%,分割区为4.00%,屠宰工具为3.00%;在车间出入口的猪胴体和猪内脏表面拭子样品中检出猪链球菌2型阳性,其中猪胴体阳性率为0.83%,猪内脏阳性率为4.17%。结果表明,东莞市屠宰场猪群中存在猪链球菌2型感染,猪群携带的病原对屠宰加工环境以及屠宰加工产品可造成不同程度的污染。因而屠宰场存在传播猪链球菌2型的风险,需要加强对屠宰场环境及屠宰用具的清洗消毒以及相关职业人群的自身防护教育。

基于网络药理学探讨黄芩提取物防治猪链球菌2型感染的作用机制

【目的】探索黄芩提取物防治猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)感染的潜在作用机制。【方法】利用GEO数据库收集SS2感染不同细胞的转录组数据,通过GEO2R在线软件筛选差异表达基因,并利用STRING数据库与Cytoscape v3.8.2软件构建蛋白互作(PPI)网络并进行拓扑分析,通过GO功能和KEGG通路富集分析筛选SS2感染机体后核心蛋白、生物功能和信号转导途径变化。采用液相色谱质谱联用(LC-MS)分析并鉴定黄芩提取物的组成成分,利用Swiss ADME和SwissTargetPredication数据库筛选黄芩提取物的活性成分并预测其作用靶点;运用网络药理学方法将疾病靶点与黄芩提取物有效成分作用靶点相结合,进一步明确黄芩提取物抗SS2感染机制。通过分子对接和实时荧光定量PCR方法验证网络药理学预测结果的可行性。【结果】GEO数据库的2组基因芯片共鉴定出1308个SS2感染差异表达基因,PPI分析筛选出核心基因70个,GO功能富集分析显示显著富集条目主要涉及细胞因子介导的信号通路和对细胞因子刺激的反应等,KEGG通路富集分析涉及TNF、PI3K-Akt、JAK-STAT等信号转导途径。黄芩提取物共包括31个有效成分,包括汉黄芩素和黄芩苷等,其可能影响VEGFA、TNF和PPARG等核心靶点,涉及炎症反应、细胞凋亡和促进血管新生等多个生物功能和信号通路。分子对接结果显示,黄芩提取物中汉黄芩素和黄芩苷与TNF、PPARG和VEGFA有较好的结合能。实时荧光定量PCR结果显示,SS2感染后猪肺泡巨噬细胞(PAMs)细胞中CA9、PPARG、JUN、SCD、JAK3和VEGFA基因mRNA水平均显著上调(P<0.05),黄芩提取物干预后,上述基因mRNA表达水平均显著下降(P<0.05)。【结论】SS2感染机体后涉及细胞因子介导的生物过程、TNF等信号通路发生变化,黄芩提取物有效成分可能通过AMPK、PI3K-Akt、GFR、TNF等信号通路共同参与机体凋亡调控、炎症反应、血管生成等生物过程从而抗SS2感染。

4株广东地区2型猪链球菌耐药性及致病性研究

【目的】了解广东部分地区猪场疑似猪链球菌病的病原血清型、毒力基因特点、耐药性以及致病性。【方法】对4个疑似流行猪链球菌的猪场的送检病料进行细菌分离培养,采用形态学观察、革兰氏染色镜检、16S rRNA测序以及生化试验鉴定分离菌株,通过PCR试验对分离株进行血清型鉴定、毒力基因检测,采用药敏纸片扩散法对分离菌株进行药敏试验,通过活菌计数法绘制生长曲线,通过人工感染昆明小鼠评价各分离菌对小鼠的致病性。【结果】分离株在10%成牛血清的TSA培养基上长出圆形、灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐的小菌落。镜检出革兰氏阳性球菌,短链状排列,生化特性与猪链球菌相符,测序分析后确定为猪链球菌。血清型鉴定结果显示,4株分离菌均为2型猪链球菌,其中有3株的表型为mrp^(+)/epf^(+)/orf2^(+)/gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/gdh^(+),有1株表型为mrp^(-)/epf^(-)/orf2^(-)/gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/gdh^(+),共2种毒力基因表型。药敏结果显示,4株分离菌对红霉素、克林霉素、四环素、复方新诺明耐药,对青霉素、氨苄西林敏感。分离菌在4~6 h期间达到生长对数期,培养6 h到达活菌峰值。试验组小鼠在感染猪链球菌后出现精神沉郁、抱团、呼吸急促、尾部发青等症状,随后出现死亡,剖检有不同程度的病理变化。4株菌株半数致死量分别为4.47×10^(7)、3.57×10^(7)、5.77×10^(7)、1.22×108CFU。【结论】本研究成功分离鉴定出4株2型猪链球菌,4株分离株具有多重耐药性且具有较强的致病力。本研究结果可为广东地区猪链球菌的防控以及疫苗候选株的筛选提供理论参考。

低浓度阿奇霉素对猪链球菌2型蛋白表达、荚膜多糖与药物敏感性的影响

本研究通过探索低浓度阿奇霉素对猪链球菌2型蛋白表达、荚膜多糖与药物敏感性的影响,为进一步研究环境中低浓度抗生素对微生物的影响奠定基础。用低浓度阿奇霉素处理猪链球菌2型,利用蛋白质组学iTRAQ技术,筛选关键差异表达蛋白。同时测定猪链球菌2型的荚膜多糖含量和药物敏感性。结果显示,共鉴定到差异表达蛋白174个,占总鉴定蛋白的11.6%,多数差异表达蛋白参与催化和代谢过程,属于膜蛋白,其中,3个荚膜多糖蛋白、9个ABC转运蛋白、1个50 S核糖体蛋白、1个核糖体RNA甲基转移酶、1个DNA回旋酶上调表达;8个荚膜多糖蛋白、4个50S核糖体蛋白、4个30S核糖体蛋白、1个核糖体RNA甲基转移酶、1个DNA聚合酶IV下调表达。用低浓度阿奇霉素处理猪链球菌2型,发现其对多种抗生素的敏感性降低,存活下来的菌株,恢复正常培养后,药物敏感性恢复。用低浓度阿奇霉素处理猪链球菌2型,荚膜多糖含量也未发生大幅度变化。猪链球菌2型通过改变自身蛋白质组的表达量,以适应低浓度阿奇霉素的选择压力。与低浓度阿奇霉素共存时,猪链球菌2型开启外排泵系统,会增加细菌产生多重耐药的风险。

四川某猪场猪链球菌2型菌株的分离鉴定与耐药性分析

本研究采集某发病猪场的环境及病猪样品,通过细菌分离纯化、PCR鉴定为猪链球菌2型致病菌株,随后用纸片扩散法测定该菌株的耐药性,结果显示对青霉素类、头孢类(头孢噻呋)、喹诺酮类、糖肽类、氨基糖苷类、多肽类最为敏感,对头孢类(头孢西丁)、氯霉素类较为敏感,对磺胺类、碳青霉烯类(亚胺培南)、四环素类、大环内酯类耐药。选取敏感的10种药物进行最小抑菌浓度(MIC)值测定,结果显示:阿莫西林的MIC为8μg/mL,苯唑西林、头孢噻呋、氧氟沙星、万古霉素和庆大霉素的MIC为4μg/mL,恩诺沙星和恩拉霉素的MIC为1μg/mL。

新疆昌吉市2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在确定引起新疆昌吉市某规模化猪场仔猪死亡的病因,采集病死猪的脾脏、肝脏、心脏、肺脏、肾脏和淋巴结等组织样进行细菌病原分离鉴定。分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色镜检、生化试验、菌种鉴定及测序分析、血清型鉴定和药敏试验。结果显示,分离株在TSA营养琼脂上生长良好,镜检可见革兰氏阳性球菌,呈典型链状排列;生化特性与猪链球菌相符;PCR扩增得到大小为328 bp和689 bp的目的条带,分离株与猪链球菌同源性为100%,在系统进化树上与2型猪链球菌处于同一分支,为2型猪链球菌;分离株对恩诺沙星、环丙沙星、林可霉素、阿莫西林、头孢噻呋钠、氟苯尼考6种药物敏感,对磺胺嘧啶钠耐药。研究表明,该猪场仔猪感染了猪链球菌,恩诺沙星、环丙沙星等药物可用于临床治疗。

猪链球菌1/2及2型分离鉴定与耐药分析

为确诊贵州省某猪场猪的死亡原因,分析病原特征并提供用药指导。根据临床症状,采用相关病原特异性引物进行PCR扩增检测病死猪肺组织中的病原,针对阳性病原进行分离纯化、形态学、生化试验、16SrRNA序列分析、血清型和PCR-RFLP鉴定,通过药敏试验检测病原耐药性。在肺组织中均扩增出链球菌的特异性片段,形态学特性、生化特征、16S rRNA序列分析结果表明分离菌株均为猪链球菌,将其分别命名为GYSS73和GYSS74;通过分子血清定型和PCR-RFLP鉴定确定GYSS73为猪链球菌1/2型、GYSS74为猪链球菌2型。药敏试验结果为GYSS73的高敏药物是阿莫西林和头孢拉定;GYSS74的高敏药物是阿莫西林及青霉素。研究表明,猪发病死亡的原因是分别感染了猪链球菌1/2型和2型,可用高敏药物阿莫西林进行治疗。

猪链球菌2型和9型广东分离株的病原特性

2005年夏秋季从广东地区9例病猪中分离到2株猪源链球菌,均呈链球菌的特征形态,α溶血,生化试验结果相似,且都不与A^G链球菌群特异性血清发生凝集。经PCR及测序鉴定,一株为猪链球菌2型,另一株为猪链球菌9型。2型分离株的3个毒力基因均为阳性(sly+epf+mrp+),但对小鼠的毒力较低,2/10小鼠在接种细菌后第6~15 d发病致死,细菌在小鼠中的带菌时间至少15 d;9型分离株3个毒力因子均阴性(sly-epf-mrp-),但对小鼠有较强毒力,9/10小鼠在接种细菌后5 d内发病死亡,对小鼠的半数致死量为1.70×106CFU。表明广东地区致病性猪链球菌不仅存在2型,而且还有9型。

广东省猪链球菌2型菌株毒力基因及分子分型分析

目的掌握广东地区猪链球菌2型菌株毒力因子及分子分型情况,为诊断、治疗和制定防控措施提供科学依据。方法选取荚膜多糖(cps2J)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、溶血素(sly)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、胞外因子(ef)等5个猪链球菌2型主要毒力基因,分别设计引物对分离自病人、病猪的22株猪链球菌2型菌株进行PCR检测,并对菌株进行MLST分型分析。结果 22株菌分为5种毒力基因型,其中cps2J+/mrp+/sly+/gdh+/ef+型别为病人及病猪菌株所共有,cps2J+/mrp+/sly-/gdh-/ef+、cps2J+/mrp+/sly-/gdh+/ef+为病人菌株所特有,cps2J+/mrp-/sly+/gdh+/ef+、cps2J+/mrp-/sly-/gdh+/ef-为病猪菌株所特有;MLST分型结果显示,22株分为ST1、ST7和ST28三个型别,其中ST1、ST7型为病人和病猪菌株所共有,均同属于ST1克隆复合物,ST28型为病猪所特有。结论广东地区病人、病猪的猪链球菌2型菌株毒力基因型及MLST分子分型均呈现多样化,且部分型别为两者所共有,为阐明猪传染给人提供了直接的证据。

检测猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白(MRP)的PCR方法的建立

根据猪链球菌 2型的mrp基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 885bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白 (MRP)的PCR方法。用XbaⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 5 78bp和 30 7bp的 2个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的PCR检测结果均呈阴性 ;检测的敏感度可达 10 0个细菌。另外 ,对 9株从病猪体内分离的猪链球菌 2型菌株进行了检测 ,8株呈阳性 ;对 15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是 1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高 ,可作为MRP快速诊断和流行病学调查的手段。

猪链球菌2型上海分离株的病原特性鉴定

1997年底上海地区分离到一株猪链球菌 2型 ,结合培养特性、生化特性、血清定型及动物试验等对其进行了鉴定。其形态、染色及培养基本符合链球菌的特点 ,具有 β溶血。生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌A_G乳胶分型诊断液检测分离株 ,不在其检测范围。但能凝集猪链球菌 2型标准阳性血清。人工接种 4日龄乳鼠和猪有致病性。本试验对上海地区首次分离的猪链球菌 2型菌株进行了病原特性鉴定 ,证实猪链球菌 2型在上海存在 ,为今后防治猪链球菌病提供了可靠的科学依据。

四川资阳地区猪链球菌2型检测及其特性比较研究

目的对从四川省资阳及附近猪链球菌2型感染疫区采集的病料进行病原菌分离和特性比较研究。方法首先利用病原菌分离技术、多重定性PCR检测和荧光定量PCR检测技术进行病原菌的分离和鉴定;然后选取5株主要疫点代表菌株与1株国外参考菌株进行细菌药敏试验和实验动物腹腔接种感染试验;此外还对猪链球菌2型分离株基因组中的溶原性噬菌体进行了初步研究。结果(1)从采集的病料中分离到11株猪链球菌2型菌,都具有胞外因子(EF)和溶菌酶释放蛋白(MRP)两个特征性毒力因子;(2)6株试验菌株对氨苄青霉素、先锋必素、头胞克肟、乙酰螺旋霉素、万古霉素、复方新诺明和利福平等7种抗生素高度敏感。与国外参考菌株相比,资阳分离株具有链霉素抗性;(3)试验菌株对BALB/c鼠均具有一定的毒力,但毒力程度上有差异。资阳分离株449-1和国外参考株6#对鼠具有相同的强致死性(3/3死亡),资阳458分离株致死性较弱(0/3死亡),其它菌株具有中等强度的致死性。利用449-1、458和6#分离株进行家兔感染实验,各菌株均可引起家兔感染发病,死亡率分别是1/2、2/2和2/2;(4)国内首次获得了猪链球菌2型流行菌株匿藏着溶原性噬菌体的证据,该噬菌体与细菌毒力和适应性的关系有待深入研究。结论通过对资阳及附近地区猪链球菌2型分离株与国外分离株特性的比较研究,明确了流行菌株间在毒力和药物敏感性上存在着差异,细菌毒力差异表现为对动物种属的嗜性,并筛选出了猪链球菌病防治的可选择性药物。为进一步研究猪链球菌2型菌株的致病机理以及猪链球菌病的防治奠定了基础。